PCR和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体SPF鸡样品的检测   总被引：3，自引：0，他引：3  

邓显文  谢芝勋  刘加波  唐小飞  庞耀珊  廖敏  谢志勤 《广西农业科学》2005,36(1):48-50

应用聚合酶链式反应(PCR)和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体(MG)SPF鸡的样品进行检测，在第1～24d，所采集喉头及腭裂处粘液、喉气管组织、肺组织均可检出MG，阳性检出率要比传统分离鉴定方法高。在整个试验期不同样品的MG分离、PCR和多重PCR对样品(喉头腭裂粘液、喉气管、肺、气囊膜)的检出率分别为70％、81．3％、76．7％。试验结果表明了PCR和多重PCR对MG的检测不仅特异、敏感、快速，而且操作简便．对阳性样品检测的符合率100％，十分适合在临床上推广应用。  相似文献   

三种对虾病毒多重实时荧光PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

谢芝勋  谢丽基  庞耀珊  卢兆发  谢志勤  孙建华  邓显文  刘加波  唐小飞 《农业生物技术学报》2008,16(5)

根据基因库中白斑综合征病毒（WSSV）、传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）和桃拉综合征病毒（TSV）的基因序列,设计了WSSV 、IHHNV和TSV的三对特异性引物和三条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测WSSV 、IHHNV和TSV的三重实时荧光PCR方法。该方法特异性好,对WSSV 、IHHNV和TSV的检测敏感性分别达到20000、20和20000个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对WSSV 、IHHNV和TSV不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这三个病毒。对保存的45份经常规PCR检测仅为WSSV 、IHHNV和TSV阳性的样品进行二重实时荧光PCR检测,结果都为阳性,其中2份为WSSV和IHHNV混合感染。本研究建立的三重实时荧光PCR方法用于WSSV、IHHNV和TSV的检测具有特异、敏感、快速、定量等优点。  相似文献   

应用RT-PCR检测人工感染鸡体内禽呼肠孤病毒的动态分布     

廖敏  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  唐小飞 《广西畜牧兽医》2004,20(5):195-198

应用一步法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测禽呼肠孤病毒(ARV)在人工感染SPF雏鸡体内的动态分布情况。结果3日龄感染ARVS1133毒株后,12h就可以从关节、肝、脾等组织中检出病毒的RNA,感染后3—7天为检出的高峰期,至感染后27天还可从附关节组织检测到：在11种不同绀织中．均不同程度地检测到病原的核酸,其中以关节组织检出率最高(80．9%),其次为肝(67．6%)、脾(55.9％)、肾(50．0％),肛门棉拭子的检出率最低(13．2％),显示了ARV在感染机体内的动态分布情况。  相似文献   

糖蜜─尿素舔砖饲喂育成水牛的初步体会     

卢永  杨白云  关意寅  黄锋  方文远  唐小飞 《广西畜牧兽医》1995,(4)

糖蜜─尿素舔砖饲喂育成水牛的初步体会卢永，杨白云，关意寅，黄锋，方文远，唐小飞广西水牛研究所５３０００１前言广西农村养牛，冬春多数喂稻草等农作物秸秆和枯草，此时不仅营养摄入量不足，而且营养成分也不平衡，无法满足正常的生长、繁殖和泌乳的营养需要，牛的生...  相似文献   

新城疫病毒广西分离株M基因的克隆与序列分析     

唐小飞  谢芝勋  刘加波  邓显文  庞耀珊  孙建华 《动物医学进展》2009,30(3)

根据基因库中新城疫病毒M基因核苷酸序列,设计一对特异性引物,对2000年-2003年期间广西分离的11个NDV毒株的M基因进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定.结果表明,11个NDV广西分离株的M基因都为1 223个核苷酸,含有1个1 095 bp核苷酸阅读框(ORF),编码364个氨基酸.序列分析结果表明,这11个NDV分离株核苷酸的同源性在86%～99.9%之间,推导氨基酸的同源性在89.3%～99.7%之间;11个毒株与国内外其他7个NDV毒株比较核苷酸的同源性在83.3%～98.5%之间,推导氨基酸的同源性在87.4%～98.6%之间.  相似文献   

摩拉和尼里／拉菲水牛泌乳特性观察     

唐小飞 《广西畜牧兽医》1998,14(3):18-20

摩拉水牛引进我区已４０年，尼里／拉菲水牛也有了２３年。这两个品种是世界著名的河流型乳用水牛品种，经过长时间的风土驯化，表现出能适应我区亚热带的气候条件，耐热性好，耐粗饲，抗病力强，有较好的繁殖性能和产乳性能。作为水牛改良的主要父本，其泌乳特性如何直接...  相似文献   

H5和H7亚型禽流感病毒多重反转录聚合酶链反应快速检测及鉴别方法的建立   总被引：7，自引：0，他引：7  

谢芝勋庞耀珊  邓显文唐小飞 刘加波 《中国兽医科技》2005,35(6):437-440

参考禽流感病毒(AIV)M基因和HA基因序列设计了3对引物，其中1对为针对不同HA亚型AIV的通用引物，另外2对为分别针对AIVH5和H7亚型的特异性引物。这些引物所扩增的cDNA片段大小分别为244、860和634bp。利用这3对引物，通过对多重RT—PCR扩增条件的优化，成功建立了快速检测鉴别AIVH5、H7亚型的多重RT—PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明，该技术对AIV H5亚型同时扩增出2条大小分别为244bp和860bp的cDNA片段；对AIV H7亚型同时扩增出2条大小分别为244bp和634bp的cDNA片段；对AIV H5和H7亚型混合样品能同时扩增出3条大小分别为244、860和634bp的cDNA片段；对其他AIV HA亚型只扩增出1条244bp的cDNA片段；对其他常见禽病病原扩增均为阴性；该多重RT-PCR对AIV RNA、AIV H5和AIV H7亚型RNA的最低检出量分别为10、100和100Pg。  相似文献   

10株新城疫病毒广西分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析   总被引：4，自引：2，他引：4  

刘加波  谢芝勋  唐小飞  庞耀珊  邓显文 《畜牧与兽医》2005,37(7):6-10

根据基因库(GenBank)新城疫病毒(NDV)的HN基因序列设计了2对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000~2003年暴发新城疫的鸡群中分离的10株NDV毒株的HN基因进行了扩增,扩增产物克隆并测序,拼接出10个NDV广西分离株的HN基因全序列,其序列全长均为1 713 bp,编码571个氨基酸,均有13个半胱氨酸残基。其中GX8/03有6个糖基化位点,而GX2/00、GX6/02、GX7/02和GX5/00有5个糖基化位点,GX1/00、GX3/00、GX4/00和GX9/03有4个糖基化位点。除GX5/00和GX10/03分离株外,其他8个NDV分离株在HN基因抗原位点Ⅰ发生变异,即347位由谷氨酸(E)被甘氨酸(G)替代,GX8/03分离株在HN基因抗原位点Ⅱ的495位由赖氨酸(K)替代谷氨酸(E)。与11株已发表的NDV HN基因全序列相比较,其核苷酸同源性在79.6%~97.9%之间,推导的氨基酸同源性在87.2%~98.1%之间。  相似文献   

多重聚合酶链反应快速检测鉴别鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株的研究   总被引：8，自引：0，他引：8  

谢芝勋  邓显文  谢志勤  庞耀珊  唐小飞  廖敏  刘加波  何竞铭 《中国预防兽医学报》2003,25(6):476-479

根据鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株基因组的结构特点，设计合成了二对引物XZ1，XZ2和XZ45、XZ46，建立了一种同时检测鉴别MG野毒株和弱毒疫苗株的多重PCR技术。试验结果表明，用这两对引物对MG强毒株和弱毒疫苗侏进行多重PCR，强毒株只扩增出732bp一条带，而弱毒疫苗株则可同时扩增出732bp、524bp二条带，而对其他种类鸡支原体和其它禽病病原的扩增不出现任何条带，结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR最低能检出1Pg的MG强毒株和弱毒疫苗株的DNA模板。  相似文献   

应用多重聚合酶链反应检测四种霉形体的研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

邓显文谢芝勋  谢志勤廖敏庞耀珊  刘加波唐小飞 何竞铭 《中国兽医科技》2003,33(6):14-17

根据鸡毒霉形体(MG)、滑液囊霉形体(MS)、衣阿华霉形体(MI)和火鸡霉形体(MM)的基因文库，设计了4对分别与MG、MS、MI和MM某段基因序列互补的引物，用这4对引物对同一样品中的MG、MS、MI和MM的DNA模板进行多重PCR扩增。结果，均同时得到了4条特异性的大小与试验设计相符的732bp(MG)、207bp(MS)、299bp(MI)、850bp(MM)多重PCR扩增带，而对其他6种禽病病原体的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明，此多重PCR能同时检出1pg的MG、MS、MI和MM DNA模板。  相似文献