鸡病毒性关节炎血清学调查   总被引：4，自引：0，他引：4  

谢芝勋  邓显文  刘加波  庞耀珊  谢志勤 《中国家禽》1998,(12)

鸡病毒性关节炎是由禽呼肠孤病毒引起的一种传染病。该病１９５７年发生于美国，１９８４年我国有该病发生的报道，世界主要养禽国家都有该病的报道，近年来越来越严重，并已成为养鸡业，尤其肉鸡业重要传染病之一。为了搞清广西不同地区感染情况，为我国该病防治提供科学...  相似文献   

鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立          下载免费PDF全文

张艳芳  谢芝勋  谢丽基  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  范晴  罗思思 《南方农业学报》2014,45(2):314-317

[目的]建立可同时检测鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)与鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)的二重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.[方法]根据GenBank中DTMUVE基因和DPVUL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的二重RT-PCR.[结果l优化后的二重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95℃预变性5 min;95℃1 min,54.4℃l min,72℃1 min,进行35个循环;72℃延伸10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.[结论]建立的二重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.  相似文献   

新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测方法的建立及初步应用     

陈安莉  谢芝勋  谢丽基  谢志勤  庞耀珊  邓显文  刘加波  彭宜  范晴  罗思思 《中国畜牧兽医》2013,40(11):192-195

根据基因库中新城疫病毒(Newcastle diseases virus,NDV)和鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)的基因序列,分别设计了2对针对NDV和DPV保守基因序列的引物。用这2对引物对同一样品中的NDV和DPV模板进行二重PCR扩增,结果同时得到了2条特异性的、大小与试验设计相符的419(NDV)和602 bp(DPV)的扩增条带,而对其他禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该二重PCR技术能同时检出0.4 pg的NDV模板和126 pg的DPV模板。  相似文献   

BVDV与BRV二温式多重PCR检测方法的建立     

范晴  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  谢丽基  彭宜 《西南农业学报》2011,24(5)

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛轮状病毒(BRV)的保守基因设计了两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为2个温度梯度,建立了用于同时检测BVDV和BRV的二温武多重PCR方法,扩增长度分别为244和385 bp.特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV和BRV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴性;检测灵敏度高,最低能检测到BVDV和RBV各1 pg病毒RNA.建立的BVDV和BRV二温武多重PCR方法,是一种快速、特异、敏感的检测方法.  相似文献   

广西奶水牛结核病三种检测方法的比较     

谢志勤  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢丽基  温娟  张振荣  黄海强 《西南农业学报》2011,24(3)

应用牛结核变态反应、PCR和分离培养3种方法,对奶水牛进行牛结核病检测,比较3种检测方法的符合率。结果表明,1850头奶水牛中有78头奶水牛的皮内变态反应结果为阳性,而对变态反应阳性的牛样品进行PCR检测和分离鉴定,分别鉴定出4份和2份牛分枝杆菌。阳性检出率以变态反应为最高(4.22%),PCR和分离鉴定的较低,分别为0.21%和0.11%。变态反应与PCR检测、分离鉴定的符合率较差,而PCR检测与分离鉴定的符合率相对较接近。因此建议,在对奶水牛群进行结核病检测时,应先以变态反应检疫牛群,再结合PCR检测进行综合诊断,更有利于奶水牛结核病的检测与净化。  相似文献   

牛病毒性腹泻二温式PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

范晴  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  谢丽基  彭宜 《中国奶牛》2010,(10):1-3

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5’端非编码区设计了1对可以扩增244bp BVDV某段基因序列的特异性引物,优化建立了BVD的二温式PCR快速检测方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴性;最低能检测到1pg牛病毒性腹泻病毒RNA。本研究所建立的BVD二温式PCR方法是一种快速、特异、敏感的检测方法。  相似文献   

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立     

熊文婕  谢芝勋  唐熠  谢丽基  刘加波  庞耀姗  邓显文  谢志勤 《南方农业学报》2010,41(4):366-370

为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,梯度倍比稀释作为标准品,用于构建SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测δC、δNS基因及内参基因β-actin的标准曲线.结果表明,建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2均在0.99以上;最小检出量为10拷贝/μL的阳性标准品,且具有良好的重复性,能够校正抽提样品中细胞数量不均带来的差异.可见,SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法能满足检测微量样品中禽呼肠孤病毒δC和δNS基因表达的要求,具有快速、敏感性高、重复性好等特点.  相似文献   

禽呼肠病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立     

王莹  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  谢丽基 《动物医学进展》2010,31(12)

根据禽呼肠病毒(ARV)的S1基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,用Bst DNA聚合酶,在63.5℃恒温条件下进行扩增,扩增后加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外灯下观察判定扩增结果。该方法可检测出ARV标准株和分离株,具有很好的特异性;最低能检测出1个拷贝的pMD18-T-S1阳性质粒,敏感性很高。该方法无需特殊仪器,简便,快速,适用于禽呼肠病毒的临床快速检测。  相似文献   

牛轮状病毒RT-LAMP快速检测方法的建立     

范晴  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  谢丽基  彭宜 《畜牧与兽医》2010,42(12)

本研究旨在建立一种快速可视化检测牛轮状病毒(BRV)的反转录-环介导恒温扩增方法(RT-LAMP)。根据BRV的群特异性基因VP6设计一套LAMP引物,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了恒温(63.5℃)、快速(45 min)的检测方法。结果显示:所建立方法特异性好,检测其他对照病毒均为阴性;灵敏度高,最低可检测到1个拷贝的阳性质粒,扩增产物经酶切分析结果正确,扩增结果可通过观察浑浊度或加入染料后直接判定。建立了用于检测BRV的RT-LAMP方法,该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适合基层和现场检测。  相似文献   

鸡呼肠孤病毒分离与鉴定   总被引：14，自引：0，他引：14  

廖敏  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  唐小飞 《中国家禽》2002,24(1):12-14

从广西玉林市某鸡场出现跛行、瘫痪、跗趾关节和腱肿胀等症状的不同发病鸡群中分离到两株病毒。经病毒分离培养、理化特性鉴定、血清中和试验、动物回归试验、抗体检测以及PCR诊断,确定所分离到的两个病毒株为禽呼肠孤病毒。  相似文献