3种奶牛乳房炎链球菌的gapC基因原核表达及其免疫原性研究     

王凤  汤德元  宋立  宁宜宝  张纯萍 《养殖与饲料．饲料世界》2013,(6):10-15

为研究引起奶牛乳房炎的病原菌停乳链球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的gapC基因工程疫苗及其生物免疫活性,试验采用PCR方法扩增出停乳链球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的gapC基因cDNA序列,克隆到pMD18-T载体上,将重组质粒pMD18-T-TRgapC、pMD18-T-WRgapC和pMD18-T-RFgapC经双酶切鉴定、测序及序列分析后,再将gapC基因亚克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,构建停乳链球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的gapC基因原核表达质粒pET-28-TRgapC、pET-28-WRgapC和pET-28-RFgapC;将构建好的原核表达质粒转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE电泳、纯化、复性后经Western blot检测,得到了约38 ku的条带,与预期大小相符。说明这3种蛋白有一定的免疫原性。  相似文献   

牛奶中四环素类药物残留的确证方法--液质联用法   总被引：1，自引：0，他引：1  

张纯萍  刘艳华  门立强  刘智宏  王树槐 《中国兽医学报》2005,25(6):649-651,654

为了确证牛奶中土霉素、四环素、金霉素的残留，建立了电喷雾高效液相色谱／串联质谱法，采用正离子检测，选择离子方式扫描。牛奶样品经Mcllvaine-EDTA缓冲溶液提取离心后，上清液过C18小柱净化后甲醇洗脱，然后氮气吹干，甲醇-水（30：70）溶解（以去甲金霉素为内标）后进行分析。结果表明，牛奶中土霉素、四环素和金霉素的检测限（LODs）为0．01mg／L，定量限（LOQs）为0．025mg／L。3种药物在0．05～0．5mg／L范围内均呈良好线性关系，并且3个添加浓度的平均回收率范围为70．0％～87．6％，批内变异系数不大于10％，以最大残留限量浓度添加后所测得回收率的批间变异系数小于15％。本方法特异性强、灵敏度高、准确可靠，可作为牛奶及其他动物组织中四环素类药物残留的确证方法。  相似文献   

部分国家和地区猪链球菌的耐药性及耐药机制研究进展   总被引：5，自引：1，他引：5  

张纯萍  宁宜宝  宋立 《中国兽药杂志》2007,41(3):29-31

猪链球菌病作为一种具有重要公共卫生意义的疾病,其防治一直是人们关注的焦点。为了了解猪链球菌对于各种抗生素的耐药情况以及耐药机制的研究进展,作者查阅了相关资料,对部分国家和地区进行的相关研究进行综述,以期对耐药性和耐药机制的研究以及临床用药有所帮助。  相似文献   

全基因组测序技术在猪源沙门氏菌血清分型和耐药性分析中的应用     

张璐  沈青春  徐锦涛  赵琪  李霆  程敏  张纯萍 《中国兽药杂志》2022,56(10):25-30

【目的】为研究全基因组测序技术在猪源沙门氏菌血清型和耐药性检测方面的应用能力。【方法】以60株猪源沙门氏菌为研究对象,应用传统玻片凝集法和微量肉汤稀释法对其进行血清分型和耐药性检测,并提取所有菌株核酸进行全基因组测序组装,利用SeqSero2和ResFinder4在线预测每株菌的血清型和耐药基因,然后与传统方法进行比较分析。【结果】血清凝集试验共鉴定出8种沙门氏菌血清型,而全基因组测序鉴定出9种血清型,二者分型结果的符合率为90.0%;对11种抗菌药物的药敏试验显示：沙门氏菌对四环素（73.3%）的耐药率最高,其次为氨苄西林（66.7%）、磺胺异噁唑（66.7%）和复方新诺明（53.3%）,基于全基因组预测的恩诺沙星、美罗培南、头孢噻呋和阿奇霉素的耐药性与药敏试验结果完全一致,对氨苄西林、磺胺异噁唑、四环素预测的结果符合率也均大于90.0%。【结论】全基因组测序分析的沙门氏菌血清型和耐药性与常规检测方法的符合率较高,且具有操作简便的优势,可以作为分析沙门氏菌血清型和耐药性的有效方法。  相似文献   

猪、牛、鱼组织中四环素类药物残留的测定     

叶妮  刘智宏  金银珍  张纯萍 《中国兽药杂志》2006,40(12):5-7

以本实验室研制的四环素类药物多残留检测试剂盒为基础，建立了猪、牛、鱼组织中四环素、土霉素、金霉素和多西环素4种药物残留的酶联免疫检测方法。该方法在猪、牛、鱼组织中的检测限均低于13μg/kg，4种四环素类药物最高残留限量浓度添加回收率范围为47．5％～119．4％，批内、批间变异系数在25％以内。检测各种组织中四环素类药物的临界值分别为猪肉49．2μg／kg、猪肝138．7μg／kg、牛肉52．1μg／kg、牛肝124．4μg／kg、鱼肉44．1μg／kg。  相似文献   

兽医临床凝固酶阴性葡萄球菌分离株的耐药性及耐药基因检测     

张纯萍  陈惠娟  宋立  宁宜宝  马丽 《中国兽医学报》2011,31(11)

采用微量肉汤稀释法和D-试验法检测64株凝固酶阴性葡萄球菌（CNs）对10种抗菌药物的耐药性,并用PCR方法分别检测头孢西丁耐药菌株和红霉素耐药菌株中mecA基因以及erinA、ermB、ermC和msrA基因的携带情况。结果表明,所有菌株均对万古霉素和甲氧苄啶／磺胺甲恶唑敏感;泰妙菌素为耐药率（65．6％）最高的抗菌药物,其次是红霉素、氧氟沙星和β-内酰胺类药物。28株（43．8％）CNS对青霉素耐药,其中26株对头孢西丁耐药（MRS）并且均携带mecA基因。30株（46．9％）CNS对红霉素耐药,其中24株为MLSB耐药表型,主要由ermB基因介导。总之,兽医临床CNs分离株对常用抗菌药物的耐药性不同,mecA基因和ermB基因的携带分别是兽医临床MRS和MLSB表型产生的主要原因。  相似文献   

我国动物源细菌耐药性监测系统简介   总被引：1，自引：0，他引：1  

张纯萍  宋立  吴辰斌  徐士新 《中国动物检疫》2017,34(3):34-38

本文介绍了我国动物源细菌耐药性监测网络的组成和主要内容,详细阐述了其过程控制,包括采样、细菌分离鉴定和耐药性检测、耐药性检测结果汇总分析等,并介绍了我国取得的成就,如建立了动物源细菌耐药性监测技术平台和耐药性细菌资源库、创建了具有自主知识产权的动物源细菌耐药性数据库、摸清了我国动物源细菌的耐药性状况等。针对我国动物源细菌的耐药现状,提出了应对措施,包括规范我国兽用抗菌药物饲料添加剂的使用、加强动物处方药的管理并建立治疗用抗菌药物的分级管理制度、持续开展畜禽细菌耐药性动态监测等。  相似文献   

硫酸粘杆菌素微生物检定法的改进   总被引：5，自引：1，他引：4  

张纯萍  肖希龙 《中国兽药杂志》2002,36(4):33-35

本文以大肠杆菌标准菌株(Escherichia coli CMCC(B)44103)为检测菌,对硫酸粘杆菌素的微生物检测方法进行了研究.研究结果表明,本方法检测限为0.2μg/ml,与国外所用的以博德特氏菌ATCC4617为检测菌的检测限基本一致,其质量控制样品的日内、日间变异系数均小于10%,平均回收率94%～100.8%,并且操作简便,是一种较好的替代方法,可用于硫酸粘杆菌素的药代动力学研究或进行残留检测.  相似文献   

国内外克伦特罗ELISA检测试剂盒评价   总被引：11，自引：6，他引：5  

叶妮  刘智宏  郭文林  闫小峰  赵兵  张纯萍 《中国兽药杂志》2002,36(10):25-28

根据B/B0-50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加检验、实际样品检验等方面的比较结果对两种克伦特罗ELISA检测试剂盒(A: 中国兽医药品监察所研制, B: 德国 r-Biopharm公司研制)进行评价。结果表明,试剂盒A的50%抑制浓度低于1.0 ng/mL; 检测范围在0.10~3.0 ng/mL之间;标准溶液浓度梯度中包括1.0 ng/mL这一限定值;板内变异系数小于13.7%,板间变异系数小于8.8%;样品回收率在70%~110%之间;实际样品检验和试剂盒B检样的阳性符合率为95.5%。试验证明,试剂盒A与试剂盒B的水平相当。  相似文献