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猪蛔虫雄虫cDNA文库的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
采用Tripure Isolation Reagent抽提猪蛔虫雄虫成虫的总RNA,用poly(A)PuristTM纯化试剂盒分离mR-NA。分离mRNA后,用Clontech公司的CreatorTMSMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建了猪蛔虫雄虫成虫的cDNA文库。结果获得了7.26×105独立克隆,重组率达96.7%,插入片段的平均长度约为1 kb。猪蛔虫雄虫cDNA文库的成功构建为利用文库筛选雄虫差异表达基因提供了材料来源,为研究猪蛔虫性别发育的分子机制奠定了基础。 相似文献
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参考已测得的C.rudolphii姊妹种(C.rudolphii A和C.rudolphii B)及C.septentrionale的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔1、2(ITS-1及ITS-2)核苷酸序列,设计、合成了针对C.rudolphii A、C.rudolphii B及C.septentrionale的特异性引物HFA(F)、HFA(R)、HFB(F)、HFS(F),通过PCR条件优化和扩增后,它们均能特异地扩增出目的DNA片段,分别是323、321、108bp,而其它对照样品均未扩增出特异性片段,敏感性试验可检测到最低浓度分别为1.6、21.8、0.27ng/μL。从而初步建立了鉴定C.rudolphii姊妹种的特异PCR方法。该方法特异性强、敏感度较高、重复性好,不仅可用于C.rudolphii姊妹种的分类鉴定,也可用于它们所导致的寄生虫病的诊断和流行病学调查。 相似文献
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用γ^33P对引物进行标记,首次对来自国内不同地区、不同宿主的片形吸虫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位Ⅰ基因部分序列(pnad1)进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,结果76个虫体均成功地扩增出约200bp的基因片段;76个样品经过PCR-SSCP分析后,筛选出11个代表性样品进行测序。测序结果显示我国片形吸虫pnad1序列种间差异大于种内变异,表明nad1序列可以作为片形吸虫种内和种间遗传多态性研究的标记。 相似文献
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为探讨土耳其斯坦东毕吸虫在血吸虫中的系统发生位置,本研究设计一对特异性引物,通过PCR方法对土耳其斯坦东毕吸虫(绵羊源)线粒体烟酰胺脱氢酶亚基Ⅳ基因(nad4)进行扩增和测序分析,并与GenBank中相关血吸虫nad4基因进行比对。结果显示,本研究克隆的该吸虫线粒体nad4基因序列大小约为1030bp,与已发表的其它血吸虫线粒体nad4基因的同源性为51.6%~66.7%,其系统发生位置属于非洲血吸虫种群。 相似文献
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日本血吸虫多价核酸疫苗的构建及免疫保护试验 总被引:2,自引:0,他引:2
利用PCR技术获得日本血吸虫GST抗原基因,通过分子克隆技术将GST、FABP基因克隆至pVAX1载体,并将其克隆至舍有Sj23基因表达核的plRESneo栽体,构建重组质拉pVAX-GST、pVAX-GST-FABP、pIRESneo-Sj23和pIRESneo-GST-FABP-Sj23.将50只昆明小鼠随机分成5组,每组10只,分别以肌肉注射质粒pIRESneo-GST-FABP-Sjz3、plRESneo-Sj23、pVAX-GST、pVAX-GST-FABP和空白质粒plRESneo,50μg/只,免疫2次,每次间隔21 d.测定小鼠免疫前后血清抗体水平,30 d经腹部皮肤感染血吸虫尾蚴,45 d后剖杀小鼠,计数各组小鼠虫卵数及成虫数.结果表明.重组质粒pVAX-GST、plRESneo-Sj23、pVAX-GST-FABP和pIRESneo-GST-FABP-Sj23均能诱导小鼠产生特异性的IgG抗体,plRESnecrGST-FABP-Sj23免疫组所诱导的IgG水平最高;减虫率分别为26.1%、30.8%、33.2%和47.5%,减卵率分别为25.4%、45.0%、48.4%和69.8%.pIRESneo-GST-FABP-Sj23的减卵率和减虫率明显高于其他DNA疫苗.结果表明,日本血吸虫多价核酸疫苗能产生较强的免疫反应,并能获得较好的免疫保护效果. 相似文献