犬瘟热病毒F1基因的原核表达与初步应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

闫芳  夏咸柱  扈荣良  谢之景  黄耕 《中国兽医学报》2005,25(4):350-352,355

将犬瘟热病毒(CDV)F1基因定向克隆入pET-28a( )载体．构建了原核表达质粒pET-28F1。pET-28F1转化宿主菌BL21(DE3)plysS．在IPTG的诱导下．可高效表达目的基因，表达量达菌体蛋白总量的23．52％。Western blot分析表明，所表达蛋白能与抗CDV阳性血清发生特异性的抗原-抗体反应。以E．coli表达的CDV F1蛋白为抗原．HRP标记的兔抗犬IgG为二抗．建立了检测抗CDV抗体的间接ELISA方法。试验表明．应用CDV F1蛋白作为抗原检测抗CDV抗体具有特异性高、抗原易纯化、成本低等特点。  相似文献   

动物干扰素的研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

王照  王磊  李天松  王胜乐  王铁峰  高玉伟  黄耕  王铁成  杨松涛  王化磊  夏咸柱 《中国动物检疫》2012,29(2):71-73

1980年国际干扰素委员会定义了干扰素:干扰素是一类在同种细胞上具有抗病毒活性的蛋白质,其活性的发挥又受细胞基因组的调节和控制,涉及RNA和蛋白质的合成。本文就动物干扰素的研究现状做以概述,为动物干扰素的研究奠定理论基础。  相似文献   

犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达     

鞠会艳  夏成柱  高玉伟  杨松涛  邹啸环  黄耕  李彦舫 《畜牧市场》2009,(9):10-13

核蛋白基因（N）位于犬瘟热病毒基因组的108—1679位置处,是保守性较强的免疫原性蛋白,因此选择N基因作为目的基因,利用酶切、连接等方法构建了含犬瘟热病毒核蛋白基因的穿梭质粒pVAX△E3LPN。以含CAV-2SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建了重组质粒pCAV-2-CDVLPN,利用脂质体介导法转染MDCK细胞,转染三次后,细胞出现了典型的腺病毒样病变。电镜负染、切片观察,酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明表达犬瘟热核蛋白基因的重组犬2型腺病毒构建成功,表达的核蛋白分子量为58kDa。  相似文献   

犬细小病毒基因型的调查   总被引：16，自引：3，他引：16  

谢之景  夏咸柱  扈荣良  赵忠鹏  高玉伟  黄耕 《中国兽医学报》2004,24(5):421-424

采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 a基础上进一步进化产生的 2个新的变异株。在我国 ,CPV- 2曾在 2 0世纪 80年代早期流行 ,但 1986年后分离到的 CPV以 CPV- 2 a为主 ,在 2 0 0 2年送检的 8份病料中分离到 4株 CPV- 2 a和 4株 CPV- 2 b。PV/貉 / CC/ 1/ 86在CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 30 0 G→ S替换 ,PV/犬 / JL / 1/ 0 2在 CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 5 6 4 S→ N替换 ,其确切的生物学意义尚不清楚。我国的 CPV分离株与参考毒株的核酸同源性超过 98% ,没有形成明显的中国CPV分支 ,进化方式与文献报道的进化方式一致  相似文献   

虎血清中犬副流感病毒的抗体流行病学调查研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

孙贺廷  夏咸柱  高玉伟  贺文琦  王立刚  刘丹  黄耕 《畜牧与兽医》2004,36(9):4-6

为查明犬副流感病毒 (CPIV)对虎的感染情况 ,应用CPIV细胞培养物为血凝抑制 (HI)抗原 ,对上海、桂林、哈尔滨、宜昌、郑州等地区未曾使用过任何含CPIV疫苗免疫的 38只虎的血清进行HI抗体检测。结果表明 ,有 2 5份血清CPIV的HI抗体效价为 1∶4～ 1∶32 ,有 1 3份抗体效价 <1∶2 ,血清中CPIV的HI抗体阳性率达 65 79%。说明上述地区的虎可能存在着CPIV的隐性感染  相似文献   

犬冠状病毒YS1株细胞培养弱毒的实验免疫研究     

余春  夏咸柱  范泉水  何洪彬  邱薇  黄耕  王允海 《畜牧与兽医》2001,33(4):1-4

应用纯化后的犬冠状病毒 (CCV)YS1株细胞培养致弱的弱毒 (CCVYS1V60 ) ,经口鼻和肌肉接种CCV ,SN抗体小于 1∶2的易感犬作安全试验 ,结果未见任何CCV临床症状与病理解剖学改变 ;用不同剂量的该CCV弱毒分组免疫CCV易感犬 ,经SN抗体测定与用CCV强毒攻毒试验 ,结果SN抗体达 1∶60以上的犬 90 %以上可获得免疫保护 ;应用该CCV弱毒分别免疫母源抗体达 1∶4和 1∶8的 2组试验犬 ,第 1次免疫 1 4d后SN抗体均未见升高 ,追加 2～ 3次免疫后 ,SN抗体才逐渐上升至 1∶60以上的免疫保护水平 ;用CCV易感犬和猫肾传代细胞 (CRFK)分别将该CCV细胞培养弱毒连续传 5代和 2 0代 ,结果对犬仍然安全 ,免疫原性也未见下降 ;与犬瘟热病毒 (CDV)、犬传染性肝炎病毒 (ICHV)和犬细小病毒(CPV)弱毒作免疫互扰试验 ,结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异 ;该毒的免疫期在 1年以上 ,- 2 0℃冻结保存的保存期为 9个月。  相似文献   

犬冠状病毒V1株核蛋白基因的克隆与序列分析     

乔军  夏咸柱  胡桂学  谢之景  闫芳  杨松涛  黄耕 《西南大学学报》2004,26(4)

首次对犬冠状病毒V1野毒株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.根据GenBank中报道的CCV Insavc-1株N基因序列,设计了1对特异性引物,对分离的CCV V1野毒株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的阳性PCR片段经纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pTN1,进行核苷酸序列测定,并与GenBank中CCV标准毒株Insavc-1 N基因进行了比较.结果该基因全长为1 146 bp,编码382个氨基酸,两者核苷酸的同源性为91.7%;推导的氨基酸序列的同源性为90.2%,显示出较高的保守性.在V1野毒株推导的N蛋白N端156-179位存在一个SRXX富集区,与小鼠肝炎病毒相应区域相同,推测可能是RNA结合区.另外,推导的该蛋白氨基酸序列其疏水性和抗原表位与标准毒株Insavc-1 N蛋白存在一定的差异;在氨基酸组成上,该蛋白丝氨酸和赖氨酸含量高达9.84%,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构.  相似文献   

犬瘟热疫苗弱毒的复壮与免疫试验   总被引：4，自引：0，他引：4  

夏咸柱  黄耕 《中国兽药杂志》1997,31(4):2-6

将一株犬瘟热疫苗株病毒通过Ｖｅｒｏ细胞２０代（ＣＤＶ／Ｒ－２０）后又通过敏感犬的腹腔巨噬细胞，获得一株免疫原性更高的弱毒株（ＣＤＶ／Ｒ－２０／８）。接种同样剂量１０４ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８和ＣＤＶ／Ｒ－２０的犬，产生出血清中和（ＳＮ）抗体价的几何平均数分别为１：５４和１：２６。前者为后者的２倍多。接种１０５ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８能完全保护犬（１０／１０）抵抗ＣＤＶ强毒的攻击，接种１０４ＴＣＩＤ５０的保护９／１０犬，而对照犬５只全部发病，其中４只死亡。犬体内ＳＮ价可持续一年之久。冻干培养物在４和－３０℃中可分别保存９个月和１２个月而效力不减。  相似文献   

驯化克隆的CAV-2大斑株的实验免疫研究     

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲  殷震 《中国兽药杂志》2002,36(2):25-29

对MDCK细胞上驯化克隆产毒量高的大斑株 (LP)的第 5 0代毒和 75代毒进行了实验免疫研究 ,结果表明该毒株具有安全性好 ,通过静脉和口鼻接种CAV易感犬 ,无任何致病反应 ;用10 4 .0 TCID50 以上的该毒免疫CAV易感犬 ,即获得 97.5 %以上的免疫保护 ;将其在CAV易感犬连续传 5代 ,其安全性与原毒相同 ,表明该毒株在 5 0～ 75代之间遗传性稳定 ,免疫原性良好 ;与CPV和CDV弱毒联合免疫 ,结果与各弱毒单独免疫所产生的抗体无差异 ,说明该毒株不但可以单独用于免疫 ,也可与其他弱毒联合免疫。是一株较好的疫苗候选株 ,具有开发应用价值。  相似文献   

用PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王雷  夏咸柱  卫广森  邹啸环  刘维全  扈荣良  黄耕 《畜牧与兽医》2002,34(2):10-12

根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒 (ICHV)标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同 ,按照引物设计的原则 ,设计合成了一对通用引物。该对引物可由ICHV强毒株扩增出 569bp的片段 ,而弱毒株可扩增出 2 4 4bp的片段。对PCR产物分别进行电泳、酶切和测序 ,证明PCR产物片段大小、酶切位点和核苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒 (CAV 2 )强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增 ,说明具有良好的特异性。其检测到的病毒量分别为 1 5TCID50 、 31TCID50 、说明该技术具有很高的敏感性。可用于ICHV强、弱毒株的鉴定和ICH的诊断  相似文献