尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

曹建萌  卢迈新  叶星  曾祖聪  高风英 《水产学报》2014,38(11):1847-1854

为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效。  相似文献   

双重PCR快速鉴别无乳链球菌和海豚链球菌     

黎炯  叶星  卢迈新  邓国成  田园园  江小燕  黎坚平 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2010,36(4):449-452

根据无乳链球菌的cfb基因和海豚链球菌16SrRNA基因序列,设计、合成2对引物,优化扩增条件,建立了快速鉴别无乳链球菌和海豚链球菌的双重PCR方法.用该方法扩增无乳链球菌和海豚链球菌,可分别获得474、296bp的特异性片段,扩增嗜水气单胞菌、铜绿假单胞菌等其他常见鱼病原菌无特异性片段.该方法可实现对无乳链球菌和海豚链球菌的快速鉴别,具较高的灵敏度,可检测到基因组含量分别为3.2×10-3ng/μL的无乳链球菌和3.0×10-2ng/μL的海豚链球菌.对采集自广东与海南两省养殖罗非鱼病鱼的11份病原样品进行检测,均可获得474bp片段,测序与BLAST分析结果表明,扩增到的序列均为无乳链球菌cfb基因序列,可从分子水平上确定这些样品为无乳链球菌,与生化鉴定结果一致.  相似文献   

草鱼铜绿假单胞菌的鉴定及药物敏感性分析     

崔来宾  叶星  邓国成  江小燕  田园园  白俊杰  黎坚平 《大连水产学院学报》2010,25(6):488-494

从患病草鱼C tenopharyngodon idella体表病灶上分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,分别以腹腔注射和浸泡两种方式感染草鱼。结果表明：该菌株能感染草鱼,且具较强毒力,腹腔注射0.2mL该菌液（3×109cfu/mL）,可导致受试草鱼100%死亡;创伤浸泡感染（3×108cfu/mL）,死亡率也达100%,受感染鱼出现与自然感染相似的类似赤皮病症状。对该病菌进行形态特征观察和主要理化特性分析,初步鉴定为铜绿假单胞菌Pseudom onas aeruginosa。进一步对该菌进行分子鉴定,共选用16S rRNA、RNA聚合酶β亚单位（rpoB）和促旋酶亚单位蛋白（gyrB）3个基因进行鉴定分析。序列克隆与BLAST分析结果显示,这3个基因均与GenBank上登录的铜绿假单胞菌的相应序列具有很高的同源性,16S rRNA、rpoB和gyrB基因与已知铜绿假单胞菌相应序列的同源性分别在99%、98%和93%以上。综合生理生化与分子鉴定结果,可判定所分离的菌株为铜绿假单胞菌。药敏试验结果显示：该菌对阿米卡星、菌必治、氟哌酸和妥布霉素等11种药物高度敏感,对链霉素和庆大霉素中度敏感,对罗红霉素、红霉素、四环素、苯唑青霉素、新霉素和头孢氨苄等16种药物具有耐药性。  相似文献   

草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白的原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

王杭军  叶星  田园园  张莉莉  瞿兰  张蕊 《华中农业大学学报》2013,32(2):97-102

根据草鱼呼肠孤病毒广东株GCRV-GD108编码VP5的M5基因的cDNA序列,分别设计合成带特定酶切位点的特异引物,进行PCR扩增;通过酶切与连接,构建2种重组表达载体pET30c-M5和pColdⅡ-M5,分别转化于大肠杆菌并进行诱导表达;对培养基、诱导时间、诱导剂浓度和温度等条件进行优化,确定最适表达体系.通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.结果显示,所构建的2种VP5蛋白原核表达载体,均在大肠杆菌中成功表达了分子质量大小(约80 ku)与预期相符的重组蛋白,表达产物主要存在于包涵体中.诱导表达后的菌体经离心、洗涤与超声破碎,离心收集包涵体.包涵体通过变性、透析与复性,获得纯化的重组蛋白,其中pET30c-M5/BL21 (DE3) 工程菌的目的蛋白占全菌蛋白的22.5％,纯化后获得了高纯度的重组蛋白(＞95％).比较2种表达载体的表达结果,pET30c-M5具有诱导表达耗时少、获得重组蛋白量大的优势,可为下一步的研究提供足量的蛋白.  相似文献   

伸缩片式番茄移栽机取苗器设计     

赵斌栋  王吉奎  任玲  王宁  叶星晨  宋文彬 《农机化研究》2022,44(4):80-85,200

穴苗移栽是农业种植的重要环节,移栽机的出现为移栽作业提供了方便。为了提升穴苗移栽机的取苗效率,适应移栽机整排取苗的要求,开发了一款伸缩片式取苗器,通过分析其工作原理并对取苗器关键部件进行计算,采用MatLab GUI仿真程序对取苗器的关键部件进行运动距离验证,形成满足取苗条件的取苗器末端运动轨迹。最后,通过三维打印完成样机试制,采用连续摄影完成对实物的轨迹验证,并进行不同含水率下的取苗试验。结果表明:当取苗器伸缩片长度为55mm、苗针安装角度为79°、基质含水率为56.5%时,取苗效率达到80.47%;基质含水率为68.8%时,基质破损率最小为1.25%。  相似文献   

利用18个微卫星座位对剑尾鱼RR-B系遗传质量的分析(英文)   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘宇飞  白俊杰  全迎春  叶星  黄志斌 《农业科学与技术》2008,9(6):55-58

[Objective] The study aimed to further understand the genetic quality of Xiphophorus helleri RR-B strain and estimate the feasibility of microsatellite markers in genetic monitoring of aquatic laboratory animals.[Method] Eighteen microsatellite loci which had polymorphism in wild X. helleri were used for genetic quality analysis of RR-B strain (red eyes and red body) by PCR. [Result] All these 18 microsatellite loci displayed single allelic gene band in 30 individuals of X. helleri RR-B strain and the average homozygote rate reached 100%. [Conclusion] These loci could be used as markers in genetic monitoring of X. helleri RR-B strain, which had obtained fairly high genetic homozygosity by inbreeding for more than 20 generations. This study provided basic data for establishing the molecular genetic monitoring standard of aquatic laboratory animals.  相似文献   

美国超甜葡萄柚栽培管理技术探索     

范良勤  吴远海  叶星 《现代农业科技》2020,(6)

前言 美国葡萄柚系列品种具有皮薄，口感香甜，无渣，吃后回味特别浓等优点，在市场上特受欢迎。其中，超甜葡萄柚更是葡萄柚中极品，由于糖度特高特甜而特别受宠，如今在市场上卖出每公斤60元人民币的高价，市场前景非常看好。 2015年始，笔者从台湾引进这一优良品种，在浙南山区进行驯化试种。经过四年多时间的反复试验，获得了不少宝贵的经验。现将该品种栽培管理技术总结如下：  相似文献   

轮椅上的千里维权路     

叶星  刘富运  李建勇 《农村．农业．农民》2007,(2):44-45

这是一个荡气回肠、震撼人心的故事!这是一段历经困苦、洒满血泪的行程! 我们无法想像一个因工伤瘫痪的农民丁坐着由13岁儿子推着的轮椅,徒步跋涉2000公里从湖北到山西讨公道所经受的艰难;我们无法想像某些人面对如此苦难所表现出的冷漠无情出于何种心态.  相似文献   

唐鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其驱动活性的检测     

王海英  叶星  白俊杰  夏仕玲  劳海华  简清  王琳 《中国水产科学》2008,15(1):47-54

利用PCR技术克隆唐鱼（Tanichthys albonubes）β-actin基因。所克隆的β-aetin基因片段为1464bp，包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT Box、TATA Box、CArG Box等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上，并显微注射到唐鱼受精卵中，荧光显微镜观察红色荧光蛋白（RFP）的表达。结果表明，RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高，最高可达51．8％，且RFP的表达水平较高。PCR检测转基因唐鱼的部分器官组织，在被检组织器官中均能检测到外源RFP基因；而RT-PCR以及Southern blot验证显示RFP mRNA的表达有所不同；Southern blot检测肌肉组织基因组DNA，可见比阳性载体大的杂交条带。说明所检测的组织中已发生外源基因RFP的整合，但有些组织存在表达水平较低或者不表达的现象。本实验分离到的β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能，可启动外源基因在唐鱼体内的高效表达，从而为下一步进行功能基因的转化研究奠定基础。  相似文献   

花博会市场开发全面启动花博特许商品发布     

马叶星  金晖 《中国花卉园艺》2012,(20):16-16

9月27日下午，第八届中国花卉博览会市场开发签约仪式暨特许商品发布仪式在江苏省常州市武进区举行。中国花卉协会副秘书长张引潮，江苏省农委副主任张坚勇，常州市、武进区领导张耀钢、减建中、顾伟国、王友东等出席了活动。  相似文献