草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白的原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

王杭军  叶星  田园园  张莉莉  瞿兰  张蕊 《华中农业大学学报》2013,32(2):97-102

根据草鱼呼肠孤病毒广东株GCRV-GD108编码VP5的M5基因的cDNA序列,分别设计合成带特定酶切位点的特异引物,进行PCR扩增;通过酶切与连接,构建2种重组表达载体pET30c-M5和pColdⅡ-M5,分别转化于大肠杆菌并进行诱导表达;对培养基、诱导时间、诱导剂浓度和温度等条件进行优化,确定最适表达体系.通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.结果显示,所构建的2种VP5蛋白原核表达载体,均在大肠杆菌中成功表达了分子质量大小(约80 ku)与预期相符的重组蛋白,表达产物主要存在于包涵体中.诱导表达后的菌体经离心、洗涤与超声破碎,离心收集包涵体.包涵体通过变性、透析与复性,获得纯化的重组蛋白,其中pET30c-M5/BL21 (DE3) 工程菌的目的蛋白占全菌蛋白的22.5％,纯化后获得了高纯度的重组蛋白(＞95％).比较2种表达载体的表达结果,pET30c-M5具有诱导表达耗时少、获得重组蛋白量大的优势,可为下一步的研究提供足量的蛋白.  相似文献   

长臀鮠大规格苗种培育和成鱼养殖技术研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴土金  钟良明  谷平华  蓝昭军  王杭军  罗钦洪 《水产养殖》2016,(8):23-24

正长臀鮠(Cranoglanis bouderius),俗称马面骨、骨鱼等,属鲶形目,长臀鮠科,长臀鮠属,是我国特有的名贵上等经济鱼类,主要分布在西江的广西上游及广东省的北江,为珠江水系特有种。长臀鮠个体大,最大个体可达3 kg,含肉率高,蛋白质和维生素丰富,肉质细嫩、味道鲜美,具有催乳和滋补功能,深受广大消费者的迎。2006年始,韶关市水产研究所在北江鱼类资源调查的基础上,筛选出具有生长快,食性杂,肉质  相似文献   

草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白功能及免疫原性分析   总被引：3，自引：2，他引：1  

王杭军  叶星  田园园  张莉莉  邓国成 《水产学报》2013,37(1):109-116

在前期研究中分离到一株草鱼呼肠孤病毒,GCRV-GD108,并获得其全基因组序列.该病毒株的M5基因编码VP5蛋白,该蛋白与哺乳动物正呼肠孤病毒μ2蛋白具有较高的同源性及相似的NTPase结合保守区域,推测VP5蛋白也同样具有NTPase活性.为检测VP5蛋白是否具有NTPase活性及其是否具有免疫保护作用,采用已构建的原核表达载体表达VP5重组蛋白,通过孔雀绿钼酸铵法检测纯化后的重组蛋白的NTPase活性.采用DNAstar软件预测M5基因编码蛋白的抗原性,综合蛋白亲水性、表面可及性与表面抗原性三项指标,预测编码蛋白可形成抗原表位的氨基酸区域数多达86个,提示VP5蛋白具有较强的免疫原性.用重组蛋白VP5免疫健康草鱼,通过人工攻毒实验检测VP5蛋白的免疫保护作用.结果显示,VP5重组蛋白具有NTPase活性,且其NTPase活性依赖于Mg2+或Na+/K+,而Ca2+的存在可能抑制其活性;VP5蛋白可诱导草鱼产生高水平的抗体滴度,并显著提高IgM mRNA的表达水平,但未能为草鱼提供抗GCRV感染的保护.研究首次证实GCRV-GD108株VP5蛋白具有NTPase活性,但不能为草鱼提供免疫保护作用.  相似文献