断奶仔猪多系统衰竭综合症发病机理的研究进展     

云涛  倪征  刘光清  陈锦清 《勤云标准版测试》2005,(11)

断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)是由2型圆环病毒(PCV2)引起猪的一种疾病。PMWS的主要病理特征是淋巴细胞衰竭。目前认为PMWS的发病机理与免疫系统有关。在此,就目前关于PCV2-PMWS-免疫系统三者之间关系的研究进展和未来主要的研究方向作一综述。  相似文献   

鸭Ⅰ型禽副粘病毒YH99V株F基因的克隆和序列分析     

云涛  何永强  刘光清  梁华丽  倪征  华炯钢  李双茂 《浙江农业学报》2007,19(1):1-5

从患病鸭群中分离到一株引起鸭产蛋锐减而不死亡的病毒,经鉴定该病毒属于Ⅰ型禽副粘病毒,命名为YH99V株。以YH99V株的基因组RNA为模板,用RT-PCR一步法扩增出其F基因的cDNA序列,然后将其克隆至pMD18-T载体中,对其进行序列测定。结果表明,所克隆的基因片段长度为1 750 bp,含有1个1 662bp的开放式阅读框架(ORF),编码553个氨基酸。将YH99V株F基因序列和推导的氨基酸序列与国内外新城疫毒株的F基因相应序列比较后发现,它们的核苷酸序列同源性分别在82.7%-99.6%,氨基酸序列同源性为87.2%-99.3%。YH99V株在F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与弱毒株在这一区域的序列完全相同,表明为弱毒株。根据F基因的全核苷酸序列,进一步绘制了Ⅰ型禽副粘病毒株F基因的系统发育树。分析结果显示YH99V株与Lasota等参考毒株同属于基因Ⅱ型,表明它们具有较近的亲缘关系。  相似文献   

检测牛、羊布鲁菌多重PCR方法的建立与应用研究     

云涛  关平原  申之义  张七斤  李平安  希尼尼根 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》2012,33(4)

根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成3对引物,以牛种布鲁菌A19,羊种M5,猪种S2基因组DNA为模版,建立可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法,并对方法的扩增效果、特异性、敏感性及适用性进行验证.结果显示,牛种布鲁菌可扩增出222bp和615bp两条带,羊种布鲁菌可扩增出222bp和932bp两条带,该方法对牛种布鲁菌A19和羊种布鲁菌M5混合DNA模板的最小检出量为100pg,对葡萄球菌26001株、大肠杆菌O78等7种参照菌的核酸扩增结果均为阴性.应用该方法对19份布鲁菌血清抗体为阳性牛乳样进行检测,结果均为布鲁菌抗原阳性.  相似文献   

IBRV重组gD蛋白的真核表达与间接ELISA检测方法的建立     

郭宇  杨波  兰德松  郁茵  杨冬梅  王旭红  云涛  牧仁  李雷斌  孙雨 《中国动物检疫》2023,40(2):139-145

通过优化牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）gD基因序列为Sf9细胞偏好密码子,转座形成穿梭载体,将质粒瞬时转染Sf9昆虫细胞,利用昆虫杆状病毒表达系统表达纯化重组IBRV gD蛋白;以制备的重组IBRV gD蛋白为包被抗原,建立检测IBRV血清中和抗体的间接ELISA方法,并通过比对检测已知血清中和抗体效价的牛血清,验证所建立的间接ELISA方法的敏感性、特异性与重复性等指标。结果显示：本研究建立的间接ELISA方法对相关的牛病毒血清抗体无交叉反应,敏感性可达1:512,组内和组间变异系数均低于10%;使用建立的间接ELISA检测方法结合血清中和试验,对480份临床血清样品进行检测,发现两者敏感性符合率为98.18%,特异性符合率为93.33%,总符合率为96.67%。结果表明,本研究建立的检测IBRV血清中和抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可开发为临床适应的检测试剂盒。  相似文献   

新型鸭呼肠孤病毒在DF-1细胞系中的增殖特性     

云涛  华炯钢  叶伟成  倪征  陈柳  张存 《浙江农业学报》2019,31(5):716

为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID₅₀)、RT-PCR检测、间接免疫荧光(IFA)及Western-blot免疫学检测,探索NDRV对DF-1细胞的作用效果。结果表明,NDRV JDM10毒株在DF-1细胞中能有效增殖,产生明显的致病变效应;RT-PCR检测成功扩增出1条大小为1 001 bp的条带;病毒蛋白在细胞中获得了良好的表达,并与抗NDRV σC单克隆抗体发生特异性反应;NDRV JDM10毒株在感染DF-1细胞后会经历潜伏期、快速增长期、稳定期3个时期,并在72 h病毒效价达到峰值,TCID₅₀为1×10^-7.90·(0.1mL)^-1。本研究为进一步研究NDRV的致病机理和研制细胞疫苗奠定了基础。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒NB/04株全基因组分子特征分析     

云涛  刘光清  王根荣  倪征  余斌  张明华  梁华丽  华炯钢  李双茂 《农业生物技术学报》2008,16(2):357-358

对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome viurs, PRRSV）分离株NB/04的全基因组序列测定与分析。该毒株基因组全长15408bp,包含9个开放式阅读框,5’Untranslating Region(UTR)含有189nt,3’UTR含有150nt,其中包含28个Poly（A）。基因组序列分析结果表明,该毒株的Nsp2存在3个核苷酸缺失,3’UTR缺失一碱基。通过与国内外美洲型PRRSV分离株比对分析可知,非结构蛋白区的Nsp2和结构蛋白区的ORF5变异率最大。特别是Nsp2与国内主要分离株的氨基酸相似性在79.3%-96.4之间,ORF5与国内主要分离株的相似性介于86.1%-95.5%。依据Nsp2的推导氨基酸序列进行的系统进化分析可知,NB/04属于北美洲基因型,与BJ-4属于同一分支,而与中国标准株Ch-1a分属于不同的分支,表明浙江PRRSV已发生较大的变异。本研究结果丰富了我国PRRSV毒株的基因组信息数据,为深入研究该毒株的遗传变异与生物学特性之间的关系奠定了基础。  相似文献   

不同基因型鹅星状病毒鉴别诊断RT-PCR方法的建立     

王宏宇  朱寅初  云涛  华炯钢  叶伟成  倪征  陈柳  张存 《浙江农业科学》2021,62(11):2299-2302

鹅星状病毒(GAstV)是近年临床新发病原,也是导致当前雏鹅痛风致死的主要病因,研究显示该病毒存在两种不同基因型。为建立快速准确的核酸鉴别诊断方法,本研究针对不同基因型GAstV保守域RNA依赖性RNA聚合酶序列各设计1对特异性引物,建立以RNA为模板的双重一步法RT-PCR检测方法。条件优化试验结果显示,双重RT-PCR方法彼此无干扰;引物特异性强,对坦布苏病毒、鹅细小病毒、呼肠孤病毒、鸭瘟病毒的检测均为阴性;体系中引物适宜浓度为1 μmol,退火温度范围广,50~54 ℃皆可;敏感性高,最低检测限分别为10³拷贝数和10²拷贝数。对采集自江浙地区的73份样品进行检测,结果显示,鹅星状病毒阳性率为93.2%,主要为Ⅱ型星状病毒的单一感染(阳性率86.3%),部分样品呈现两种类型星状病毒混合感染现象(阳性率6.8%)。上述结果表明本研究建立的双重RT-PCR方法可用于GAstV的鉴别诊断和分子流行病学调查。  相似文献   

牛、羊包虫病及其实验室诊断技术     

郭宇  刘威  李军燕  云涛  兰天驰  罗晓平 《畜牧与饲料科学》2019,40(2):98-101

包虫病(echinococcosis)是由寄生于终末宿主(犬、狼、狐狸等)小肠的棘球蚴感染中间宿主(牛、羊、猪、骆驼、人类等)而引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。该病在临床表现上缺乏特异性,且多为隐性感染,病原体不易检出,严重危害牧区人民健康和畜牧业发展。对包虫病的病原学特点、流行病学特点、实验室检测和诊断技术作一介绍,以期为该病的预防控制和进一步研究提供参考。  相似文献   

利用杆状病毒Bac-to-Bac系统在家蚕表达猪繁殖与呼吸综合征病毒的E蛋白和M蛋白   总被引：2，自引：0，他引：2  

王丹  BHASKAR Roy  李兴华  杨华军  周芳  缪云根  云涛  刘光清 《蚕业科学》2010,36(5):855-859

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害养猪业的传染性病原。PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白基因是开发PRRSV病毒新型疫苗的目标基因。利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统,将PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白的基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb中,获得重组转移质粒pFastBacHTb-E和pFastBacHTb-M,转化大肠杆菌Bm DH10 Bac感受态细胞,获得重组杆粒BmNPV Bacmid-E、BmNPV Bacmid-M,将这些重组杆粒转染家蚕培养细胞Bm5,获得重组病毒BmNPV-E和BmNPV-M。将2种重组病毒分别接种5龄起蚕,用SDS-PAGE和Western blotting方法在重组Bacmid DNA转染的Bm5细胞和感染重组病毒的家蚕幼虫血细胞中分别检测到分子质量约20 kD和18 kD的E蛋白和M蛋白,表明PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白在家蚕培养细胞及幼虫体内获得了表达,为利用家蚕-杆状病毒表达系统研制PRRSV的新型疫苗与诊断试剂奠定了基础。  相似文献   

含FMDV 2A序列PRRSV GP5和M蛋白重组腺病毒的构建与鉴定     

云涛  倪征  余斌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2009,37(8):13-18

【目的】构建表达PRRSV GP5和M蛋白、且二者通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接的重组腺病毒,以期实现2个蛋白的同时表达,发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。【方法】利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进行检测。【结果】检测结果均证明,GP5-2A-M蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为GP5和M蛋白。【结论】在GP5和M蛋白之间插入具有自我裂解功能的FMDV 2A策略是切实可行的,并为PRRSV多个蛋白的共表达奠定了基础,也为其他病毒基因工程疫苗的研制提供了全新思路。  相似文献