醋酸铅对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡基因p53、Bax、Bcl-2表达的影响     

贺秀媛  朱翠娟  袁慧  张君涛  原维  李小波  朱家增  刘宗平 《兽医大学学报》2010,(8):1086-1090

将40只未成年雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只。处理组小鼠分别连续2 d腹腔注射铅10、20、40 mg/kg（按体质量给药）,对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后24、72 h分离卵巢,用原位末端标记法（TUNEL）测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,同时用半定量RT-PCR方法检测凋亡基因p53、Bax、Bcl-2mRNA表达。结果表明,铅可促进颗粒细胞凋亡,且随剂量的增加和作用时间的延长,颗粒细胞中p53、Bax基因表达量逐渐增加,与对照组相比差异显著或极显著（P〈0.05或P〈0.01）;而Bcl-2基因表达量则逐渐减少（P〈0.05或P〈0.01）;表明铅可通过上调促细胞凋亡基因p53、Bax基因表达量,下调Bcl-2基因表达量,诱导卵巢颗粒细胞的凋亡。  相似文献   

大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究     

鞠辉明  白立景  牟玉莲  杨述林  刘宗平  李奎 《畜牧兽医学报》2010,41(12)

本研究旨在探讨通过构建同时表达大肠杆菌植酸酶appA2及人抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)的真核表达载体,比较双基因表达载体和相应单基因表达载体中外源基因的表达效率;从pcDNA-ap-pA2载体上扩增CMV-appA2-BGHpA片段,通过MluI酶切位点连接到pcDNA-MxA载体中,构建重组载体pcDNA-appA-MxA(下称AMP),分别将pcDNA3.1(+)、pcDNA-MxA、pcDNA-appA2及AMP质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,取细胞通过实时荧光定量PCR测定细胞内appA2及MxA的表达,同时部分细胞通过Westernblot测定细胞内MxA蛋白表达量,采用改进的钼酸铵显色法测定细胞内植酸酶活性;酶切及测序结果表明成功构建了AMP载体;QRT-PCR结果表明,转AMP细胞组MxA表达水平是转pcDNA-MxA组的1.118倍,转AMP细胞组appA2表达水平是转pcDNA-appA2组的1.134倍,上述各组间差异显著(P0.05)。灰度分析结果表明,AMP细胞组细胞内MxA表达量是转染pcDNA-MxA细胞组的1.07倍;植酸酶活性测定试验结果表明,转AMP、pcDNA-appA2细胞组及对照组细胞内植酸酶酶活和对照组平均酶活分别为0.294、0.235及0.082FTU·μL-1,2个试验组间差异不显著,试验组和对照组间差异极显著(P0.01);试验结果表明本研究构建双基因表达载体中外源基因的表达效率比相应单基因表达载体表达效率高,本研究为以后多基因共表达及制备多基因转基因动物奠定了基础。  相似文献   

镉对大鼠原代肝细胞的毒性损伤   总被引：3，自引：0，他引：3  

汪纪仓  张英  裔传卉  邹辉  刘宗平 《中国兽医学报》2010,30(4)

用两步灌流法获得大鼠肝细胞,肝细胞暴露于浓度为2.5、5、10μmol/L的醋酸镉24 h.测定了细胞活力、培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性及细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的变化.结果表明,细胞相对存活率显著下降(P<0.01),LDH、AST和ALT的释放量增加,5μmol/L和10 μmol/L剂量组与对照组相比差异均显著(P<0.01),细胞内GSH-PX活性降低,各剂量染毒组与对照组相比,差异均极显著(P<0.01);细胞内GSH含量升高,5 μmol/L和10μmol/L剂量组与对照组差异均显著(P<0.05),细胞内MDA含量升高,10μmol/L剂量组与对照组相比差异显著(P<0.05).表明镉可致肝细胞损伤,并且氧化应激起了重要作用.  相似文献   

奶牛乳房炎抗性基因TAP cDNA克隆及序列分析     

姚学萍  栾红雨  袁曦  曹随忠  余树民  刘长松  刘宗平 《中国畜牧兽医》2010,37(4):71-75

采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF) 195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。TAP基因cDNA完整开放阅读框的克隆,为进一步开发应用重组牛β-防御素奠定了基础。  相似文献   

高效液相色谱荧光检测法同时检测鸡蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留     

谢恺舟  姚宜林  徐东  陈学森  谢星  戴国俊  刘宗平  陈国宏 《中国兽医杂志》2011,47(8)

建立了高效液相色谱荧光检测法同时检测鸡蛋中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留的方法.鸡蛋经碱性乙酸乙酯提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后用流动相溶解.用Lichrospher C1s柱,以乙腈-磷酸二氢钠溶液(0.01 mol/L,含0.005 mol/L十二烷基硫酸钠和0.1％三乙胺)(35:65,v/v)为流动相,在激发波长224 nm、发射波长285 nm处用荧光检测器检测.氟苯尼考在0.01～10.0 mg/L、氟苯尼考胺在0.002 5～2.5 mg/L浓度范围内,本方法线性关系良好,相关系数分别为0.99 97和0.999 8.当添加水平氟苯尼考为15～500μg/kg、氟苯尼考胺为5～500 μg/kg时,该方法平均回收率分别为87.41％～92.29％和89.01％～95.15％,相对标准偏差分别为3.51％～5.36％和4.28％～5.72％;检测限分别为1.5 μg/kg和0.5 μg/kg(S/N=3);定量限分别为5μg/kg和2 μg/kg(S/N=10).该方法简便、快速、灵敏度高,可同时检测鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留.  相似文献   

甲砜霉素在鸡蛋中的残留消除规律     

谢恺舟  姚宜林  徐东  陈书琴  谢星  裴燕  戴国俊  王金玉  刘宗平 《畜牧兽医学报》2011,42(1)

研究甲砜霉素在鸡蛋蛋清、蛋黄及全蛋中的残留消除规律.鸡蛋经碱性乙酸乙酯提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后用流动相溶解,高效液相色谱荧光检测器检测.测定鸡蛋蛋清、蛋黄及全蛋样品中甲砜霉素的最低检测限均为1.5 μg·kg-1(S/N=3)、最低定量限均为5 μg·kg-1(S/N=10).产蛋鸡分别按10.0、20.0和50.0 mg·kg-1·d-1给药剂量,每天1次,连续5 d内服给药后,蛋清、蛋黄及全蛋中甲砜霉素残留量呈上升趋势.休药第1天,蛋清、蛋黄及全蛋中甲砜霉素残留量均达到峰值.休药前期蛋清、蛋黄及全蛋中甲砜霉素残留消除较快,后期消除缓慢.休药6 d时,全蛋中甲砜霉素残留量均低于50μg·kg-1,蛋清中甲砜霉素残留量低于最低检测限(1.5,μg·kg-1);休药8 d时,蛋黄和全蛋中甲砜霉素残留量均低于最低检测限(1.5 ug·kg-1);甲砜霉素在蛋清、蛋黄及全蛋中的残留量与给药剂量呈正相关.  相似文献   

铅对SD大鼠成骨细胞磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C的影响     

贺秀媛  张志平  邓立新  张君涛  仝宗喜  董海聚  刘芳  刘宗平  袁慧 《中国兽医学报》2011,31(7)

在体外培养新生sD乳鼠的成骨细胞中暴露不同浓度的醋酸铅（O、20、40、80μmol／L）,作用24h后检测细胞磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C（PC-PLC）活性与PC—PLC蛋白的表达量。结果表明：不同浓度的醋酸铅均可使成骨细胞PC—PLC活性和PC-PLC蛋白表达量极显著降低（P〈0．01）,呈明显的剂量-效应关系,表明成骨细胞铅暴露可通过抑制PC—PLC而发挥毒性作用。  相似文献   

醋酸铅对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞形态的影响     

梅莉  路浩  何玉琴  刘宗平  达剑森  张英 《甘肃农业大学学报》2008,43(3)

为了观察醋酸铅对神经细胞的形态学影响,通过建立体外培养大鼠大脑皮质神经细胞模型,应用不同浓度醋酸铅(0,50,100,200,400μmol/L)与神经细胞分别培养3、6、12、24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化.结果显示,醋酸铅与神经细胞共同培养12~24 h,细胞密度降低,胞体变小,突起缩短;随醋酸铅浓度递增,细胞形态较对照组差异愈加显著(P<0.05).表明染铅浓度与神经细胞形态变化存在剂量效应与时间效应关系.  相似文献   

甘肃不同地区(革丽)(革干)金鳟肌肉微量元素含量的比较     

钱续  刘宗平 《甘肃畜牧兽医》2006,36(4)

对甘肃兰州市、甘南州和张掖市金鳟肌肉中的微量元素含量进行了测定和比较.结果显示,(革丽)(革干)金鳟肌肉组织中铁含量最高,其次为锌、铜、锰,硒含量最低.三地之间鱼肌肉组织中除锌含量比较接近之外,其他元素含量在不同地区有一定差异.另外,相同鱼池中的个体之间微量元素含量也存在较大差异.所测三地(革丽)(革干)金鳟饲料中5种元素含量均高于有关鱼营养需要.  相似文献   

奶山羊细菌人工染色体基因文库构建的初步研究     

鞠辉明  张信军  李贵阳  刘宗平  成勇 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2006,27(3):23-26

细菌人工染色体(BAC)文库是进行动物基因组学研究的一个重要手段,为配合山羊乳腺生物反应器的研究,对构建山羊基因组BAC文库进行了初步研究。用H indⅢ酶对莎能奶山羊基因组进行部分酶切,用CHEF(箝位匀强电场)二次电泳法回收150 kb大小条带,电透析回收高分子量(HMW)DNA;同时以BAC载体pB eloBAC 11为材料,分别采用限制性内切酶H indⅢ和HK脱磷酶对其进行酶切和脱磷,将该载体自连并通过凝胶回收线性段DNA,获得了可用于构建BAC文库的线性载体。将HMW与载体进行连接,电击转化感受态DH 10β大肠杆菌,一次转化得到近2 000个克隆。插入片段大小为50~200 kb,基本满足建库的需要。  相似文献