狂犬病病毒糖、核蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验   总被引：5，自引：1，他引：5  

袁慧君  扈荣良  包世俊  张守峰  殷震 《中国兽医学报》2004,24(2):141-144

分别以 p IRES1neo和 p VAX1为载体 ,构建了以狂犬病病毒糖蛋白和核蛋白为目的基因的基因疫苗单或双基因表达载体。以司苯 -甘油作为包裹剂 ,按 1μg DNA用 0 .5μL司苯 -甘油比例混合 ,将各表达载体制成 DNA疫苗 ,进行小鼠免疫试验。免疫共分 p IRES1neo、p IG- neo、p IN- neo、p IGN、p IG- neo p IN- neo、p VAX1、p VG、p VN和 p VGN9个试验组 ,每只小鼠于后肢胫前肌每侧接种基因疫苗 5 0μL (0 .5 g/ L ) ,共免疫 3次 ,间隔 14 d。通过间接 EL ISA和细胞中和指数测定分别检测免疫应答水平。结果显示 ,1免疫 3次后 ,所有试验组抗体阳转率 10 0 % ;2第 3次免疫后 14 d检测 ,抗体水平显著上升 ;3以 p IRES1neo为载体构建的基因疫苗免疫效果普遍优于以 p VAX1为载体构建的基因疫苗 ,其中含有糖蛋白 /核蛋白双基因共表达载体 p IGN免疫组的抗体水平均高于其他试验组 ;4以 7.5个 L D50 的 CVS强毒肌肉攻毒 ,保护率达 89%。通过以上试验证明 ,p IGN是用于本动物免疫试验的最佳 DNA疫苗。  相似文献   

非洲猪瘟病毒沈阳分离株p30基因的克隆及其亲水区的原核表达     

王永志  安鼎杰  李小宇  李忠鹏  张静远  张守峰  扈荣良  赵玉民 《吉林农业科学》2019,44(1):40-43

2018年中国首次发生了非洲猪瘟疫情。本研究从来源于沈阳地区的1个非洲猪瘟病毒(African swine fever vi?rus, ASFV)分离株中克隆了p30基因(GenBank No. MK482370)。序列分析发现,该基因与安徽分离株相同(GenBank No.MK128995),而与已报道的沈阳分离株SY-18株(GenBank No. MH766894)不同,新克隆的p30基因全长585 bp,编码194个氨基酸,而SY-18株p30基因全长606 bp,编码201个氨基酸。该结果提示,我国的ASFV存在基因变异或者传播来源复杂,流行病学分析应关注该基因,不同毒株的致病力有待深入研究。本研究利用pGEX-6p-1表达系统成功表达了p30基因的亲水区;通过Ni-NTA-琼脂糖亲和层析技术对重组蛋白进行纯化,获得了纯度较高的重组蛋白,为ASFV的血清学监测提供了抗原。  相似文献   

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

周井祥  薛江东  刘晔  张守峰  朱霞  扈荣良 《中国预防兽医学报》2010,32(12)

为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2),本研究将PRRSV GP5蛋白基因表达盒连接于E3区部分缺失的CAV-2全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2中,构建重组质粒pPoly-Ⅱ-CAV-2-GP5。并采用PmeⅠ和AscⅠ双酶切和脂质体介导法,将其转染MDCK细胞,获得重组病毒rCAV-2-GP5,经酶切鉴定显示该重组病毒含有目的基因。经RT-PCR检测表明,rCAV-2-GP5能够转录相应GP5蛋白基因mRNA;western blot检测证实GP5蛋白在MDCK细胞中得到表达。体外连续传30代检测表明,rCAV-2-GP5具有良好的遗传稳定性。本实验为PRRSV新型疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

非洲猪瘟病毒p54间接ELISA抗体检测方法的建立及试剂盒研制     

岳慧贤  李其炫  惠丽丽  赵心馨  陈腾  张艳艳  王述超  缪发明  张菲  张守峰  扈荣良 《中国兽医学报》2024,(5):907-913

非洲猪瘟是对全球养猪业危害最严重的病毒性传染病,目前尚无有效疫苗。p54蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的重要结构蛋白之一,参与病毒的吸附和侵入,是非洲猪瘟血清学诊断的重要靶标之一。本研究采用无标签的重组p54蛋白作为包被抗原,建立了ASFV p54间接ELISA抗体检测方法,优化了检测条件,组装成了试剂盒。根据对374份阴性猪血清的检测,确定了本试剂盒检测的临界值,并利用不同猪病原阳性质控血清进行了敏感性、特异性和稳定性研究。结果显示,本方法检测阴/阳性血清的临界值为0.250;敏感性血清质控品的最小检出限为1∶1 600倍,与ASFV阳性血清、猪伪狂犬病病毒阳性血清、猪繁殖与呼吸病毒综合征病毒阳性血清、猪圆环病毒2型阳性血清、猪细小病毒阳性血清和猪抗大肠杆菌阳性血清等6种特异性质控血清均无交叉反应;试制的3批试剂盒批间和批内变异系数均小于10%。试剂盒在2～8℃贮存9个月,特异性、敏感性保持不变。以上试验结果表明,本试剂盒具有良好的敏感性、特异性和稳定性,与OIE推荐的p72阻断ELISA抗体检测试剂盒具有较高符合率,为非洲猪瘟临床血清学诊断和抗体监测提供了良好的技术支持。  相似文献   

1株非洲猪瘟病毒自然变异毒株的鉴定     

张艳艳  张静远  杨金金  杨金梅  韩桪  米立娟  张菲  齐宇  张守峰  王颖  周鑫韬  岳慧贤  王述超  陈腾  扈荣良 《中国兽医学报》2021,(2):199-207

非洲猪瘟(ASF)于2018年传入我国后已流行了2年有余,我国非洲猪瘟病毒(ASFV)毒株未曾出现较大变异.最近,针对我国ASF疫情放缓以及感染猪出现的低死亡率现象,我们在ASFV生态学研究中,从主动监测的样品中分离到1株源自湖北某地的ASFV自然变异株.经基因组测序发现,其EP402R基因(CD2v)和上游相邻的EP...  相似文献   

腺病毒载体狂犬病疫苗研究进展     

王林栋  张守峰  扈荣良 《动物医学进展》2012,33(8):69-73

狂犬病是一种古老的人兽共患传染病。世界上已有部分国家和地区成功地消灭了狂犬病。在我国,每年有约3 000人死于狂犬病。腺病毒作为载体的优点包括高效的入核机制、优良的转染性、较低的病原性、较高的基因表达量及清楚的基因背景。目前,腺病毒已广泛应用于基础研究、基因治疗和疫苗研发。20世纪末,以腺病毒为载体的表达狂犬病病毒糖蛋白的疫苗就已诞生,一直发展至今。以腺病毒载体狂犬病疫苗作为口服疫苗,可望在控制和消除狂犬病中发挥着巨大的作用。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达     

高博  马玲  张念  毛燕  陈凤莲  张守峰  刘烨  张菲  扈荣良  吴健敏 《动物医学进展》2012,(1):23-27

为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包装出含有GP5和M基因的重组腺病毒rAd5-GP5-M。应用PCR技术、间接免疫荧光、Western blot分析,结果表明,GP5和M基因已经被成功整合到了腺病毒基因组上,且GP5和M蛋白在293AD细胞上均得到了表达;滴度测定表明,该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/mL;连续传代试验表明该重组腺病毒可在细胞内稳定繁殖,有效地转录并表达GP5和M蛋白,具有较高的遗传稳定性。该研究为PRRSV重组腺病毒疫苗的研制打下了基础。  相似文献   

我国首次从吉林省境内蝙蝠体内分离获得狂犬病毒     

刘晔  张守峰  张菲  赵敬慧  扈荣良 《中国兽医学报》2012,32(12)

狂犬病毒属（Lyssavirus）是弹状病毒科（Rhabodoviridea）中引起中枢神经系统感染和脑脊髓炎的同类成员的总称,由于所有成员均能感染动物和人,引起狂犬病样症状,故名狂犬病毒属。  相似文献   

抗菌肽重组逆转录病毒载体的构建、重组病毒的包装及其在牛奶中的稳定表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

张锦霞  张守峰  郭学军  扈荣良 《中国兽医学报》2008,28(12)

将含有双抗菌肽基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLN-bcp-LK(R)中,获得了含有双抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体pLN-bcp-LfcinB-CE-MA(R),利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后,用病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL,用病毒上清转染妊娠中后期奶牛乳腺组织,产犊后采集的奶样经琼脂板溶圈法和Tricine-SDS-PAGE检测,结果表明乳汁中表达的抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有明显地抑菌活性,并能实现相对稳定的表达,表达可持续30~45 d。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒疫苗株Bartha-K61在犬科动物体内的安全性评价及免疫实验   总被引：1，自引：0，他引：1  

袁子国  张秀香  高胜言  王晓虎  张守峰  扈荣良 《中国兽医学报》2008,28(10)

为了对猪伪狂犬病病毒(PRV)疫苗株Bartha-K61在犬科动物体内的安全性和免疫原性作出评价,通过3种免疫途径(肌肉注射、滴鼻免疫和口服免疫)对犬进行免疫(2 mL,6×10 8PFU/mL),并在免疫结束后通过组织病理切片、免疫组化、临床表现、产仔性能、排泄物中病毒存留情况进行了检测.结果发现,在PRV易感器官内未发现病毒抗原,且疫苗接种犬体温正常,精神状态良好,产仔正常,无任何不良症状,排泄物中亦无病毒粒子残留;同时,通过对免疫后犬只的细胞免疫水平、体液免疫水平和中和试验的检测发现,3种免疫途径均可有效地刺激机体产生免疫应答,且中和抗体水平达到较高水平.从而证明,PRV Bartha-K61在犬科动物体内安全有效,为以PRV为栽体表达犬科动物疫病的抗原基因重组活栽体疫苗的研制提供了科学依据.  相似文献