伪狂犬病病毒TK-/gI-株PK基因转移载体的构建及LacZ基因表达     

袁子国  张秀香  刘全  高胜岩  徐慧娟  张守峰  刘晔  扈荣良 《中国兽医学报》2008,28(4)

伪狂犬病病毒TK-/gI-株基因组经AscⅠ酶切获得含PK基因的8.7 kb片段,将此片段克隆入pPolyⅡ载体的AscⅠ位点,获得中间载体P8-AA,将LacZ表达盒插入其SphⅠ/NdeⅠ位点,构建重组转移载体P8AA-lacZ,将其与伪狂犬病病毒TK-/gI-株基因组共转染PK-15细胞,细胞出现病变后通过覆盖含有X-gal的营养琼脂进行蓝白斑筛选,通过蚀斑克隆方法分离到重组体PRV(rPRV),且经过连续传代的rPRV仍能稳定的表达β-半乳糖苷酶活性.通过对重组病毒PRV-LacZ和亲本株TK-/gI-株TCID50的试验表明,PK基因的缺失对病毒增殖无影响.  相似文献   

狂犬病病毒糖蛋白基因正向重组伪狂犬病病毒（疫苗株TK^-／gI^-）的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

袁子国  张秀香  李修明  王晓虎  高胜言  徐惠娟  张守峰  扈荣良 《中国兽医学报》2008,28(12)

构建以伪狂犬病病毒(PRV)为载体表达狂犬病病毒糖蛋白的重组活载体疫苗。采用AseⅠ/MluⅠ切下EG-FP-rgp的表达盒,将其克隆入p8-AA载体的酶切位点处,经酶切鉴定为正向连接,阳性重组子命名为p8-EGFP/rgp。将该质粒与PRV TK-/gI-基因组在质脂体介导下共转染PK-15细胞,获得PRV-EGFP/rgp重组病毒;通过噬斑克隆对其进行筛选、纯化,并通过RT-PCR、Southern-blot、Western-blot和间接免疫荧光对其进行鉴定,并对重组病毒的滴度、外源基因的遗传稳定性及其与亲本病毒株生长特性的关系进行了测定。结果表明:重组病毒的滴度(TCID50)为108.125/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性;PRV-EGFP/rgp与亲本病毒PRV TK-/gI-生长趋势差异不显著。通过构建表达狂犬病病毒糖蛋白正向重组PRV的活载体疫苗的研制,为狂犬病疫苗的研制提供了新的思路和方法。  相似文献   

腺病毒载体的研究进展与展望   总被引：2，自引：0，他引：2  

袁子国  张秀香  高胜言  徐慧娟  扈荣良 《吉林畜牧兽医》2008,29(1):13-15

随着重组技术在生物领域上的应用,病毒活载体疫苗的研制成为基因工程疫苗研制的热点,其中,腺病毒由于其具有独特的优势,成为疫苗载体应用中的不可缺少部分,本文就腺病毒载体的研究进展作一简要综述,旨在为其进一步应用提供参考依据。  相似文献   

以伪狂犬病病毒(Bartha-K61)为载体正向表达狂犬病病毒(8202株)糖蛋白重组疫苗的构建     

袁子国  张秀香  徐慧娟  王晓虎  张守峰  扈荣良 《中国兽医学报》2009,29(10)

构建以伪狂犬病病毒Bartha-K61株为载体的正向表达狂犬病病毒(8202株)糖蛋白的重组活载体疫苗.将eGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Mlu Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,经酶切鉴定为正向连接,阳性重组子命名为p8AA-eGFP/rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得rPRV/eGFP/rgp重组病毒.对纯化后的重组病毒进行RT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光鉴定.结果表明,重组病毒的滴度(TCID_(50))为10~(8.125)/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性;通过构建表达狂犬病病毒糖蛋白正向重组Bartha-K61的活载体疫苗的研制,为狂犬病疫苗的研制与开发奠定基础.  相似文献   

水稻成熟种子组织培养体系的优化及建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

张秀香 《安徽农学通报》2012,18(12):39-40,42

通过对3个粳稻品种成熟种子的表面消毒、愈伤组织诱导、分化及生根条件等对水稻成熟种子培养再生成株,对种子表面消毒剂、2,4-D浓度、继代培养时间等条件进行了优化。结果表明,在优化条件下,粳稻的绿苗分化率在90％以上,由此建立了一套高效、可靠、重复性好的水稻组织培养再生系统,为水稻遗传转化的顺利进行奠定了基础。  相似文献   

重组伪狂犬病病毒rPRV／eGFP／rgp活疫苗免疫幼犬的最小免疫剂量及攻毒保护试验     

袁子国  张秀香  王晓虎  徐慧娟  张守峰  刘云方  扈荣良 《黑龙江畜牧兽医》2008,(8)

目前,研究发现已有多种外源基因在伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)中表达,这些外源基因主要是一些猪的传染病病原的抗原基因(猪瘟病毒的E1、E2和猪细小病毒)和筛选标记基因(β-半乳糖苷酶和绿色荧光蛋白等),而对于异种动物致病性抗原[如狂犬病病毒(RV)等]基因的研究尚未见报道.  相似文献   

生菜无土栽培技术     

杨春丽  张秀香  王洪周 《现代农业》2008,(12):12-12

一、育苗 1．品种选择。无土栽培生菜寅选用早熟、耐热、抽蔓晚、结球性好的品种。如皇帝、凯撒、奥林匹亚、北山3号等都可以选用。其中北山3号最为理想。  相似文献   

狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区真核表达载体的构建及其在DK细胞中的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

袁子国  王晓虎  徐慧娟  张守峰  扈荣良  张秀香 《中国畜牧兽医》2011,38(6):60-63

为了研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(rgp)膜外区在以糖蛋白为免疫原的免疫应答中的作用,提取RV的RNA,通过RT-PCR扩增RV糖蛋白膜外区1375 bp的序列,将其克隆入pMD18-T载体中,经测序比对正确后,通过酶切将其亚克隆入pVAX1表达载体的多克隆酶切位点处,将酶切鉴定正确的阳性重组子命名为pVAX-rgp,构建表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区的真核表达载体,在质脂体介导下转染DK细胞观察其表达情况。研究结果表明,经免疫荧光和Western blotting鉴定,有特异性荧光和60 ku条带产生,证明pVAX-rgp载体中的rgp可在DK细胞中表达。本研究通过成功构建狂犬病病毒8202株糖蛋白膜外区的真核表达载体,为下一步有关功能基因组的研究和基因疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

用PCR技术诊断黑龙江省主栽辣椒的疫病抗性     

张秀香  李海燕  张合豫  袁子国  王宪国 《黑龙江八一农垦大学学报》2005,17(5):37-40

应用PCR技术对黑龙江省主栽辣椒品种（哈椒1号、先锋2号、威风3号、湘研1号、茄门、普莱特、日本樱椒）进行了抗/感疫病的鉴定.对辣椒叶片组织DNA进行PCR扩增,电泳结果表明：哈椒1号、湘研1号、普莱特、日本樱椒在550 bp处均出现一条亮带,说明以上四个品种均为抗病品种;而先锋2号、威风3号、茄门在550 bp处均未出现条带,说明该三个品种均属于感病品种.  相似文献   

汉坦病毒长春分离株YZG-Changchun S基因片段克隆和序列分析     

袁子国  张秀香  郝雪  李修明  张守峰  徐慧娟  高胜岩  王晓虎  扈荣良 《黑龙江畜牧兽医》2007,(11)

肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)和汉坦病毒肺综合征(Hantavirus Pulmonary Syndrom,HPS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属中的病原体引起的一种病情重、病死率高的自然疫源性急性传染病。目前发现汉坦病毒有20多种血清型,在我国主要流行汉滩病毒(Hantaan virus,HT- NV)和汉城病毒(Seoul virus,SEOV)2种型别病毒。  相似文献