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为制备牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的重组NP (rNP)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合.采用以BPIV3为检测抗原的间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得1株稳定分泌抗NP特异性MAb的杂交瘤细胞株(5E5)并制备腹水,采用rNP及BPIV3包被的ELISA效价分别是2×106和1.28×105.间接ELISA、western blot、IFA试验表明该MAb具有良好的反应性和特异性.经抗体亚类鉴定该MAb亚类为IgGl/κ.特异性试验表明该MAb不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒反应.免疫组化试验表明该MAb可以检测BPIV3感染动物体内的病原.该MAb还可用于建立检测BPIV3病原及抗体的诊断方法,同时为研究NP的结构和功能提供了条件. 相似文献
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本研究从内蒙古某牛场患呼吸道病牛鼻拭子中分离到1株病毒,命名为NM575,并对其进行了鉴定。分离的病毒能够抵抗100μg/m L的DNA抑制剂5-溴脱氧尿苷,确定为RNA病毒。电镜观察可见无囊膜球形的病毒粒子,直径约30 nm,与小RNA病毒形态学特征相符。理化特性鉴定结果表明分离病毒对乙醚、氯仿及胰酶具有一定抵抗力,耐酸,对热敏感,与牛肠道病毒特性相符。应用牛肠道病毒P1基因的特异性引物,通过RT-PCR可从病毒细胞培养物中扩增出特异性片段,对其进行序列测定并与Gen Bank中登录的牛肠道病毒参考毒株及其他种属的肠道病毒参考株相应的序列进行比对及系统进化分析,结果显示分离毒株NM575与牛肠道病毒BHV-261株的核苷酸同源率为80%,进一步说明分离株为牛肠道病毒,且基因分型为EV-F1。病毒的体外细胞培养嗜性试验结果显示,NM575株可感染牛、仓鼠、猪、犬和鸡等多种动物细胞,尤其在牛源细胞中复制滴度最高,为10~(7.6) TCID_(50)/m L。综合以上结果分析确定所分离的病毒株NM575为牛肠道病毒,这是我国首次从患呼吸道病牛鼻拭子中分离获得。 相似文献
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马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)属于逆转录病毒科慢病毒属,由该病毒引起的马传染性贫血(简称马传贫或EIA)是马属动物的一种非常重要的传染 相似文献
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本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列，设计并合成一对特异性引物，经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株(A／Equine／Qinghai／1／94)NA基因，将片段连接到PGEM—T-easy载体并转化DH5a，提取阳性菌落的质粒经EcRol酶切和PCR鉴定其大小均为1．4Kb左右，对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现，我国马流感病毒青海株与A／Equine／Alaska/1／91、A／Equim／Tennessee/5／86和A／Equine／Algiers/72等关系较近，核苷酸同源率为98．2％—97．4％；与我国马流感吉林株(A／Equine／Jilin／1／89)关系较远，核苷酸同源率仅为72．0％；而与H7N7亚型马流感病毒A／Equine／Prague／1／56核苷酸同源率仅为38．0％。 相似文献
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本试验以纯化的重组马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区蛋白作为诊断抗原建立了间接ELISA诊断方法，确定其最佳工作条件为每孔包被重组抗原2仙g，兔抗马IgG酶标抗体以1：4000，血清以1：40倍稀释，底物作用时间为10 min；判定标准为P／N值大于2，且OD值大于0．2的血清为阳性，否则判为阴性。本试验所建立的诊断方法与琼扩试验以及以琼扩抗原作为包被抗原的ELISA试验进行了比较，表明该诊断方法敏感性更高。特异性和重复性试验表明该诊断方法具有良好的特异性和重复性。通过对4匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马血清抗体的检测，发现均在接种2周后可产生抗马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区相应抗体。此抗体一直持续存在到本试验检测的免疫后17个月，且效价较高。，用此方法检测203份马血清样品，其中161份呈抗体阳性，还检测了马传贫自然感染马血清93份，结果全部为阳性。 相似文献
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