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本研究旨在建立一种快速、简便的鸡传染性支气管炎抗体的检测方法.通过生物信息学软件对传染性支气管炎病毒(IBV) ZY3株的S1蛋白进行分析后,筛选出4段S1蛋白抗原表位优势区域(FI～F4),将4段表位串联成1条新基因F,对F基因编码的蛋白质进行二级结构预测·结果表明该蛋白抗原指数性高且具有良好的柔韧性.构建重组表达载体pET-32a(+)-F,并在原核表达系统中表达,获得大小为42 ku的融合蛋白,经Western blot 分析表明表达的串联蛋白具有良好的反应原性.以纯化的串联蛋白作为包被抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法.利用建立的ELISA方法对采集来175份血清样品进行检测,并与商品化试剂盒进行对比,显示其阳性符合率为90.2％,阴性符合率为85.7％,总体符合率为89.7％o,表明建立的ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性. 相似文献
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四川规模化猪场仔猪黄、白痢E.coli的分离鉴定 总被引：13，自引：0，他引：13
从四川省17个规模化猪场发生典型仔猪黄、白痢猪的红拭粪样及死亡猪的心血和肝脏中分离鉴定出245株致病性大肠杆菌，用35种大肠杆菌O抗原单价血清进行了血清学鉴定。结果表明：245株分离菌有172株能定型，分属30种血清型，其中以O60（13．3％）、O89（10．47％）、O119（9．30％）、O141（8．14％）、O9（8．14％）O20（6．40％）、O137（5．81％）和O101（5．23％）等8种为优势血清型。同一猪场存在多种血清型，大多数猪场有本场的优势血清型。同一地区的不同猪场流行的主要血清型一般不同。不同地区猪场的优势血清型有的相同，有的不同。四川规模化养殖场分离的E.coli血清型与80年代初报道的血清型比较已发生了大变化。 相似文献
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鸡IL-6真核表达载体的构建及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究 总被引：1，自引：1，他引：0
利用RT—PCR方法从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞RNA中扩增出IL-6基因,与pCI—neo连接构建真核表达质粒pCI—IL-6,并研究pCI—IL-6在CEF细胞中的表达及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用。研究发现,pCI—IL-6在CEF细胞中得到表达,pCI—IL-6和LaSota疫苗联合免疫组HI抗体、CD4^＋、CD8^＋和CD3^＋T淋巴细胞百分含量从免疫后第14天起均高于LaSota疫苗单独免疫组。其中,HI抗体效价在第14、21和35天时差异显著（P〈0．05）,在第28天时差异极显著（P〈0．01）;CD4^＋、CD8^＋和CD3^＋T淋巴细胞百分含量在第14天后表现为差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在免疫后第35天进行攻毒,pCI—IL-6和LaSota疫苗联合免疫组的保护率为89．5％,而LaSota疫苗单独免疫组的保护率为76．5％。结果表明,pCI—IL-6真核表达质粒在鸡体内成功表达,并能明显提高新城疫LaSota疫苗的免疫效果,具有免疫增强作用。 相似文献
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多重耐药鸡致病性沙门氏菌I类整合子的检测研究 总被引：3，自引：0，他引：3
采用药敏纸片法（NCCLS 2004），对19株鸡致病性沙门氏菌进行了药敏试验，结果19株菌对丁胺卡那霉素、卡那霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素、氨苄青霉素、强力霉素、氟哌酸、头孢三嗪、氯霉素、磺胺异恶唑、四环素、先锋V 13种药物的耐药率分别是：5.26%、63.16%、47.37%、36.84%、84.21%、84.2%、100%、57.9%、5.26%、52.6%、89.47%、100%、26.3%。19株菌多为多重耐药：其中耐5种、6种、7种、8种、9种、10种药物的分别为10.53%、 5.26%、15.79%、21.05%、15.79%、15.79%，多重耐药率84.21%（16/19）；根据I类整合子的结构设计了３对引物，对I类整合子的intI1、可变区、3’保守端进行扩增，检测鸡致病性沙门氏菌I类整合子,分析I类整合子与多重耐药的关系，扩增出了750～2000 bp的基因盒片段，检出率为73.68%（14/19），多重耐药菌的I类整合子检出率为87.5%（14/16），I类整合子PCR阳性菌株多重耐药率为100%（14/14）。研究结果表明，I类整合子与多重耐药之间有明显的相关性。 相似文献
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根据GenBank上公布的IBV基因组序列，经多重比较后设计19对引物，用RT-PCR方法对禽传染性支气管炎病毒致肾病变型分离株SAIBk株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明：SAIBk株基因组序列全长27520 bp，A＋T的含量占61．74％，具有典型的冠状病毒基因组结构。基因组内碱基的插入和缺失主要分布在3 220-3470位、20560-20810位、25310-25600位和27150—27220位。与GenBank上公布的5株IBV基因组序列Beaudette、Mass41、Ca199、BJ、KQ6的同源率分别为87．2％、87．6％、87．2％、85．6％和87．5％。SAIBk株基因组不同区域的同源性分析结果表明，3＇UTR和5＇UTR是基因组中最为保守的区域，同源率在90．9％～97．7％，而S1基因是基因组中变异最大的区域，同源率在74．8％～83．2％。系统进化分析结果表明SAIBk株与国内分离株S14、LX4、BJ的亲缘关系较近。 相似文献
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规模化猪场繁殖障碍性疾病的血清学调查 总被引：6，自引：0，他引：6
此试验用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对规模化猪场的1498份猪血清进行了猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)、猪细小病毒病(PP)、猪日本乙型脑炎(JE)、猪瘟(HC)以及猪圆环病毒2型(PCV2)感染的抗体检测。检测结果表明,猪瘟免疫抗体的阳性率为69.0%(156/226);猪细小病毒病、猪日本乙型脑炎和猪伪狂犬病免疫抗体的阳性率分别为79.9%(175/219)、87.2%(191/219)和74.8%(217/290);猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体的阳性率为58.8%(67/114),未免疫抗体的阳性率达61.5%(150/244);猪圆环病毒2型感染未免疫抗体的阳性率为66.7%(98/147)。结果表明,引起繁殖障碍的疾病中,猪细小病毒病、猪日本乙型脑炎和猪伪狂犬病的免疫效果较好;而猪繁殖与呼吸综合征的免疫效果较差,并与猪圆环病毒病困扰某些猪场。根据检测结果,提出了相应的防制措施。 相似文献
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四川某商品猪场仔猪出现以体温升高,背、腹和腿部皮肤发绀,淋巴结出血肿大,肺、脾脏出血、化脓为主要特征的疾病。通过对分离细菌的纯化培养、形态学观察、生化试验、致病性试验和药物敏感性试验,鉴定出一株致病菌。应用通用引物对其16S rRNA基因进行克隆和序列分析,序列在NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的棒状杆菌属中25株不同种的菌株16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。分离纯化的细菌在鲜血琼脂平板厌氧条件下生长良好,为革兰氏染色阳性杆状菌,能发酵部分糖类,能致死小白鼠,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与棒状杆菌属细菌的同源性最高,在78.2%~98.0%之间,遗传进化树分析结果表明,该菌株与棒状杆菌属细菌属于同一分类群,分离菌鉴定为棒状杆菌。 相似文献
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