利用流式细胞术分析活化T淋巴细胞特性     

胡茂志  孟闯  潘志明  吴凤珍  高明燕  刘蓓蓓  焦新安  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2008,29(4)

用多克隆刺激剂PMA和离子霉素体外刺激小鼠脾脏细胞4 h后,检测T淋巴细胞膜表面CD 69分子的表达;用P I标记分析细胞内DNA含量的变化;阻断细胞因子分泌后,检测不同亚群T淋巴细胞内细胞因子的表达。利用CFSE标记细胞,刺激44 h后,检测T淋巴细胞的分裂情况。结果表明：刺激4 h后,绝大多数T淋巴细胞表面表达CD 69抗原。细胞周期分析结果也表明,S＋G2/M期细胞数量明显增多,G1期细胞数量减少。通过固定、破膜、标记等处理后,分别表达IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-12的T淋巴细胞均有不同程度的提高。另外,刺激44 h后,明显检测到T淋巴细胞的分裂。以上结果说明,利用流式细胞术可以从不同的角度检测活化T淋巴细胞的活性。  相似文献   

猪及猪肉中沙门氏菌快速检测的研究进展     

耿士忠  潘志明  刘杰  刘志成  方强  焦新安 《猪业科学》2010,27(6):100-105

沙门氏菌是常见的人和动物的重要病原菌之一,呈全球性分布.多种沙门氏菌均可感染猪,主要包括:海德堡沙门氏菌(Salmonlla heidelberg)、华盛顿沙门菌(Salmonlla worthington)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonlla typhimurium)、鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种(S.typhimurium-var.copenhagen)、新生儿德尔卑沙门氏菌(Salmonlla derby)、婴儿沙门氏菌(Salmonlla infantis),以及乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonlla paratyphi B)、斯坦利沙门氏菌(Salmonlla stanley)、雷根特沙门氏菌(Salmonella regent)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonlla choleraesuis)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)等血清型.  相似文献   

鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白与新城疫病毒F蛋白的融合表达及免疫原性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

游猛  潘志明  耿士忠  马全刚  方强  焦新安 《动物医学进展》2010,31(2):20-25

应用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC基因以及含有新城疫病毒F蛋白部分表位的基因片段,通过柔性肽(Gly4Ser)2编码序列将二者串联并克隆到质粒pET30a+上,获得重组原核表达质粒pET-fliC-F,将其转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。Western blot证实重组菌表达的fliC-F融合蛋白能与小鼠抗fliC和抗F蛋白两种多抗血清发生特异性反应。动物试验显示,fliC-F融合蛋白能够刺激C3H/HeJ小鼠产生针对F蛋白的特异性血清抗体,说明原核表达系统表达的fliC-F融合蛋白具有较好的免疫原性。  相似文献   

鸡白痢沙门氏菌耐药性的监测研究   总被引：42，自引：0，他引：42  

潘志明  焦新安  刘文博  高崧  倪振亚  张扬  刘学贤  张如宽  刘秀梵 《畜牧兽医学报》2002,33(4):377-383

采用WHO推荐的Kirby-Bauer法对我国部分地区1962－1999年间346株鸡白痢沙门氏菌进行了药物敏感性测定。结果表明，在近40年时间里，鸡白痢沙门氏菌对氨苄青霉素、壮观霉素、复方磺胺、磺胺异恶性唑、甲氧苄胺嘧啶、羧苄青霉素、四环素、链霉素、青霉素的耐药率显著增强（P＜0.01)。菌株的多重耐药率明显增加。60年代以二耐菌株为主（37.0%)，70年代以四耐、五耐菌株居多（60.5%)，80年代五耐、六耐、七耐菌株占大多数（80.2%)，90年代仅七耐以上菌株就达83.7%。不同年代菌株显示出不尽相同的耐药谱，且呈现出不断增宽的趋势。通过流行病学调查发现，60年代至90年代，鸡白痢沙门氏菌对青霉素、链霉素、磺胺类药物、四环素、卡那霉素、氯霉素、庆大霉素等药物的耐药性大多呈现出显著增强的变化趋势，这充分说明细菌耐药性的形成和发展与抗菌药物长期反复使用有着极为密切的关系。研究对于指导临诊合理用药及控制疾病流行具有重要的现实意义。  相似文献   

动物疫病的公共卫生意义及其控制中的生物技术     

潘志明  黄金林  焦新安  刘秀梵 《畜牧兽医科技信息》2005,(1):4-6

改革开放以来，我国畜牧业生产发展迅猛，连续20年稳定高速增长，养殖业在整个农业中的比重不断提高，从占世界总产量的10．6％跃升到27．9％，肉类生产总量居世界首位。在此期间，我国的动物医学水平也获得显著提高，尤其是在动物疫病的诊断和防治技术方面有了长足发展。但是，动物传染病历来对养殖业生产危害严重，特别是一些新出现的传染病。  相似文献   

鸡白细胞介素4基因的克隆及其原核表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

戴华  郑佳玉  陈俊华  孙林  潘志明  焦新安 《中国预防兽医学报》2008,30(6):473-477

应用RT—PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4（ChIL-4）基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P—ChIL-4和pET—ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS—PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获得表达,融合蛋白大小分别为38ku和18ku．Western blot结果也显示,在相对分子质量38ku和18ku位置有特异性条带。这为重组ChIL-4的规模化生产、疫苗佐剂的研制及其单克隆抗体的制备奠定了基础。  相似文献   

鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建   总被引：4，自引：1，他引：4  

胡青海  焦新安  徐耀辉  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2004,25(4):56-60

用Trizol提取6周龄白莱航鸡胸腺组织的总RNA．再用Oligo—dT纤维素富集mRNA后，用RT—PCR分别扩增出鸡CD4和CD8α基因cDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体，测序正确后再连入pcDNA3．1( )。将重组质粒pcDNA3．1-CD4和pcDNA3．1一CD8分别转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体检测到转染细胞中CD4和CD8α分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫方法研制抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体以及研究鸡CD4和CD8分子的结构和功能打下基础。  相似文献   

鸡白痢和肠炎沙门氏菌抑制差减文库的构建与分析     

李求春  焦新安  徐耀辉  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(1):1-5

应用抑制差减杂交技术(SSH)对鸡白痢沙门氏菌C79-13与肠炎沙门氏菌50041进行基因组片段的差异分析,构建鸡白痢沙门氏菌的差减文库。经Dot-blot筛选,并对部分片段进行测序和同源性分析。结果表明:这些序列主要分为3类,即型分泌系统相关序列、质粒转移相关序列、未知功能序列。其中2个差减片段与编码福氏志贺菌侵入质粒抗原IpaJ蛋白基因的同源性达50%。证明所构建的差减文库可为鸡白痢沙门氏菌特异性致病基因和其致病机理的研究提供重要的依据。  相似文献   

弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用   总被引：12，自引：0，他引：12  

何蕊  黄金林  许海燕  苏洁  潘志明  焦新安 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(1):5-8

以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。  相似文献   

鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的PCR-RFLP分子鉴别   总被引：10，自引：1，他引：9  

徐耀辉  焦新安  胡青海  焦凤超  曾显营  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2005,26(1):1-4,29

根据鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌fliC基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约600bp的产物,用Hin6I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的生物型。利用该技术对6株鸡白痢沙门氏菌标准株及2株鸡伤寒沙门氏菌标准株进行分子鉴别,得到的结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对我国不同地区、不同年代的191株鸡沙门氏菌进行分子鉴别,191株中有185株分离株符合鸡白痢沙门氏菌的RFLP模式,6株分离株符合鸡伤寒沙门氏菌的RFLP模式,其中有176株PCR—RFLP鉴定结果与生化特性符合率达100％,另有15株根据生化特性不能鉴别。  相似文献