RT—PCR与夹心ELISA检测粪便及饲料中IBDV的研究     

王永山  周宗安 《中国畜禽传染病》1994,(4):24-26

将ＩＢＤ病鸡粪便及饲料经ＰＥＧ浓缩处理后用ＲＴＰＣＲ与单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ进行ＩＢＤＶ检测。在ＲＴＰＣＲ试验中，粪便和饲料的阳性检出率均为１００％（８／８）；在夹心ＥＬＩＳＡ试验中，粪便的阳性检出率为１００％（８／８），而在饲料中末检出ＩＢＤＶ（８／８％。试验结果证明，ＲＴＰＣＲ是ＩＢＤＶ流行病学特别是传播途径研究的首选方法。  相似文献   

4BA—8型播种机的维修与保养     

王永山  李洪让 《林业机械与木工设备》1992,(4):30-30,29

林业育苗生产季节性强,经过处理的种籽,极短时间就会萌芽,如果不能按预定的时间播种,萌芽后进行播种会使芽尖损伤,严重的影响出苗率。因此,在播种前必须对播种机进行检修与保养,以保证作业时使用可靠。  相似文献   

抗鸡IgG单克隆抗体的研究     

王永山  郝崇 《兽医大学学报》1989,9(2):109-114

  相似文献   

南峰乡建办“人民公社”     

王永山 《中国水产》1958,(9)

南峰乡是以渔业生产为主兼有农盐业生产的渔乡,除有渔、农、盐业社各一个外,还有绳索社、供销社、信用社、合作商店、成衣小组、水作小组、铁业小组、竹业小  相似文献   

麻雀自然感染鸡传染性法氏囊病病毒的调查   总被引：2，自引：0，他引：2  

王永山  周宗安  翟春生  王元伦  方元  顾志香  王军  肖元廷 《中国兽医学报》1994,(3)

从鸡传染性法氏囊病（IBD）流行的鸡场捕杀麻雀54只,用鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）单克隆抗体夹心阻断ELISA检测抗体,阳性检出率为7.4％(4/54);以逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）检测病毒核酸,阳性检出率为11.1％（6/54）;RT-PCR阳性样本病毒分离亦为阳性。结果表明,IBD流行的鸡场里的麻雀能够发生IBDV自然感染,麻雀可能是IBDV的贮存宿主或二次传染源之一。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法的建立     

王晓丽  王永山  欧阳伟  夏兴霞  潘群兴  毕振威  诸玉梅 《中国兽医学报》2018,(10)

为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法(VP2-ELISA)。条件优化结果显示:单克隆抗体最适包被质量浓度为3mg/L,VP2最佳稀释度为1∶20,夹心ELISA效价1∶12.8,被捡血清的稀释度为1∶400。该方法与禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎病毒及杆状病毒阳性血清无交叉反应,对琼扩效价为1∶32的IBDV阳性血清的最低检出量为1∶12 800,ROC曲线确定的D450nm临界值为0.236,组内、组间重复性试验变异系数均小于10%。用本试验建立的VP2-ELISA方法与进口IBDV-ELISA抗体试剂盒平行检测100份背景已知的临床鸡血清样品,总符合率VP2-ELISA(97%)高于进口ELISA试剂盒(96%)。本试验为进一步研制鸡传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒奠定基础。  相似文献   

犬干扰素α2与犬白蛋白融合基因在昆虫细胞中的表达与活性分析     

王晶宇  欧阳伟  钱晶  王晓丽  夏兴霞  诸玉梅  毕振威  王永山 《畜牧兽医学报》2019,(10)

本研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物活性的犬白蛋白-犬干扰素α2(albumin-CaIFN-α2)。将蜂素信号肽(HBM)、犬血清白蛋白(Alb)与犬干扰素α2的融合基因经密码子优化后,连接至转移载体pFastBac1中,获得了重组pFastBac1-HBM-Alb-CaIFN-α2,将重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经过三次蓝白斑筛选纯化,得到的重组穿梭质粒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2转染Sf9细胞,72 h后可观察到明显的细胞病变。用第三代重组杆状病毒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2感染Sf9昆虫细胞,感染3 d后,收获昆虫细胞和细胞培养物,间接免疫荧光(IFA)结果显示,重组杆状病毒感染的细胞呈现绿色荧光;Western blot检测结果显示,在约90 ku左右可观察到特异性条带,证实重组Alb-CaIFN-α2能够在昆虫细胞中表达。利用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测重组Alb-CaIFN-α2的抗病毒活性,结果显示重组Alb-CaIFN-α2的活性为1.70×10~6 U·mL~(-1),为进一步研究新型犬用干扰素制品奠定了试验基础。  相似文献   

人工感染IBDV雏鸡粪便排毒动态研究     

王军  徐秀荣  邓艳文  王永山 《中国动物检疫》1999,16(4):11-12

近几年,鸡传染性法氏囊病（IBD）在我国呈爆发流行趋势,给养鸡业造成了巨大的经济损失。为了控制本病,国内外学者致力于疫苗和免疫程序的研究,虽可提高IBD的免疫效果,但并未能从根本上扭转IBD流行日趋严重的状况。在IBD流行病学方面,目前认为IBD是高度接触性传染病,但还不清楚IBDV的感染是通过鸡蛋还是通过已康复的带毒者的存在完成的,因此,我们用IBDVSTCE;毒株对雏鸡进行了感染试验,以期选择适合于IBD流行病学研究的毒株并了解IBD病鸡的排毒规律,为进一步研究IBD的流行病学奠定基础。l材料与方法1．l病毒株STC…  相似文献   

传染性法氏囊病安徽近期毒株VP2基因在昆虫细胞中的表达     

欧阳伟  王永山  张海彬  潘群兴  王晓丽  刘洁  周宇  曹冰玉  王忠灿 《中国预防兽医学报》2009,31(8)

为真核表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因,将2007年12月从安徽境内发生的传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中克隆的IBDV VP2基因插入到pFastBac1供体质粒中,转化E.coilDH10Bac感受态细胞,经抗性筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-VP2,用脂质体法转染SD细胞.对rBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用western blot分析,在50 ku处出现1条特异蛋白条带;电镜观察重组VP2蛋白能够自组装成病毒样颗粒.本实验为研制针对近期流行IBDV的新型病毒样颗粒疫苗和新型检测试剂奠定了基础.  相似文献   

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立     

夏兴霞  刘洁  王永山  诸玉梅  欧阳伟  何孔旺  张雪寒 《江苏农业学报》2009,25(2)

将E．coli O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB／c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2／0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E．coli O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3,腹水效价均为1×10^11;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2,腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示,F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明,c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带。  相似文献