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鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisekpticum,GM)基因组中存在着编码细胞表面血凝粘附素蛋白(protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)相关基因组的多基因族。为筛选出含有完整的pMGA基因片段,并估算出鸡毒霉形体HS株基因组中pMGA多基因族的基因数,本试验以pUC18为载体,用EcoR I限制性内切酶构建了鸡毒霉形体HS株的基因组文库。根据pMGA基因引导序列的保守区和pMGA基因间隔区的序列,人工合成了2个寡核苷酸探针(探针I、探针Ⅱ),经标记后,双筛选所建的基因文库,从600个转化子中共得到的38个含有pMGA基因的阳性克隆子,选其中1个7.5kb的片段(17号阳性克隆子,W17),用4种限制性内切酶(EcoR I,Hind Ⅲ,Pst I,Bgl Ⅱ)酶切消化,绘制了该片段的物理图谱。该片段酶切产物经电泳、转膜后与探针I和探针Ⅱ杂交,发现2个探针杂交图谱基本相同,根据杂交带及放射信号的强度值,估测出该片段含有4个pMGA基因,以这个片段所含的pMGA基因数为标准,估算出鸡毒霉形体HS株含有39个pMGA基因。 相似文献
2.
以流产、木乃伊和死产为主要特征的繁殖障碍给现代养猪业带来巨大的危害.母猪的繁殖障碍主要包括不育、空怀、屡配不孕、返情、死胎、流产、产弱仔和畸形胎等.引起母猪繁殖障碍的因素主要有两类:一类是引起生殖道原发性感染的病原(传染性因素),约占30%~40%;另一类是毒素、环境和营养等非传染性因素,约占60%~70%.但是,往往以传染性因子(尤其是病毒)的影响更加令人关注,其中影响较大的有PRV、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪瘟病毒(HCV).这些病毒所致疾病症状相似,都可以通过胎盘感染胎儿,进而影响胎儿的发育和存活. 相似文献
3.
禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究 总被引:21,自引:1,他引:21
以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL,兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL;对已知的阳性样品,用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上,且能检出其它亚型的禽流感病毒;与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应,说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测,结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。 相似文献
4.
直接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法建立及初步应用 总被引:6,自引:0,他引:6
用混合酸酐法合成氯霉素的CAP抗原,用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记抗原,用ELISA方法对合成的CAP抗原、CAP酶标记抗原进行鉴定表明其与抗CAP单克隆抗体具有特异性反应。在此基础上建立了包被二抗的直接竞争ELISA方法。特异性试验结果表明,CAP琥珀酸酯、CAP琥珀酸钠盐的交叉反应率分别为107%、106.4%;甲砜霉素、氟甲砜霉素与CAP的交叉反应率小于0.016%;与其他结构类似物间未见交叉反应。该方法对CAP的检测限可达到0.1μg/L,IC50为11.6μg/L,线性范围0.1~100μg/L,批内变异系数小于11.5%,批间变异系数小于19.6%。对猪肉、鸡肉、蜂蜜分别添加1.0、3.0、10.0、30.0μg/L CAP标准品,回收率61.0%~102.0%,变异系数为6.6%~15.8%;对猪肉、鸡肉、蜂蜜中CAP的最低检测限分别为0.48、0.42、1.20μg/kg。 相似文献
5.
犬血样经Giemsa染色镜检及PCR检测.证实感染附红细胞体.选择添加新生牛血清(BS)、酵母浸出液、葡萄糖等成份的PPLO肉汤(PPLO-S-BS)为培养液,将染虫红细胞稀释后接种到细胞培养板,置37℃、5%CO2的培养箱中培养.24~72 h后红细胞溶血变为带虫血影(ghost);在PPLO-S-BS中虫体生长较好,并能连续培养180 d;除首次接种外不添加任何红细胞.对PPLO-S-BS中培养的带虫血影进行了光镜及扫描电镜观察、PCR鉴定、感染阴性红细胞试验、抗生素敏感性试验,结果表明其特征与接种物相同. 相似文献
6.
鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族序列分析 总被引:3,自引:1,他引:2
用限制性核酸内切酶对鸡毒霉形体(MG)HS株基因文库中经初步估测可能含有的4个鸡毒霉形体粘附蛋白(protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)基因的MgW17重组质粒进行了不同组合的酶消化,根据消化片段的大小及酶切位点绘制了7.5kb外源片段的物理图谱;然后根据所得的物理图谱,选用Pst I和EcoR I将MgW17外源片段酶解成1.3、2.0、4.2 kb 3个部分,将它们分别亚克隆到SK(十)质粒上,得到了3个亚克隆子SGp100、SGp200、SGp300.使用核酸外切酶Ⅲ缺失法构建缺失子系列,经序列分析后得到MgW17外源片段的全部序列.序列全长7 434 bp,中间含有2个完整的pMGA基因和另2个不完整的pMGA基因的首部和尾部,分别将它们顺次命名为H-pMGA1.1、H-pMGA1.2、H-pMGA1.3和H pMGA1.4.2个完整的pMGA基因的阅读框长度分别为1 967 bp(1.2)和2039 bp(1.3);H-pMGA1.1首部不完整的阅读框的长度为720 bp,尾部不完整的H-pMGA1.4的长度为1 752 bp.将H-pMGA基因与已报道的MG.S6株、F株的pMGA基因进行了比较,探讨了pMGA基因在不同MG菌株中的相似性、基因启动子结构的差异、间隔区内GAA重复序列对转录调控的影响等. 相似文献
7.
免疫接种是预防水禽传染病的有效措施之一.并可减少蛋传疾病,使后代雏水禽具有高度的母源抗体,提高雏水禽抵抗疫病的能力.要保证水禽养殖业的健康发展,必须建立一整套严格的综合性卫生防疫措施. 相似文献
8.
国产盐酸沙拉沙星体外抑菌活性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用微量稀释法,测定了国产盐酸沙拉沙星对9种118株畜禽常见病原微生物的体外抑制活性。该药物对被检7株支原体的作用较差,MIC为3μg/ml,而对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抑菌活性强,MIC小于或等于0.5μg/ml,其中:对革兰氏阴性菌作用更强,除绿脓杆菌外,MIC小于等于0.125μg/ml,盐酸沙拉沙星的MIC(最低抑菌浓度)曲线与MBC(最低杀菌浓度)曲线比较接近,表明该药物为一杀菌剂, 相似文献
9.
鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)又称鸡败血霉形体,是鸡慢性呼吸道病和火鸡传染性窦炎的主要病原.鸡毒霉形体常常与其他呼吸道病毒(如鸡新城疫、传染性支气管炎)或细菌(病原性大肠杆菌、鸡嗜血杆菌等)交叉感染.试验在毕丁仁[1]分离的HS强毒株、Saito S等[2]和郝永清等[3]对TM-1基因进行研究的基础上,对MG-HS株TM-1基因进行了克隆和表达载体的构建,为鸡毒霉形体病的预防和治疗奠定了基础,也为进一步研究保护性抗原及其抗原表位提供一定的理论依据. 相似文献
10.
氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-BSA)为包被抗原,氯霉素(Chloramphenicol,CAP)为竞争的半抗原,两者与一定量的抗CAP单抗(CAP-McAb)反应。实验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25μg/ml,抗CAP-McAb工作浓度为1:12000,酶标二抗工作浓度为 1: 5000,可测最适范围为 1ng/ml-100ng/ml,最小检测量为0.1ng/ml,批内和批间变异系数分别为3. 62%和 5. 19%。得到回归方程 y =1.2730- 0.6745x(r2= 0. 9779)和标准曲线,从而建立了快速定量测定 CAP含量的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)。整个测定时间为6小时。 相似文献