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1.
应用多重PCR检测人工感染鸡呼吸道疾病的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本文报道了IBV,NDV,ILTV,MG人工感染4周龄SPF鸡和非免疫鸡后,用多重PCR检测试验鸡的咽喉棉拭子和器官组织样品,并与传统的病原分离鉴定,血清学方法进行比较,多重PCR无论是对单一感染病原,还是对两种以上混合感染病原,其敏感性和检测速度都优于传统的鉴别诊断方法,具有较高的实用价值,可以直接应用于临床检测,服务于生产。 相似文献
2.
应用三重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡3种病毒性呼吸道传染病的研究 总被引:18,自引:1,他引:17
根据鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的基因文库,设计了3对分别与NDV、IBV和ILTV某段基因序列互补的引物。用这3对引物对同一样品中的NDV、IBV、ILTV核酸模板进行三重PCR扩增,结果均同时得到了3条与设计相符的310bp(NDV)、1720bp(IBV)和647bp(ILTV)三重PCR扩增带,而对其他6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该三重PCR技术能检出10pg的IBV、1pg的NDV RNA模板和10pg的ILTV DNA模板。 相似文献
3.
4.
应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,以随机引物单条或成对组合的方式对9株禽巴氏杆菌(PM)广西分离株和3个参考株的DNA进行了多态性分析。结果显示,在选用的20个引物中,有4对引物(4条引物成对组合)扩增的条带为1~16条,其长度在90~2600bp。相似指数分析显示,PM广西分离株GX2与GX4的相似指数最高,为0.97;GX7与B26T1200的相似指数最低,为0.21,C48—1标准强毒株与PM广西分离株间的相似指数为0.33~0.64。表明广西当地的流行株呈现多样性,与PM标准强毒株存在差异。 相似文献
5.
为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。 相似文献
6.
7.
根据GenBank登陆的新城疫病毒L基因序列,设计了3对引物(L1和L2、L3和L4、L5和L6)。用RT-PCR技术对3株新城疫病毒广西分离GX7/02、GX9/03、GX11/03的L基因进行了分段扩增和克隆,并对克隆出来的3个片段进行序列测定,用DNAstar软件比较分析后进行拼接,得到长约为6.8 kb、包含有L基因全长的核苷酸序列。L基因的RNA全长为6 704 bp,拥有一个6 615 bp的开放阅读框,推导其编码的氨基酸数为2 204个。氨基酸同源性分析表明广西分离株之间同源性为98.6%~98.7%;与ZJ1株同源性为98.8%~98.9%;与La-Sota、B1、F48E9、HB92同源性为92.0%~94.2%。 相似文献
8.
为建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)方法,以MG的mgpc基因序列为目的序列,在其保守区域内设计合成了1对特异性引物和1条探针,通过各反应条件优化,建立了检测MG的ddPCR方法,并测定了建立方法的特异性、敏感性以及重复性。结果显示:建立方法的最佳引物浓度为20 μmol/μL,探针浓度为10 μmol/μL,退火温度为55 ℃;该方法只检出MG,没有检出鸡滑液囊支原体、禽衣阿华支原体、禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽脑脊髓炎病毒、禽偏肺炎病毒、禽呼肠孤病毒、鸡沙门氏菌和鸡大肠杆菌,且相互间没有交叉反应;本方法最低检测MG重组质粒标准品的检测限为3.9拷贝/μL。重组质粒标准品浓度在3.9~41 025拷贝/μL范围内,绘制的ddPCR绝对定量曲线与测得值呈良好的线性关系(R2 = 0.999);3次重复检测试验结果的变异系数均小于5%。对采集的60份病鸡喉拭子、气囊拭子及肺样品进行MG检测,结果ddPCR方法的阳性检出率(15.0%)高于荧光定量PCR方法(13.3%)。结果表明,本研究建立的ddPCR方法定量检测MG特异性强,灵敏度高,重复性好,为绝对定量检测MG提供了技术手段。 相似文献
9.
对虾WSSV和IHHNV多重PCR检测试剂盒的研究与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
在对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)二温式PCR检测技术前期研究的基础上,将这2种病原的特异性引物与PCR基础反应液一起组装成快速检测试剂盒。通过对试剂盒敏感性、稳定性和保存期等技术指标的测定以及对临床样品的检测试验,该试剂盒对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板均能特异性地扩增出2条与实验设计相符的593 bp(WSSV)和356 bp(IHHNV)的DNA片段,而对其它对虾病原的扩增结果均为阴性;该试剂盒最低能检测到102pg的WSSV DNA和10 pg的IHHNV DNA。对WSSV和IHHNV DNA的检出量分别为102~103pg和10~102pg。 相似文献
10.
新城疫 (ND)、传染性支气管炎 (IB)、传染性喉气管炎 (ILT)和鸡毒支原体 (MG)是四种严重危害养鸡业发展的常见呼吸道传染病 ,在世界许多国家广泛流行。这几种鸡呼吸道传染病的流行病学、临床特征和病理变化十分相似。临床上 ,一个鸡群同时感染二种上述呼吸道传染病病原体的现象也常有发生。常规的病原分离鉴定、血清学方法难以对两种上述病原混合感染的鸡呼吸道传染病作出快速鉴别诊断。聚合酶链式反应 (PCR)技术具有快速、简便、特异及敏感等特点 ,近年来在禽病诊断中已得到了广泛应用。但常规PCR技术一次扩增只能诊断一种… 相似文献