口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立     

谢彩华  班付国  闫若潜  王东方  张煜  刘梅芬  赵雪丽  马震原  王华俊  王淑娟 《中国动物检疫》2018,35(12):70-74

为建立一种快速、敏感、特异的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)分型鉴别诊断实时荧光RT-PCR(Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测方法,根据O、A、AsiaⅠ三种血清型FMDV保守基因序列,设计能够检测到FMDV的特异性通用检测引物和A型检测引物,以及不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法,对123份疑似FMDV感染的临床样品进行了检测。结果显示,建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法在10~1～10~7拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV-T和pGEM-T/FMDV-A重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;自123份疑似FMDV感染样品中,检出10份FMDV-T阳性,6份FMDV-T/FMDV-A双阳性并且与基因测序结果一致。结果表明,本研究建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法重复性好、敏感性高、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,可用于FMDV的快速分型检测,为FMDV的早期检测及临床诊断提供了新方法。  相似文献   

高致病性猪蓝耳病的发病新特征及综合防控措施   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘梅芬  闫若潜  吴志明  张志凌  张健 《河南畜牧兽医(综合版)》2008,29(10)

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PPRSV)变异株引起的一种急性高致死性传染病。仔猪发病率可达100%、死亡率可达50%以上,母猪流产率可达30%以上。2006年6月首先在我国的南方部分省市出现,给我国养猪业造成了较大的损失。  相似文献   

高致病性猪蓝耳病的发病一新特征及综合防控措施     

刘梅芬  闫若潜  吴志明  张志凌  张健 《河南畜牧兽医(综合版)》2008,29(10):24-25

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PPRSV）变异株引起的一种急性高致死性传染病。仔猪发病率可达100％、死亡率可达50％以上．母猪流产率可达30％以上。2006年6月首先在我国的南方部分省市出现．给我国养猪业造成了较大的损失。  相似文献   

塞内卡病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用     

王淑娟  王东方  赵月龙  谢彩华  赵雪丽  马震原  王华俊  杨朋霞  闫若潜 《中国预防兽医学报》2019,(5):479-483

为建立塞内卡病毒(SVA)荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)检测方法,本研究根据GenBank中SVA 3D基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以SVA cDNA为模板,经优化反应条件,建立了SVA FQ-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对28份临床疑似SVA感染样品进行了检测,并与本实验室建立的SVA RT-PCR方法检测结果及测序结果比较分析。结果显示,该方法仅对SVA出现阳性扩增信号,对BHK-21正常细胞对照和口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒等5种病原均未出现扩增,特异性较强;该方法最低检测限为10.4拷贝/μL质粒标准品,比常规RT-PCR敏感性高10倍,敏感性较高;该方法批内及批间变异系数均小于4%,重复性好。利用该方法对28份疑似SVA感染样品检测显示,检出9份阳性样品,与测序结果一致,而常规RT-PCR仅检出6份阳性样品,其敏感性高于常规RT-PCR方法,两种方法的符合率为89.3%。本研究为SVA的早期检测提供了特异、敏感、快速的方法。  相似文献   

重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究     

刘梅芬  李勤楠  马震原  吴志明  班付国  闫若潜  王华俊 《中国畜牧兽医》2019,(2)

为探究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对新城疫病毒(NDV)活疫苗(LaSota株)的免疫增强作用,本研究将90只SPF鸡随机分为6组,分别为PBS对照组、NDV弱毒苗对照组、rChIL-6-Linker-ChIL-2免疫增强组、rChIL-6蛋白免疫增强组、rChIL-2蛋白免疫增强组及rChIL-6+rChIL-2混合蛋白免疫增强组,将鸡白细胞介素重组融合蛋白水剂与LaSota株联合接种于SPF鸡,分别采用MTS法、流式细胞术、ELISA和HA/HI法检测接种前后不同时间各组鸡外周血及脾淋巴细胞增殖活性、鸡外周血中CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量、血清中Th1/Th2型细胞因子表达水平及免疫抗体水平等指标。结果显示,接种后7～21d时,与NDV弱毒苗对照组相比,同时接种重组融合蛋白组鸡淋巴细胞增殖活性、外周血CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量比值及血清中重组鸡IL-4蛋白(rChIL-4)、ChIL-6、ChIL-2、重组鸡IFN-α蛋白(ChIFN-α)、ChIFN-γTh1/Th2型细胞因子表达水平明显提升;HI免疫抗体较NDV弱毒苗对照组提高了1.0～1.9个滴度,较单一rChIL-6、rChIL-2对照组分别提高了0.2～0.7、0.2～1.1个抗体滴度。综上所述,rChIL-6-Lin-ker-ChIL-2融合蛋白对NDV(LaSota株)活疫苗在鸡体内具有明显的免疫增强效果。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒变异株疫苗免疫剂量和血清中和效价研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王华俊  班付国  赵雪丽  闫若潜  杨鹏霞  王淑娟 《畜牧与兽医》2019,(8):114-117

为了研究猪流行性腹泻病毒变异毒株灭活疫苗的免疫剂量及免疫后抗体的中和效价,选择初产母猪于产前42 d首次免疫,后海穴注射,间隔21日以相同剂量和方法加强免疫,免疫剂量分别为0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL和4.0 mL,采集母猪血清和仔猪血清,采用变异强毒株、经典毒株CV777进行血清中和试验分析免疫抗体效价,ELISA抗体检测试剂盒检测血清IgG抗体效价。结果表明,2 mL、4.0 mL免疫剂量组血清抗体与变异毒株中和效价均≥1∶128,与CV777中和效价≤1∶64,二免后母猪血清IgG抗体S/P值均2.0,仔猪断奶时母猪血清抗体S/P≥1.4,0.5 mL、1.0 mL免疫组抗体中和效价、S/P值均较低。确定2 mL为最佳免疫剂量,加强免疫后血清抗体中和效价≥1∶128,对母猪损伤小,经济效益高。  相似文献   

河南省病死动物无害化处理体系建设情况调研     

孙彦琴  闫若潜  吴志明  赵雪丽  郭育培  曹伟伟 《中国动物检疫》2016,33(9):74-77

为了解当前河南省病死动物无害化处理现状,通过问卷调查和实地调研相结合的方式,初步了解当前河南省病死动物无害化处理现状。分析发现在病死动物无害化处理监管机制中存在政府监管力度不足、追溯体系不健全等问题,提出了加大财政投入、制定配套法规、推行政策性养殖等建议。  相似文献   

猪瘟散发的原因分析及综合防治对策     

程俊贞  刘光辉  闫若潜  杜松献  田盛林 《河南畜牧兽医(综合版)》2009,(9):20-21

猪瘟是一种传染性极强的病毒性疾病．可感染各年龄段的猪只,一年四季流行,发病率和死亡率均很高,危害极大。笔者通过对许昌及周围几个县市的几十个猪场进行调查研究．根据猪瘟流行和发病特点分析其发病原因,并总结出相应的综合防治对策,供广大养殖户参考。  相似文献   

猪链球菌种与9型猪链球菌二重PCR检测方法的建立及应用     

闫若潜  吴志明  张志凌  刘梅芬  赵明军  拜廷阳 《中国动物检疫》2009,26(8):26-29

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对检测疑似猪链球菌感染猪临床样品,并与常规细菌分离鉴定方法进行了比对。结果表明成功建立SS种和SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100个CFU,特异性和重复性好;利用该方法对34份临床分离自疑似猪链球菌感染样品的细菌培养物进行了应用检测试验,其中有11份样品为gdh阳性,11份gdh阳性样品中有3份样品同时为SS9阳性。本研究成功建立了SS种与SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,可用于猪链球菌种和SS9型猪链球菌的快速诊断。  相似文献   

猪圆环病毒2型ORF2基因的表达及活性研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈涛  闫若潜  谢彩华  吴志明  张志凌  张健  刘英 《动物医学进展》2009,30(2)

根据猪圆环病毒2型(PCV-2)基因序列设计1对特异性引物,PCR扩增PCV-2去核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的Cap蛋白基因(oRF2),经Bam H Ⅰ/HindⅢ双酶切后将其克隆到表达载体pQE30中并转化大肠埃希菌JM109,采用IPTG进行诱导表达,采用自行创新的纯化方法对表达的融合蛋白进行纯化,Western blot鉴定纯化后的重组Cap蛋白(rCap)活性.结果表明,成功克隆了无核定位信号的ORF2基因,其分子质量大小为579 bp;表达的rCap蛋白大小为24.1 ku左右,与预期大小相一致;经纯化后的rCap蛋白纯度在95%以上;Western blot鉴定结果表明,Cap蛋白可以和抗PCV-2抗体反应,具有很好的抗原性.本研究为进一步建立以Cap蛋白为包被抗原的PCV-2间接ELISA诊断方法以及PCV-2疫苗的研究奠定了基础.  相似文献