猪白细胞介素-2的原核表达及其生物学活性研究     

吴志明  闫若潜  谢彩华  刘梅芬  刘光辉  黄清 《中国畜牧兽医》2009,36(4):89-91

本研究采用RT-PCR方法自刀豆素（Con A）刺激的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪白细胞介素-2（porcine interleutin-2,PoIL-2）成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪白细胞介素-2（rPoIL-2）蛋白通过尿素变性、低浓度复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用MTT法测定rPoIL-2蛋白促小鼠细胞毒性淋巴样系CTLL-2株细胞增殖活性以评价rPoIL-2的活性。结果表明,成功克隆了rPoIL-2的成熟肽基因,基因全长405 bp,编码134个氨基酸;表达的rPoIFN-α蛋白分子质量大小约为16.5 ku,与预期大小相一致;经纯化后的蛋白质纯度在96%以上;纯化的rPoIL-2蛋白促小鼠CTLL-2株细胞增殖活性最高值是对照细胞的3倍。本研究成功表达了具有生物学活性的PoIL-2蛋白,为新型基因工程抗病毒制剂和免疫增强剂的开发奠定了基础。  相似文献   

用地高辛标记的核酸探针从尿囊液和组织中检测传染性支气管炎病毒   总被引：1，自引：0，他引：1  

王泽霖  王丽  闫若潜 《中国预防兽医学报》2000,22(1)

  相似文献   

2017—2020年河南省猪伪狂犬感染抗体和病原检测结果分析          下载免费PDF全文

郭育培  谢彩华  张利平  赵美雪  刘敏  宋丹  朱前磊  程果  方先珍  班付国  闫若潜 《中国畜禽种业》2023,19(3):113-116

为了解河南省规模猪场猪伪狂犬病感染状况,2017—2020年连续四年对河南省规模养猪场猪伪狂犬病毒gE抗体和病原进行了检测。结果表明,2017—2020年,猪伪狂犬gE抗体平均个体阳性率分别为26.48%、28.88%、25.37%、20.30%,平均场群阳性率分别为55.48%、52.55%、51.14%、52.77%。种猪场猪伪狂犬gE抗体平均个体阳性率分别为25.19%、19.89%、20.94%、14.78%,整体呈逐年下降趋势;平均场群阳性率分别为44.65%、37.89%、40.74%、43.48%。,商品猪场猪伪狂犬gE抗体平均个体阳性率分别为27.27%、35.06%、27.86%、21.56%,平均场群阳性率分别为61.46%、60.77%、55.79%、54.36%,整体呈逐年下降趋势。从季节分布来看,春季、夏季、秋季、冬季规模猪场猪伪狂犬病病原平均个体阳性率分别为4.72%、0.53%、0.92%、1.90%,平均场群阳性率分别为14.53%、5.39%、5.41%、8.87%。可见,全省猪伪狂犬病防控形势复杂严峻,净化任务仍然较重。  相似文献   

基于A型塞内卡病毒VP3蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立          下载免费PDF全文

申水莹  闫若潜  雷从从 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2021,49(2):23-30

【目的】建立基于VP3蛋白检测血清中A型塞内卡病毒(SVA)抗体的间接ELISA方法，为临床上猪群SVA感染及未来疫苗免疫效果评价提供有效手段。【方法】克隆SVA的VP3基因，将其与pQE 30表达载体连接，并进行原核表达，对表达的蛋白进行纯化和鉴定。用纯化的重组VP3蛋白（rVP3）作为包被抗原，通过矩阵法优化ELISA反应条件，建立检测SVA抗体的间接ELISA方法，通过对已知背景的200份SVA阴阳性血清进行检测以确定临界值，并对该方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性进行验证。将采自SVA灭活疫苗免疫猪不同时期的160份血清，分别用该试验建立的方法及本课题组前期建立的基于VP1蛋白的间接ELISA方法进行检测，对比两者检测结果。【结果】成功克隆717 bp的VP3基因，表达出分子质量约为32 ku的VP3重组蛋白（rVP3）。Western Blot试验结果表明，纯化的 rVP3 蛋白具有良好的反应原性。建立了基于VP3蛋白的SVA间接ELISA检测方法，当样本OD₄₅₀(S)/阳性对照OD₄₅₀（P）＞0.138时判定为SVA抗体阳性。该方法特异性强，与FMDV(O/A型)、PRV、PRRSV、CSFV病原阳性血清均无交叉反应；敏感性较好，检测出的阳性血清最高稀释倍数与中和试验基本一致；重复性和稳定性好，批内变异系数小于4%，批间变异系数小于9%。160份血清检测结果表明，两种方法在不同时期的抗体阳性检出率略有差异。【结论】建立了基于VP3蛋白的SVA间接ELISA检测方法，该方法具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒疑似感染人的实验室诊断及分析          下载免费PDF全文

谢彩华  班付国  闫若潜  王东方  王翠  张利平  朱前磊  闫志玲  刘影  王淑娟  马震原  郭育培  程果  赵雪丽 《中国动物检疫》2023,40(4):41-46

为给人感染伪狂犬病病毒(PRV)来源分析及其感染机理研究提供相关信息，对一例疑似感染PRV患者的血清、脑脊液、拭子及其工作猪场的病猪血清、组织等样品进行病原学、血清学检测及病毒分离，对其工作猪场开展流行病学调查，并采集患者同事血清样品进行PRV抗体检测。结果显示：病人样品经数字PCR检测均为PRV核酸阳性；病人发病后5～90 d内的血清样品均为PRV gB抗体阳性，gE抗体发病后18 d转为阳性并一直持续到发病后90 d；病人同事均未表现临床症状，其血清样品PRV gB抗体阳性率为22.2%,gE抗体均为阴性；从病人工作猪场的病猪样品中分离到PRV，且样品经荧光定量PCR核酸检测及ELISA抗体检测均检出阳性；病人工作猪场为PRV阳性场，病人及PRV gB抗体阳性同事均有直接接触病猪史。结果表明，患者感染的PRV来自其工作猪场猪群的可能性较大，人感染后表现出和动物感染相似的抗体消长规律。PRV对公共卫生的影响及其感染机制需进一步关注和研究。  相似文献