猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的原核表达及PPA-NS1-ELISA的初步建立     

陈进会  郭万柱  殷华平  颜其贵  徐志文  王印  罗燕  王小玉 《中国兽医学报》2007,27(1):13-16

含有猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的重组质粒pPNS1通过EcoR Hind双酶切后,回收NS1基因,将其亚克隆进原核表达载体pET30a( )中,构建了重组表达质粒pET-NS1,转入表达宿主菌BL21中,通过IPTG的诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组NS1蛋白高效表达,以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的26.7%。并确定了NS1蛋白的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.6mmol/L,诱导时间为3h。Westernblotting检测表明,表达产物具有良好的免疫原性。重组蛋白经纯化后作为抗原,包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗,建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-NS1-ELISA)。结果表明,抗原最佳包被质量浓度为31.3mg/L,血清最佳稀释度为1∶40。阳性标准初步定为:待检血清D490>0.32,且待检血清D490/阴性血清D490>2.0。  相似文献   

大豆疫霉病研究进展     

余霞  杨丹玲  王俊峰  陈进会 《中国农学通报》2009,(5)

本文对大豆疫霉菌的检测和分离、生理小种和遗传多样性、抗性以及侵染和田间流行特点等方面的研究进展和取得的新成果进行了综述,从检疫、农业防治和化学防治等方面提出了该病的防治对策.  相似文献   

一起仔猪表皮葡萄球菌皮炎的诊治     

陈进会  郭万柱  徐志文 《养猪》2005,(2):41-41

沟淖酆掀兰垩芯?AHP和DEA法的整合[J].上海大学学报(自然科学版),2002,10(8):464-466 [6]冯蔚东,陈剑,赵纯均.基于市场驱动的虚拟企业伙伴选择方法[J].清华大学学报(自然科学版),2000,40(10):120-124 [7]黄菊,马东晓,易树平,等.基于供应链管理选择供应商的成本计算法[J]  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

王小玉  陈进会  颜其贵  任玉鹏  韩国全 《动物医学进展》2010,31(10)

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的严重繁殖障碍和呼吸道疾病。PRRSV为动脉炎病毒属的不分节段的单股正链RNA病毒,含有8个开放阅读框(ORFs),其中ORF6编码的非糖基化膜蛋白(M)为其优势结构蛋白,是PRRSV中较保守的蛋白,具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选基因研究和建立诊断方法。论文阐述了PRRSV M基因的研究进展,并对基于M基因工程疫苗和检测技术等进行综述。  相似文献   

PRRS检测技术的研究进展     

黄伟  陈进会  颜其贵  冯迎春 《广东畜牧兽医科技》2010,35(2):3-6

猪繁殖日常呼吸综合征是引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状及死亡为主要特征的一种高度接触性传染病。及时发现和日常监测对本病的防治和根除有重要意义。除病毒分离、鉴定的经典方法外,更多的分子生物学检测、诊断技术得到广泛应用,本文就各种检测技术的研究进展做一综述。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株M蛋白基因截断片段原核表达载体构建及其表达的初步研究     

陈进会  冯迎春  颜其贵  黄伟  韩国全  万莉  雷燕  王志彪 《中国动物检疫》2010,27(12):37-39,44

为表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白主要抗原表位基因序列,参照GenBank中发表的PRRSV SCQ株M蛋白基因设计并合成一对特异性引物,通过PCR方法从重组质粒pMD18-T-M扩增得到缺失N端跨膜区的M蛋白基因片段dM(deleting M),将其与pMD19-T simple vector连接,经测序正确后克隆至高效原核表达载体pGEX-4T-1,得到重组表达载体pGEX-4T-1-dM,并将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG于37℃诱导,PRRSV M基因获得表达。经SDS-PAGE分析,所表达的融合蛋白分子量约为35 kDa。以纯化的重组蛋白作为抗原,经Western Blot分析结果表明该重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别,可用于PRRSV的检测。  相似文献   

应用液相芯片检测空肠弯曲菌     

赵丽  蔡阳  黄伟  邱杨  刘建丽  陈进会  王振国 《中国动物检疫》2015,32(4):79-83

[目的] 建立空肠弯曲菌液相芯片检测方法。[方法] 本研究将空肠弯曲菌HIP蛋白单克隆抗体与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立空肠弯曲菌液相芯片检测方法,测定不同浓度的抗体与微球偶联率。通过L9（34）正交设计试验优化方法的反应条件,并进行灵敏度和特异性试验。[结果] 较优实验条件即多克隆抗体工作浓度为1:100、生物素标记的羊抗兔IgG工作浓度为1:500、SA-PE的工作浓度为10ug/mL、生物素标记的抗体与SA-PE反应时间为90min。该方法灵敏度可达103CFU/mL,与其他常见食源性致病菌无交叉反应。[结论] 该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可快速检测食品中的空肠弯曲菌。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒SCY株3''''端8.5kb片段的克隆及序列特征分析     

殷华平  郭万柱  宋振辉  孙志勇  徐志文  王小玉  陈进会  杨丽 《畜牧兽医学报》2007,38(1):66-71

根据GenBank的核酸序列,设计6对引物自TGEV SCY株中分别扩增了长为1.5 kb、2.0 kb、1.1 kb、1.4 kb、1.4 kb、1.3 kb的6个片段,经克隆测序拼接后获得8 495 bp的TGEV部分序列.根据与其他TGEV和冠状病毒的序列和结构特征比较表明,该段序列克隆了除TGEV聚合酶基因以外的S、M、N、E、NSP3a、NSP3b、ORF7共7个基因的核酸序列;根据S、M、N基因的序列构建了系统进化树,分析表明TGEV-SCY株与TS、HN2002、TO14、pudue等毒株亲缘关系较近;密码子偏爱性分析结果认为TGEV在对密码子的使用上存在轻微的偏向性,个别氨基酸偏向于选择以A和T结尾的密码子.  相似文献   

大豆疫霉病研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

余霞  杨丹玲  王俊峰  陈进会 《植物检疫》2009,23(5)

本文对大豆疫霉菌的检测和分离、生理小种和遗传多样性、抗性以及侵染和田间流行特点等方面的研究进展和取得的新成果进行了综述,从检疫、农业防治和化学防治等方面提出了该病的防治对策.  相似文献   

虾肝肠胞虫Taqman荧光PCR方法的建立与应用     

张娜  谢艳辉  陈进会  李家侨  斯泽恩  黄磊 《中国动物检疫》2017,34(10):98-103

为给虾肝肠胞虫(EHP)的监测和控制工作提供特异、灵敏的快速检测方法,针对EHP 18S相关保守序列设计1对特异性引物,优化并建立EHP的Taqman荧光PCR检测方法,同时验证该方法的重复性和敏感性。结果显示:体系扩增的最佳退火温度为60℃,构建好的质粒标准品标准曲线斜率为-3.195,R2为0.991;扩增产物阈值循环数(Ct)与标准模板起始量(X)的关系曲线为-3.195×Log(X)+36.923,扩增效率为105.59。使用所构建方法检测湛江市EHP流行情况,同时对样品进行白斑综合症病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、桃拉综合征病毒(TSV)、早期死亡综合症(AHPND)病毒检测。结果显示:样品的WSSV、IHHNV、TSV检测均为阴性;AHPND检出阳性率为10%,EHP为30%,其中1份样品的EHP和AHPND检测同为阳性。本研究建立的EHP荧光PCR方法具有特异、灵敏等优点。该方法及其临床应用数据可为EHP的防控提供技术参考。  相似文献