草鱼呼肠孤病毒生长特性研究     

袁雪梅  姚嘉赟  郝贵杰  蔺凌云  徐洋  潘晓艺  尹文林  沈锦玉 《中国动物检疫》2018,35(3):98-103

以草鱼呼肠孤病毒(GCRV)873毒株为试验材料,建立了GCRV荧光定量PCR检测方法;用GCRV873株感染CIK细胞及草鱼,通过对病毒RNA复制水平、子代病毒含量以及细胞病变等情况进行监测,研究其在CIK细胞及草鱼体内的生长特性。在CIK细胞中,GCRV感染后12 h即可检测到子代病毒,36 h时,所有细胞被感染;72 h时,病毒滴度达到最高,为10~(6.75) TCID_(50)/mL。在草鱼的肝、脾、肾中,均能检测到GCRV RNA,其中肾脏中含量最高,其次是肝脏,脾脏中最少。本试验为研究GCRV致病机理及制备细胞灭活疫苗奠定了试验基础。  相似文献   

羊传染性脓疱病毒PCR检测方法的建立与应用     

沙娜瓦尔·塔希  买买提艾力·斯迪克  李舵  王文  美热木古丽·巴依待拉提  马晓燕  苏晓慧  盛卓君 《中国动物检疫》2018,35(3):63-66

为快速检测临床羊传染性脓疱病毒(CPDV)感染,根据Gen Bank中公布的CPDV毒株序列,通过多毒株B2L序列保守区的比对,设计并合成1对特异性引物,利用PCR方法检测该病毒,并进行特异性、敏感性试验及临床检测。结果显示,该反应的最适退火温度为56℃,最适引物量为0.6μL(20μmol/L),可以检测到1 pg的DNA,并且能鉴别山羊痘病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒。结果表明,该方法特异性高、敏感性强,可用于CPDV临床感染的快速检测。  相似文献   

猪瘟病毒NASBA-RT-LAMP快速检测方法的建立     

杨平东  张明璀  曹立廷 《中国动物检疫》2018,35(7):78-81

本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。该方法的建立为猪瘟病毒的快速诊断提供了新思路。  相似文献   

猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈小金  张霞  王玉玲  董志珍 《中国动物检疫》2018,35(9):95-100

根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株序列设计特异性引物,建立了检测PDCoV的实时荧光PCR方法。该方法在标准品浓度2.49×10~8~2.49×10~2 copies/μL范围内线性关系良好;特异性试验显示,其他几种常见猪病病毒未见典型扩增曲线;敏感性试验显示,最低检测下限为24.9 copies/μL;重复性试验显示,批内和批间变异系数小于3%。用该方法检测62份猪腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,前者的检出率更高;两种方法检测1 168份进境活猪粪便拭子样品,结果均为阴性。结果表明,本研究所建立的方法适用于国内猪场的PDCoV的检测和进境活猪的监控检测,也可作为PDCoV的诊断及分子流行病学调查的技术手段。  相似文献   

禽呼肠病毒感染鸡胚成纤维细胞后Toll样受体mRNA转录水平的动态变化     

蓝元喜  谢芝勋  黄莉  谢丽基  邓显文  范晴  罗思思  谢志勤  黄娇玲  张艳芳  王盛  曾婷婷 《动物医学进展》2016,(9)

为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。  相似文献   

屠宰企业非洲猪瘟PCR自检中常见问题与对策     

李强 《畜牧兽医科技信息》2021,(3):46-47

生猪屠宰企业是非洲猪瘟疫情防控的重要环节,是切断非洲猪瘟传播途径的重要环节,也是保证屠宰企业出厂肉品质量安全主要关卡。目前,我县屠宰企业在开展非洲猪瘟PCR检测过程中,也陆续出现了一些问题,本文对这些问题进行了分析和总结,并提出自己相应对策,供参考。  相似文献   

牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用     

杨金鑫  肖分雪  朱奕霏  宋延来  孙兴忠 《特种经济动植物》2023,(11):11-15

为建立特异性强、灵敏度高、重复性好的产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法，本试验根据产气荚膜梭菌的plc基因保守序列设计合成特异性引物探针，摸索其最佳反应条件，进行灵敏性、特异性、重复性以及临床样本验证。结果表明：建立的方法具有较好的灵敏性、特异性及重复性，最低检出限度为8.26×10¹拷贝/μL，在8.26×10³～8.26×10⁸拷贝/μL的范围内具有良好的线性关系，同时不与其他致病菌发生交叉反应，组间及组内的变异系数均小于4%，应用比方法在采集的300份临床样品中检出24份阳性样品，与常规细菌分离鉴定方法结果符合率为94.12%。说明试验成功建立了牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法，这将为牛产气荚膜梭菌的快速诊断提供技术支持。  相似文献   

猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究     

戴政列  朱静静  陈振宇  周晓龙  汪涵  李向臣  赵阿勇  杨松柏 《中国畜牧兽医》2021,48(12):4382-4390

试验旨在对猪SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease 1,SENP1)基因CDS区进行克隆和生物信息学分析,并探讨SENP1基因在乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染PK15细胞后的表达情况。根据GenBank中公布的猪SENP1基因预测序列(登录号:XM_013997974.2)设计特异性引物,通过RT-PCR和T/A克隆技术对猪SENP1基因CDS区序列进行克隆测序,并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR分析猪SENP1基因在JEV感染PK15细胞不同时间点(0、12、24、36、48 h)的表达情况。结果显示,猪SENP1基因CDS序列全长2 034 bp,共编码677个氨基酸。序列比对和系统进化树分析结果表明,猪SENP1蛋白序列和山羊、犬、人、牛的相似性分别为94.8%、94.2%、93.9%和93.8%,说明在这些物种中SENP1的保守性较强;猪与犬的SENP1分子亲缘关系较近。生物信息学分析结果显示,猪SENP1蛋白相对分子质量为76 825.76,等电点为8.53,体外半衰期为30 h,不稳定系数为53.59,总平均亲水指数为－0.622。SENP1蛋白不含信号肽序列,无跨膜结构域。二级结构分析结果显示,SENP1蛋白中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别占31.31%、46.68%、16.25%和5.76%。三级结构分析结果显示,猪SENP1蛋白中存在8个α-螺旋区和7个β-转角区。实时荧光定量PCR结果显示,猪SENP1基因在JEV感染的PK15细胞中呈现上调表达趋势,其中在感染后48 h SENP1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。本试验结果为后续深入研究SENP1基因功能提供了参考。  相似文献   

PCR检测猪输血传播病毒Ⅰ型方法的建立及其初步应用     

娄高明  殷华平  冯顺胜  黄健强 《中国兽医学报》2011,31(8):1107-1110

参照GenBank已公布的猪源输血传播病毒Ⅰ型（Torque Teno Virus genogroupⅠ,TTVⅠ）全基因序列,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增片段为194bp,测序结果与已公布的猪TTVⅠ型序列同源性为92.6%。用所建立的方法检测猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪多杀性巴氏杆菌、猪链...  相似文献   

长链寡核苷酸生物合成方法的研究     

《中国园艺文摘》2011,27(6):195-195

化学合成长链寡核苷酸面临许多困难，研究通过对长链寡核苷酸生物合成方法的研究，成功合成并纯化了长链寡核苷酸，其长度达到146nt，并且其序列没有错误。生物合成的基本方法是：首先用一对PCR引物扩增DNA模板，  相似文献