山羊和绵羊嗜血支原体PCR检测方法的建立与应用     

刘明明  张守发  贾立军  梁晚枫  薛书江  宋建臣 《中国预防兽医学报》2013,35(8):648-650

为建立羊嗜血支原体(M.ovis)病快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的羊M.ovis 16S rRNA基因序列设计一对引物,以山羊和绵羊M.ovis基因组DNA为模板,建立M.ovis PCR检测方法,并进行特异性、敏感性及临床应用试验。结果显示,建立的M.ovis PCR检测方法扩增片段大小为508 bp,与GenBank中M.ovis参考株同源性达99%以上,该方法与猪嗜血支原体、牛嗜血支原体等病原体无交叉反应,最低检测40个拷贝的DNA;通过对延边地区60份山羊和绵羊血液样本的检测结果表明,建立的PCR检测方法具有特异、敏感、准确等优点,完全适用于M.ovis的检测。  相似文献   

支原体PCR检测方法的建立及初步应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

徐静 《中国兽药杂志》2013,47(11):17-21

经过对Genebank鸡滑液支原体、猪肺炎支原体、口腔支原体和猪鼻支原体16S rRNA序列比对,设计了一条通用引物,建立支原体PCR检测方法.该方法敏感、特异、经济、快速,在动物疫苗生产中检测细胞、半成品及成品支原体污染具有较大的应用价值.  相似文献   

牛支原体耐药性研究进展   总被引：1，自引：1，他引：0  

孔令聪  马红霞 《中国兽药杂志》2013,47(9):63-65

在对国内外牛支原体的耐药性研究进展做以综述的基础上,对近年来支原体的耐药机制进行了概述,以期为养牛业生产中牛支原体病的防治和耐药机制的研究提供参考.  相似文献   

肉鸡爆发非典型性新城疫继发大肠杆菌和支原体混合感染的诊断与治疗     

李琳  马玉敏  尹荣兰  邵洪泽  许尧  许志林 《安徽农业科学》2013,41(6):2466-2467,2526

[目的]探讨吉林省德惠、农安等地区养殖场肉鸡发病的原因。[方法]通过流行病学调查、剖检病变和实验室诊断确定吉林省德惠、农安等地区养殖场肉鸡发病的原因,并提出一些综合防制措施。[结果]经流行病学调查、剖检病变和实验室诊断,确诊为非典型性新城疫继发大肠杆菌和支原体混合感染。最后,提出了相应的诊断方法和综合防制措施。[结论]该研究为肉鸡养殖中可能发生的这类疾病提供有效的防制方法和借鉴经验。  相似文献   

牛支原体新疆分离株P48基因的克隆、原核表达及重组蛋白免疫原性研究     

张锐  杨铭伟  任静静  朱玲  柳旭伟  剡根强 《中国畜牧兽医》2018,45(7):1949-1957

试验旨在确定牛支原体P48基因的免疫原性，为进一步筛选牛支原体免疫保护性基因奠定基础。本研究以牛支原体新疆分离株为研究对象，运用Overlap PCR方法扩增得到点突变后的牛支原体新疆分离株P48基因，构建原核表达载体pET-32a （+）-P48，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，在诱导剂ITPG的诱导下获得重组蛋白P48，纯化后的重组P48蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，运用Western blotting和ELISA方法验证其反应原性和免疫原性。结果表明，试验成功构建原核表达载体pET-32a （+）-P48，重组蛋白P48大小约为66 ku，纯化后的牛支原体P48重组蛋白免疫小鼠后可产生良好的免疫反应，血清抗体滴度达到较高水平（D_{450 nm}值为1.126）。Western blotting结果显示，抗牛支原体P48重组蛋白的鼠血清与牛支原体P48重组蛋白及牛支原体全菌蛋白抗原均能产生明显的抗原抗体反应，表明P48重组蛋白具有良好的免疫原性与反应原性，可作为牛支原体新型疫苗的候选基因，且牛支原体新疆分离株P48基因与国内外5株牛支原体P48基因的同源性很高，亲缘关系较近。  相似文献   

川西地区鸡滑液囊支原体分离株的部分生物学特性及其VlhA基因遗传进化分析     

李凡  张焕容  陈云霞 《中国预防兽医学报》2020,(2):122-127

为了解鸡滑液囊支原体(MS)在川西地区的感染情况,本研究采集15个肉鸡场疑似MS感染的病鸡咽拭子、跗关节和胸部滑液囊样本共75份,对经PCR检测为阳性的样本进行MS分离,并对分离株的主要生物学特性进行研究,以及对分离株的VlhA基因进行遗传进化分析。结果显示,75份样本MS PCR阳性检出率为41.33%(31/75),11个鸡场感染该病,场阳性率为73.33%(11/15);但仅从其中3个鸡场分离到9株MS,分离株菌落与菌体形态与已知MS培养特性相符,各分离株培养浓度为10~4CCU/mL^10~6CCU/mL,分离株以5×10~5CCU接种7日龄SPF鸡胚,鸡胚于接种后7 d^9 d死亡,且分离回收到接种菌株;9株MS分离株VlhA基因的同源性为86.1%~99.9%,与参考株同源性为86.2%~95.4%,其中分离自同一鸡场的7株MS VlhA基因同源性为96.4%~99.9%;分离株VlhA基因遗传进化分析显示,其中分离自两个不同鸡场的两株MS与国内流行株的亲缘关系最近,而分离自另一鸡场的7株MS与中东地区分离的3株MS亲缘关系较近,表明MS在川西地区肉鸡场呈高感染率,MS VlhA基因变异较大。本研究为川西地区MS的进一步研究提供了基础材料和科学依据。  相似文献   

丝状支原体山羊亚种最佳培养基的筛选   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵萍  储岳峰  高鹏程  贺英  逯忠新 《动物医学进展》2008,29(1):21-23

在不同条件下对丝状支原体山羊亚种进行培养,通过PPLO精氨酸培养基、牛心汤培养基、MEM-KM2培养基以及不同种类动物血清和同一动物不同浓度血清,从生长滴度、生长速度、培养基来源、造价各个方面的比较试验,结果显示,加100 mL/L马血清的MEM-KM2培养基更适合于丝状支原体山羊亚种的培养,它的生长滴度可达109,所需时间只为5 d,并且配置方便,价格合理。这一结果为丝状支原体山羊亚种抗原的大批量生产奠定了良好的基础。  相似文献   

鸡毒支原体不同地区分离株对常用抗菌药物的敏感性试验   总被引：4，自引：0，他引：4  

孔意端  林居纯  陈继荣  陈杖榴  曾振灵  蒋红霞 《动物医学进展》2008,29(6)

从广东、四川和北京等地疑似鸡毒支原体感染鸡中分离并利用种特异性基因（fMG-2）PCR方法鉴定了51株鸡毒支原体,并测定了这些分离株对常用抗菌药物的敏感性。结果表明,三个地区临床分离鸡毒支原体对泰乐菌素仍然保持较好的敏感性,可作为鸡毒支原体感染的首选药物。三个地区的鸡毒支原体对林可霉素和庆大霉素敏感性显著下降,广东、四川两地分离株对强力霉素也有明显耐受性,部分广东分离株对氟喹诺酮类药物敏感性显著下降。  相似文献   

牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立     

谢志勤  范晴  谢芝勋  张民秀  谢丽基  黄娇玲  张艳芳  曾婷婷  王盛  罗思思  邓显文  李孟  李丹  刘加波 《中国动物检疫》2019,36(1):70-75

为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvr C基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。  相似文献   

Contagious caprine pleuropneumonia – a comprehensive review     

Mohd. Iqbal Yatoo  Oveas Raffiq Parray  Shah Tauseef Bashir  Muheet  Riyaz Ahmed Bhat  Arumugam Gopalakrishnan 《The Veterinary quarterly》2019,39(1):1-25

Contagious caprine pleuropneumonia (CCPP) is a serious disease of goats, occasionally sheep and wild ruminants, caused by Mycoplasma capricolum subspecies capripneumoniae (Mccp). The disease is characterized by severe serofibrinous pleuropneumonia, very high morbidity (～100%), and mortality (80–100%). CCPP affects goats in more than 40 countries of the world thereby posing a serious threat to goat farming around the globe. The characteristic clinical signs of CCPP are severe respiratory distress associated with sero-mucoid nasal discharge, coughing, dyspnea, pyrexia, pleurodynia, and general malaise. In later stages, severe lobar fibrinous pleuropneumonia, profuse fluid accumulation in pleural cavity, severe congestion of lungs and adhesion formation is observed. Mycoplasmal antigen interactions with host immune system and its role in CCPP pathogenesis are not clearly understood. CCPP is not a zoonotic disease. Diagnosis has overcome cumbersome and lengthy conventional tests involving culture, isolation, and identification by advanced serological (LAT, cELISA) or gene-based amplification of DNA (PCR, RFLP, and hybridization) and sequencing. The latex agglutination test (LAT) is rapid, simple, and better test for field and real-time diagnosis applicable to whole blood or serum and is more sensitive than the CFT and easier than the cELISA. Moreover, the studies on antibiotic sensitivity and exploration of novel antibiotics (fluoroquinolones, macrolides) can help in better therapeutic management besides preventing menace of antibiotic resistance. Re-visiting conventional prophylactic measures focussing on developing novel strain-based or recombinant vaccines using specific antigens (capsular or cellular) should be the most important strategy for controlling the disease worldwide.  相似文献