猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的原核表达及PPA-NS1-ELISA的初步建立     

陈进会  郭万柱  殷华平  颜其贵  徐志文  王印  罗燕  王小玉 《中国兽医学报》2007,27(1):13-16

含有猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的重组质粒pPNS1通过EcoR Hind双酶切后,回收NS1基因,将其亚克隆进原核表达载体pET30a( )中,构建了重组表达质粒pET-NS1,转入表达宿主菌BL21中,通过IPTG的诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组NS1蛋白高效表达,以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的26.7%。并确定了NS1蛋白的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.6mmol/L,诱导时间为3h。Westernblotting检测表明,表达产物具有良好的免疫原性。重组蛋白经纯化后作为抗原,包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗,建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-NS1-ELISA)。结果表明,抗原最佳包被质量浓度为31.3mg/L,血清最佳稀释度为1∶40。阳性标准初步定为:待检血清D490>0.32,且待检血清D490/阴性血清D490>2.0。  相似文献   

猪流感病毒H1N1亚型济南株HA、NA、NP基因的克隆与序列分析     

朱晓林  凌宗帅  祝素珍  谢之景  赵宏坤  姜世金  张兴晓 《中国兽医学报》2011,31(1)

根据GenBank中流感病毒H1N1亚型HA、NA、NP基因序列,分别设计扩增HA、NA、NP基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增猪流感病毒(SIV)H1N1济南株(SW/SD/JT/07)HA、NA、NP基因,分别将RT-PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果显示,SW/SD/JT/07(H1N1)HA基因长为1 701bp,编码566个氨基酸;HA蛋白切割位点为IPSIQSR↓G,属于非高致病性毒株;HA蛋白有8个糖基化位点,其中有6个在HA1蛋白上,有2个在HA2蛋白上,与个别参考毒株糖基化位点个数不同;HA蛋白上的受体结合位点与多数参考毒株一致。SW/SD/JT/07(H1N1)NA基因长为1 410bp,编码469个氨基酸;NA基因颈部未发现氨基酸缺失现象;NA蛋白的头部有5个可能的抗原位点Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ分别由5个区段组成,在340、346、366位分别为P、I、N,其余参考毒株在相应位置的氨基酸分别为S、V、S;NA蛋白共有8个糖基化位点,与个别参考毒株的糖基化个数不同。SW/SD/JT/07(H1N1)NP基因长为1 565bp,编码498个氨基酸,根据HA、NA、NP基...  相似文献   

4株不同亚型流感病毒NP基因的原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘大飞  杨涛  刘明  刘春国  何利昆  桑学波  刘大程 《动物医学进展》2007,28(12):12-18

为了进一步研究A型流感病毒核蛋白功能及在诊断中的应用,采用RT-PCR技术分别扩增H1N1、H3N2、H5N1、H9N2等4株不同亚型流感病毒的NP基因,分别将其克隆到原核表达载体pET30(a)上,在大肠埃希菌中进行诱导表达.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,H1N1亚型流感病毒NP蛋白得到表达,并且能分别与H1N1和H5N1亚型流感病毒的鼠高免血清发生特异性反应,具有良好的反应活性;而H3N2、H5N1、H9N2亚型流感病毒的重组NP蛋白未获得表述.本研究结果表明,不同毒株的NP蛋白在大肠埃希菌中的表达具有一定差异性,为把NP蛋白作为诊断抗原的开发、ELISA诊断方法的建立以及蛋白功能的研究奠定了基础.  相似文献   

Influence of maternal immunity on vaccine efficacy and susceptibility of one day old chicks against Egyptian highly pathogenic avian influenza H5N1     

Abdelwhab EM  Grund C  Aly MM  Beer M  Harder TC  Hafez HM 《Veterinary microbiology》2012,155(1):13-20

In Egypt, continuous circulation of highly pathogenic avian influenza (HPAI) H5N1 viruses of clade 2.2.1 in vaccinated commercial poultry challenges strenuous control efforts. Here, vaccine-derived maternal AIV H5 specific immunity in one-day old chicks was investigated as a factor of vaccine failure in long-term blanket vaccination campaigns in broiler chickens. H5 seropositive one-day old chicks were derived from breeders repeatedly immunized with a commercial inactivated vaccine based on the Potsdam/H5N2 strain. When challenged using the antigenically related HPAIV strain Italy/98 (H5N2) clinical protection was achieved until at least 10 days post-hatch although virus replication was not fully suppressed. No protection at all was observed against the Egyptian HPAIV strain EGYvar/H5N1 representing a vaccine escape lineage. Other groups of chicks with maternal immunity were vaccinated once at 3 or 14 days of age using either the Potsdam/H5N2 vaccine or a vaccine based on EGYvar/H5N1. At day 35 of age these chicks were challenged with the Egyptian HPAIV strain EGYcls/H5N1 which co-circulates with EGYvar/H5N1 but does not represent an antigenic drift variant. The Potsdam/H5N2 vaccinated groups were not protected against EGYcls/H5N1 infection while, in contrast, the EGYvar/H5N1 vaccinated chicks withstand challenge with EGYvar/H5N1 infection. In addition, the results showed that maternal antibodies could interfere with the immune response when a homologous vaccine strain was used.  相似文献   

施肥对马铃薯铜素营养及生产效果的影响     

杜祥备  习敏  张胜  王珊珊  姜丽霞  刘美英  蒙美莲 《作物杂志》2011,(3):51-54

以马铃薯品种紫花白为试验材料,研究旱作地区施肥对马铃薯铜素营养和生产效果的影响。结果表明:施用有机肥和氮磷化肥显著增加了马铃薯各器官铜含量和全株铜素累积吸收量,促进了铜素从叶茎向块茎转移,二者配施对铜素吸收有正交互效应。每生产1 000kg块茎,平均吸收铜(Cu)3.28g。施肥提高了马铃薯产量和商品等级,增加了块茎淀粉和粗蛋白含量。  相似文献   

猪博卡病毒非结构蛋白NP1基因的克隆及基因分型研究     

陈如敬  吴学敏  车勇良  王隆柏  严山  魏宏  刘玉涛  周伦江 《中国畜牧兽医》2015,42(2):292-297

为明确猪博卡病毒福建株非结构蛋白NP1的特征,本研究根据GenBank中登录的非结构蛋白NP1的基因特征,设计特异性引物从一份患有断奶仔猪多系统衰竭综合征的仔猪肺脏和淋巴结基因组DNA中扩增到猪博卡病毒非结构蛋白NP1的全长基因序列。测序结果显示,本试验克隆的猪博卡病毒非结构蛋白NP1的基因全长为675bp,编码有224个氨基酸,其与美国株猪博卡病毒(OH110株)核苷酸同源性最高,达97.3%,但与美国株猪博卡病毒(IN109-1株)核苷酸同源性仅为81.8%;与英国北爱尔兰野猪博卡病毒(F41株和64-1株)同源性均不高,分别为82.5%和80.9%;与猪博卡病毒(H18株)核苷酸同源性最低,仅为43.8%。通过对猪博卡病毒代表株进行核苷酸同源性比对分析发现,猪博卡病毒存在3个主要的基因群,不同基因群非结构蛋白NP1的核苷酸同源性均低于50.0%。结果提示需对猪博卡病毒进行明确的划分,不同来源的猪博卡病毒可细分为3个明显的代表种。  相似文献   

非洲猪瘟病毒B438L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定     

刘雪婷  王召阳  鑫婷  郭晓宇  姜一曈  崔帅  于海男  朱鸿飞  贾红 《中国畜牧兽医》2021,48(3):991-1000

本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒（ASFV）B438L基因原核表达系统表达p49重组蛋白,并制备抗p49蛋白的多克隆抗体。根据ASFV Georgia 2007/1（GenBank登录号：FR682468.1）公布的基因序列合成B438L基因,并将其插入pET-28a （+）载体,构建pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,在16 ℃经1 mmol/L IPTG诱导12 h,通过SDS-PAGE对重组蛋白表达形式进行分析;利用串联质谱技术鉴定重组蛋白是否正确表达;将纯化的p49重组蛋白免疫小鼠制备鼠源抗p49多克隆抗体,利用间接ELISA方法测定该多克隆抗体的效价,并以间接免疫荧光试验及Western blotting检测该多克隆抗体的特异性。结果显示,试验成功构建了pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后经诱导表达获得了p49重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式表达,大小约为60 ku;串联质谱技术进一步证实该蛋白为p49。间接ELISA检测制备的鼠源抗p49多克隆抗体效价达1：64 000,间接免疫荧光试验及Western blotting结果表明制备的鼠源抗p49多克隆抗体能特异性识别p49蛋白。以上结果表明,该原核表达的ASFV p49重组蛋白具有良好的免疫原性,利用表达的p49重组蛋白制备的多克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步研究ASFV p49蛋白的结构与功能、研制相关的ASFV诊断试剂及疫苗提供了生物材料。  相似文献   

氮磷复（混）合肥料在潮土上的增产效应     

穆华  刘如恒  张桂银  邢淑敏  姜质彬 《河北农业大学学报》1995,(1)

在河北平原潮土区，就５种氮磷复（混）合肥料对小麦、玉米的增产效果进行了研究。结果表明，小麦、玉米施用氮磷复（混）合肥料后分别增产４０％～７０％和３０％～６０％。其中磷酸一铵增产效应最大，硝酸磷肥增产效应最小。５种肥料对小麦的增产作用大小为：磷酸一铵＞（尿素＋重钙）＞磷酸二铵＞（尿素＋普钙颗粒）＞硝酸磷肥；对玉米的增产作用大小为：磷酸一铵＞磷酸二铵＞（尿素＋重钙）＞（尿素＋普钙颗粒）＞硝酸磷肥。  相似文献   

爪哇稻与云南高原粳之间亲缘关系的初步研究     

张德发  李实蕡 《四川农业大学学报》1985,(2)

通过形态比较、细胞学观察、性亲和力测定,以及酯酶同工酶分析,研究了爪哇稻与云南高原粳之间的亲缘关系。结果是:爪哇稻与云南高原粳之间,在一些性状上表现出重叠变异现象;细胞学观察表明杂种F_1的花粉母细胞减数分裂基本正常;爪哇型内的布鲁稻品种对某些云南高原粳品种、布鲁稻和云南高原粳品种分别对普通粳稻、以及云南高原粳类群内的性亲和力相当高;在定量分析下,二者表现出相类似的酯酶同工酶的遗传物质基础。根据本研究结果,初步认为爪哇型内的布鲁稻与云南高原粳之间的亲缘关系较密切。本文还讨论了爪哇稻的分类地位和酯酶同工酶基因与调节体系等问题。  相似文献   

亚热带山地草地生态经济特性的研究     

周寿荣  于友民  蒲朝龙 《四川农业大学学报》1985,(2)

本文记载了亚热带山区不同海拔高度:(1)草地植物生物量的季节动态;(2)草群地上部现存量和生长量的逐月动态;(3)牧草的再生性;(4)草地抗土壤浸蚀的能力及对放牧的适应等。这些资料有利于山地草地的合理利用和正确决定草地的利用制度和方法,从而实现亚热带山地草地在适度利用的同时,保持其生态平衡。这项研究也从草地生态经济领域为亚热带山区的良性生态设计提供了基本依据。  相似文献