S2基因失活突变马传染性贫血病毒感染性克隆的构建及感染性研究     

耿庆华  郭巍  赵立平  吕晓玲  相文华  周建华 《中国预防兽医学报》2010,32(7)

为研制马传染性贫血病毒(EIAV)标记疫苗株,本研究在EIAV驴胎皮肤(FDD)细胞弱毒疫苗株感染性克隆pEIAVFDDV3-8的S2基因内部引入两个终止密码子,致使S2基因终止表达,构建了一株S2基因突变的感染性克隆pEIAVFDDV3-8△S2。用该重组质粒转染FDD细胞,盲传至第4代时,转染细胞病变明显,电镜下可见细胞内的典型病毒颗粒。反转录酶活性检测和Real-time PCR对病毒拷贝数的检测均证明,获得了EIAVS2基因终止表达的感染性克隆毒株,命名为EIAVFDDV3-8△S2。  相似文献   

柔嫩艾美耳球虫MIF基因克隆及生物信息学分析     

李永彬  杨惠琳  宋子豪  张昱  杨瑾  孟佳  崔小珍  吕晓玲  郑明学  白瑞 《中国畜牧兽医》2023,(6):2450-2459

【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)基因CDS区,探究其生物信息学特征,为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定,根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫MIF基因序列,利用RT-PCR技术扩增MIF基因CDS区,构建pET28a-EtMIF重组质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序并进行序列分析;利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、结构和功能等进行预测。【结果】成功克隆了柔嫩艾美耳球虫MIF基因CDS区序列,全长348 bp,共编码115个氨基酸,相对分子质量为1.203×10⁴。系统进化树结果表明,柔嫩艾美耳球虫MIF基因氨基酸序列与毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近,相似性为98.3%。MIF蛋白为非跨膜、可溶性、非分泌型蛋白,亚细胞定位主要在细胞质中,共有10个磷酸化位点;含有1个保守结构域,二级结构由无规则卷曲(35.65%)、延伸链(30.43%)、α-螺旋(27.83%)和β-转角(6.09%)组成,...  相似文献   

马流感病毒(A/equine/Qinghai/1/94)核蛋白基因的序列测定及同源性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨建德  薛飞  王晓钧  朱远茂  赵立平  吕晓玲  沈荣显  相文华  李景鹏 《中国预防兽医学报》2003,25(2):96-98

根据已发表的马流感病毒核蛋白基因序列，设计并合成一对特异性引物，经反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）成功扩增出了我国马流感病毒（A/equine/Qinghai/1/94核蛋白基因。将该片段连接到PGEM-T-EASY载体并转化DH5α，提取阳性菌落的质粒径EcRo1酶切的PCR鉴定其大小为1.5kb左右，对其测序并进行分析发现，与A/Equine/Kentucky/2/86,A/Equine/Miami/1/63等关系较近，同源率为93.3%--93.4%，而与我国马流感吉林A/Equine/Jilin/1/89株关系较远，同源率仅为84.6%。  相似文献   

自噬相关蛋白Beclin-1对PHEV复制增殖的影响     

苏晶晶  李姿  兰云刚  吕晓玲  赵魁  刘丽颖  贺文琦  高丰 《中国兽医学报》2018,(5)

首先利用荧光定量PCR和Western blot的方法分别从基因水平和蛋白表达水平检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomgelitis virus,PHEV)感染细胞对Beclin-1的影响,结果发现随着PHEV感染时间的增加Beclin-1表达呈现明显的上调趋势。其次,利用间接免疫荧光技术检测Beclin-1在PHEV感染后的N2a细胞中的定位变化,发现Beclin-1和PHEV呈现明显的共定位关系。随后构建Beclin-1的真核表达载体pCMV-FlagBeclin-1,将其转染至N2a细胞后接种PHEV,发现PHEV复制增殖特性并未受到显著影响。利用siRNA技术特异性敲低N2a细胞中的Beclin1水平,结果显示PHEV的表达量明显下调。本试验结果揭示了Beclin-1参与调控PHEV复制增殖的重要作用,为深入阐明PHEV致病机制提供了新的思路。  相似文献   

马传染性贫血病毒疫苗致弱过程中不同代次毒株LTR序列变异   总被引：2，自引：2，他引：2  

王晓钧  魏丽丽  范秀娟  吕晓玲  相文华  张晓燕  邵一鸣  沈荣显 《中国预防兽医学报》2005,27(3):179-183

有研究认为病毒基因组长末端重复序列LTR与病毒的毒力和复制能力直接相关.中国马传染性贫血弱毒疫苗是由一株高致病力毒株经体外白细胞传代而致弱的疫苗.经过体外超过110代传代后,病毒丧失了对马高致死性毒力并保持了良好的免疫原性.本文对传代过程中的不同代次病毒基因LTR进行了克隆和序列测定,发现传代过程中LTR发生了一系列明确的变异,一是转录起始位点在64代之前均以GGAC为特征,64代之后则表现为不规律的GAAC,AAAC,AGAC或GGTC;二是TAR起始碱基在59代之前多数为A,而64代之后均为G;三是在45代之后(55代除外),poly(A)附加位点一致表现为AA,这种一致的核苷酸变化均发生在毒力明显降低的代次,提示这些突变引起的位点或结构变化很可能与病毒毒力减弱有直接关系.  相似文献   

山羊关节炎-脑炎荧光抗体制备及初步应用     

相文华  丁思雨  吕晓玲  秦运安  沈荣显 《中国预防兽医学报》1993,(4)

山羊关节炎-脑炎(CAE)是年80年代新发现的一种由反转录病毒科慢病毒亚科成员引起的山羊慢病毒传染病。由于该病与马传染性贫血(EIA)、绵羊进行性肺炎(OPP)以及人类艾滋病(AIDS)等慢病毒密切相关而引起极大重视,相继建立了CAE琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验等诊断方法。流行病学普查结果表明,美洲CAE感染率为83％,欧洲为61％,我国在1985年从进口萨能氏奶山羊检出CAE阳性羊。迄今为止,  相似文献   

马传贫驴白细胞弱毒疫苗株基质蛋白基因的克隆与表达   总被引：5，自引：0，他引：5  

薛飞  朱远茂  王晓钧  杨建德  相文华  刘志英  赵立平  吕晓玲  沈荣显 《中国预防兽医学报》2003,25(1):1-4

从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码基质蛋白（p15)的基因，并在大肠杆菌中进行了表达，所表达的蛋白是一种可溶性的融合蛋白，其氨基端带有6个组氨酸的标签，因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化，在间接ELISA和免疫印迹试验中，重组的基质蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应，而与健康马血清无任何反应，这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性，可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制及在接种马体人免疫应答的研究中。  相似文献   

马传染性贫血弱毒疫苗株致弱过程中表面蛋白gp90的进化分析     

王雪峰  王帅  韩秀娥  林跃智  姜成刚  吕晓玲  赵利平  王凤龙  周建华 《中国预防兽医学报》2011,33(2)

为进一步研究马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗的减毒机制,本实验对EIAV弱毒疫苗的原始种毒EIAVLN40、亲本病毒株EIAVDV、驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121和EIAVDV减毒过程中的3个中间代次病毒(EIAVDLV32、EIAVDLV62和EIAVDLV92)的gp90基因进行测序分析。结果显示,适应白细胞培养的病毒株的进化距离更接近,与亲本病毒株处于进化树的不同分支。与强毒株相比,适应白细胞培养的病毒株在9个位点发生优势氨基酸的转换和V3区糖基化位点191NSSN194的缺失。此外,伴随EIAV毒力减弱的过程,有8个位点出现优势氨基酸残基的转换,在各代次病毒株中V4区具有糖基化位点237NNTW240和246NETW249的克隆所占的比例逐渐降低,其中EIAVDLV121的糖基化位点237NNTW240完全缺失。  相似文献   

猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体结合抗原表位的鉴定     

李亮  林跃智  那雷  汤艳东  吕晓玲  周建华  曲娟娟 《中国预防兽医学报》2011,33(9)

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb) p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定.结果表明p27-C7和p27-A5的结合抗原表位位于p27蛋白的aa61～aa76(氨基酸序列为61SEGCTPYDINQMLNCV76);p27-D2的结合抗原表位则位于aa191～aa206(氨基酸序列为191EQTDAAVKNWMTQTLL206).该结果为进一步深入了解p27的抗原特性和建立该蛋白的检测方法奠定了基础.  相似文献   

山羊关节炎－脑炎与其相关病的血清学关系     

相文华  秦运安  吕晓玲  丁恩雨  沈荣显 《中国预防兽医学报》1994,(1)

用琼脂扩散法检测，山羊关节炎－脑炎病毒（ＣＡＥＶ）抗原与马传染性贫血（ＥＩＡ）阳性血清不发生反应，ＥＩＡＶ抗原与ＣＡＥ阳性血清亦不发生反应．ＣＡＥＶ抗原与绵羊进行性肺炎（ＯＰＰ）阳性血清不发生反应．但ＯＰＰＶ抗原与ＣＡＥ阳性血清发生反应．  相似文献