牛蛙皮肤抗菌肽Ranalexin 基因的原核表达及其抑菌活性   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

谢芳  韩文瑜  雷连成  韩俊友  胡博 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2009,35(1):27-32

    为了验证重组抗菌肽Ranalexin的抑菌活性,提取牛蛙皮肤组织总RNA,经RT-PCR 扩增抗菌肽基因ranalexin,克隆测序后,将该基因插入pGEX-3X融合表达载体,进行原核表达,通过改变IPTG剂量、培养液pH值、诱导表达温度和诱导时间优化表达条件,并采用谷胱甘肽氧化/还原系统对重组蛋白进行复性,用琼脂扩散法测定其体外抑菌活性.结果显示,扩增获得的牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 大小为201 bp,其序列与GenBank公布序列同源性达99.57%;正确构建了pGEX-3X-Ranalexin表达载体,最佳表达条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L-1、诱导时间5～6 h;表达产物的分子质量约为34 kDa,并以包涵体的形式表达,经复性纯化后该重组蛋白对金黄色葡萄球菌具有明显的体外抑菌活性.说明牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 的原核表达载体构建成功,并获得了具有抑菌活性的重组抗菌肽GST-Ranalexin.  相似文献   

一个小麦-大麦2H代换易位系的鉴定与解析     

李世鹏  刘宏魁  吴颖  苏胜忠  单晓辉  李贺  韩俊友  陈孝  原亚萍 《分子植物育种》2018,(16)

本研究以普通小麦品种‘中国春’染色体组DNA为封阻,用生物素(biotin-16-d UTP)标记的大麦染色体组DNA作为探针,通过基因组原位杂交法解析了来自杂交组合CS×(CS+Betzes 2H)杂种后代X99-13的遗传组成,此材料含有42条染色体,其中1条大麦染色体,2条小麦-大麦易位染色体和39条小麦染色体,鉴定为小麦-大麦代换易位系。以小麦第二部分同源群短臂探针psr131进行RFLP分析,结果表明此代换易位系是涉及小麦染色体2B和大麦染色体2H的代换易位。为进一步选育小麦-大麦2H纯合易位系及利用其上的α-淀粉酶抑制蛋白基因打下了坚实的物质基础。  相似文献   

利用超声波处理花粉转化法获得玉米转基因新材料   总被引：3，自引：1，他引：2  

宋鉴达  林春晶  韦正乙  韩俊友 《玉米科学》2012,20(2):48-51

首次利用改良的超声波处理花粉方法将植酸酶基因phy转化到玉米基因组中,进行遗传转化和转化效率的验证研究。分子检测结果表明,该基因能够有效整合到玉米基因组中,并可以有效转录表达,从而证明超声波处理花粉转化技术是一种适合玉米的方便而有效的遗传转化途径。  相似文献   

玉米冷响应基因ZmCyp40克隆及其遗传转化     

郭春艳  刘宏魁  吴颖  单晓辉  苏胜忠  李世鹏  李贺  韩俊友  原亚萍 《分子植物育种》2018,(2)

从抗冷玉米自交系W9816中克隆冷响应基因ZmCyp40,对该基因进行序列分析,发现其编码389个氨基酸,与高粱中的同源基因亲缘关系较近。qRT-PCR分析玉米自交系W9816低温(4℃)处理0 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h后其根、茎、叶中基因ZmCyp40表达情况,发现ZmCyp40在玉米不同部位冷响应表达趋势不同,但均受冷诱导表达。构建ZmCyp40过表达载体,采用农杆菌介导法转化玉米优良自交系Y423的幼胚和愈伤。PCR检测转化植株,ZmCyp40阳性植株率为5.9%。qRT-PCR分析发现部分阳性植株中ZmCyp40基因的表达量有极显著的升高,可用于进一步的功能分析及玉米抗冷性状的遗传改良。  相似文献   

中国林蛙抗菌肽基因在毕赤酵母中的表达及其活性检测   总被引：1，自引：1，他引：0  

乔红伟  韩俊友  赵瑞利  胡博  谢芳  郑伟  雷连成  江利娜  韩文瑜 《中国兽医学报》2008,28(6)

将中国林蛙皮肤抗菌肽基因(RC)克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,使之准确融合于а交配因子分泌信号,然后通过电击转化毕赤酵母宿主菌GS115/His-,构建pPIC9K/RC。将筛选出的高效表达的重组转化子用甲醇作诱导剂进行小瓶发酵,28～30℃诱导后,经Tricine SDS-PAGE检测,表达产物在а信号因子引导下分泌到培养基中。分泌到培养基中的表达产物能够抑杀细菌和抑制肿瘤细胞生长。对酵母重组子用酵母染色体DNA的通用引物和目的片段的引物进行PCR扩增。结果表明,中国林蛙皮肤抗菌肽基因能以单拷贝整合到毕赤酵母染色体基因组中并形成转录产物。  相似文献   

试1243单交种干物质积累与分配规律、子粒灌浆速率及子粒品质与产量关系的研究   总被引：7，自引：5，他引：2  

焦光纯; 李明; 张培英; 李振华  韩俊友 《玉米科学》2000,8(2):063-066

玉米单交种“试1243”是适合黑龙江省第一积温带进行 间作、密植的优质杂交种,是该类型区比较典型的代表品种。为了探索该地区玉米品种的高产生理机制、子粒品质与产量的关系,我们以该品种为试材,以本区广泛种植的 “四单19”和“本玉9”为对照,进行了对比试验。试验在东北农业大学农学院试验站进行。种植条件为：纯N 180 kg/hm²,P₂O₅90kg/hm²,K₂O 180 kg/hm^{2相似文献}   

寒地大豆几种种植方式比较的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

韩俊友  闫保国 《黑龙江农业科学》1999,(6):13-15

通过目前国内外大面积推广的大豆平作窄行密植种植方式以及由其与黑龙江省实际结合而产生的大垄窄行密植种植方式与现在生产上较普遍应用的垄作种植方式的对比试验,结果表明,在高寒地区大豆缩小行距,扩大株距的栽培方式可以获得了较大幅度的增产,平作窄行密植方式最高可增产２７．１４％,选用适宜的品种和工,该项技术在高寒地区可大面积推广。  相似文献   

杂交早稻旱育秧生育特性及产量形成规律研究Ⅲ旱育秧的分蘖成穗特性     

杨德光  段志红  韩俊友  刘承柳  吴山 《湖北农业科学》2000,(6):13-15

以水育秧为对照，研究了旱育秧大苗的分蘖成穗特点。结果表明：旱育秧秧田分蘖基本遵循叶龄同伸规律，单株分蘖数明显高于水育秧，其本田分蘖保持了数量上的优势，但多为高次位分蘖。旱育秧秧田和本田分蘖的成穗率均低于水育秧。时育秧低节位分蘖穗虽多，但高次位分蘖穗也多，每穗总粒虽多，但结实率低；故穗部性状无优势。  相似文献   

基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及对小鼠感染的治疗     

韩东  冯新  韩文瑜  韩俊友  黄盼盼  何伯萍  许会会  雷连成  孙长江 《中国兽医学报》2013,33(8)

成功构建了能够高效表达鲎素TPⅠ基因的组成型毕赤酵母表达菌株,发酵培养后上清对分属于13个属的61株菌抑菌活性良好.应用肉汤微量稀释法测定发酵上清对金黄色葡萄球菌的抗菌活性,用扫描电镜观察其对金黄色葡萄球菌的抑制作用,并探讨发酵上清对小鼠皮肤感染模型的治疗作用.结果显示,基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)为(3.46±0.76) mg/L,亚抑菌浓度为(0.865±0.22) mg/L.基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌小鼠感染模型的治疗效果与抗生素差异不显著(P＞0.05),且具有刺激小鼠血管内皮生长因子表达水平增加,加速血管生成和血管发生,促进皮肤创伤愈合的功能；表明基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有良好的治疗效果.  相似文献   

新牛蛙活性肽Catesbeianin-1a的抗菌抗肿瘤作用     

赵瑞利  韩俊友  韩文瑜  刘珊珊  马吉飞  雷连成  冯新  张安国  王选 《兽医大学学报》2013,(9):1407-1411

通过筛选牛蛙皮肤cDNA文库得到具有较强抗菌抗肿瘤活性肽Catesbeianin-1a,合成其成熟肽氨基酸序列,MIC法测定抑菌活性结果表明,Catesbeianin-1a对临床常见的致病菌具有较强的抑菌活性,其中对猪链球菌2型的MIC为2.5mg/L,且对兔红细胞几乎无溶血性。MTT法测定多肽抗肿瘤细胞活性,结果 Catesbeianin-1a对胃癌细胞和肝癌细胞的抑杀活性很强,对肝癌细胞SGC7901的IC50为0.845mg/L。制作透射电镜超薄切片,利用透射电镜观察活性肽对细菌和肿瘤细胞超微结构的影响,旨在初步探讨牛蛙皮肤活性肽Catesbeianin-1a抗菌、抗肿瘤的作用机制,并以Catesbeianin-1a为基础进行分子改造来提高其抗肿瘤的靶向性并降低其毒性。  相似文献