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将猪源O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)VP1基因克隆到原核表达载体pMBX上,成功地构建重组表达质粒pMBX-VP1。将其转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中,经SDS-PAGE分析,融合蛋白分子量约为58 kD,表达产物占菌体总蛋白的35.5%。 经蛋白可溶性分析,目的蛋白在裂解沉淀中占6.8%,在裂解上清中占31.2%,融合蛋白绝大部分是以可溶形式表达的。经Western blot证实,可溶表达的融合蛋白与FMDV阳性血清具有良好的免疫反应性。将可溶表达的融合蛋白用50%Ni-NTA树脂纯化,用融合蛋白作包被抗原,通过ELISA方法,能特异性地检测出口蹄疫阳性血清。 相似文献
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新城疫病毒HN基因与T4噬菌体SOC基因在大肠埃希氏菌中的融合表达 总被引:3,自引:1,他引:2
用RT—PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)的完整HN基因序列;设计了1对带有EcoR Ⅰ限制位点的引物,用PCR扩增出了HN基因片段。将该片段克隆至pSOC质粒SOC基因3’端,成功构建了重组质粒pSOC—HN。用该重组质粒转化E.coli BL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/mL的IPTG诱导表达。在SDS-PAGE凝胶上可检测到分子质量约67ku的特异条带,蛋白质印迹法证实,表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性。 相似文献
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新城疫病毒广东分离株HN基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
用RT-PCR方法从6个新城疫病毒(NDV)广东分离株中扩增HN基因cDNA片段。并将其克隆至pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。结果表明,6个NDV分离株HN基因片段长度均为1704bp,编码568个氨基酸;彼此间核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.8%和98.6%~100%,与其他基因Ⅶ型毒株的氨基酸序列同源性为96.8%~98.4%;但与其他基因型毒株如D26、Ulster/67、B1、LaSota以及GB Texas的氨基酸同源性较低,为88.2%~91.0%。 相似文献
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通过PCR技术获得口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)和高效可溶性表达质粒pEM中,经PCR筛选,获得阳性重组子pET-3B和pEM-3B,将它们转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE及Western-blot检测结果证明,表达的3B融合蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应。蛋白可溶性分析表明,EM-3B融合蛋白绝大部分以可溶形式表达。以此可溶性融合蛋白EM-3B为抗原建立了可区分FMD免疫动物和感染动物的EM-3B-DIVA-ELISA方法,经检测,其特异性为95.0%,敏感性为97.5%,与2个国产试剂盒的符合率分别为96.25%和98.75%。 相似文献
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20世纪70年代Tischer ea al.(1974)首次发现猪圆环病毒(PCV2),它所引发的猪圆环病毒病给养猪业造成很大的经济损失. 相似文献
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传染性法氏囊病病毒变异株主要免疫原基因cDNA的克隆及鉴定 总被引:3,自引:2,他引:1
采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从1株传染性法氏囊病病毒(IBDV)本地分离株GZ902中扩增到编码IBDV主要免疫蛋白VP2的cDNA片断,大小约为1350bp。将该cDNA片断插入pBsK质粒中,用重组质粒转化大肠杆菌XL1-Blue,成功获得重组质粒转化菌。对重组质粒DNA进行酶切鉴定,证明插入的DNA片断与PCR扩增的DNA片段大小相符。对GZ902高可变区进行了序列分析。其核苷酸序列与3株IB-DV变异株A、GLS、E的同源性分别达到98.9%,96.2%和95.5%。而与其他Ⅰ型毒株的同源性较低。比较从DNA序列推导出的氨基酸序列,发现GZ902高可变区的两个亲水区均发生了一个氨基酸的变化,而在249和254位上的氨基酸分别为K和S,与以上3个变异株相同,但与所有标准Ⅰ型毒株不同。这两个氨基酸可以作为IBDV变异株的标志。 相似文献
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传染性囊病病毒诱导细胞凋亡的初步观察 总被引:5,自引:0,他引:5
用1株IBDV强毒株感染易感小鸡,对病鸡法氏囊进行电镜观察及DNA电泳分析,直接观察到病鸡法氏囊中B淋巴细胞凋亡的典型形态学特征和生化变化:染色质凝聚成团,集于核膜旁,胞膜与核膜出现凹陷,细胞拉长变形,最后细胞裂解成由膜包围着的小团,被网状细胞和巨噬细胞吞噬;感染IBDV24~48h的法氏囊细胞总DNA在电泳谱上呈梯状条带,而从正常的法氏囊提取的总DNA在电泳谱上只有1条带。结果表明,IBDV感染小鸡之后,导致了法氏囊中B淋巴细胞的凋亡。作者据此推断,细胞凋亡是造成B淋巴细胞数量减少,从而导致小鸡免疫抑制的原因 相似文献
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重组新城疫病毒HN与F蛋白免疫保护作用的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
95只1日龄SPF鸡随机分成5组,1~4组分别于10日龄接种φT4、φT4-Z1-HN、φT4-Z1-F、φT4-Z1-HN φT4-Z1-F油乳剂疫苗,第5组接种ND弱毒疫苗,25日龄加强免疫一次.结果表明,重组HN和F蛋白均能诱导ND抗体产生,但抗体水平显著低于用弱毒疫苗免疫的第5组.60日龄时用100LD50NDV强毒株攻毒,第1组鸡100%发病和死亡,φT4-Z1-HN和φT4-Z1-F免疫组的死亡率分别为50%和15.8%;用φT4-Z1-HN φT4-Z1-F和ND弱毒疫苗免疫的第4、5组鸡无一死亡. 相似文献
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用T4噬菌体表达的重组新城疫病毒HN蛋白(rHN)为包被抗原,建立新城疫抗体检测的酶联免疫吸附实验(rHN-ELISA).结果表明,抗原最适包被浓度为1.6μg/100μL,待检血清最适稀释度为1:80,鸡血清样品的光吸收值OD450大于0.126可判定为阳性结果,而SPF鸡血清,非免疫鸡血清以及MD,IBD,IB,ILT,AI阳性血清的检测结果均为阴性.对批内和批间样品重复检测的变异系数分别为3.7%~8.5%和3.1%~7.4%.人工感染NDV的SPF鸡第3 d即可用rHN-ELISA检测到抗体,灵敏度明显高于HI和AGP试验.因此,rHN-ELISA是1种特异、敏感、快速的ND抗体检测方法. 相似文献