猪丁型冠状病毒在悬浮培养猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性分析     

李厚伟  王蕾  张先锋  胡慧  张真真  张云飞  刘林涛  姬星宇  胡永浩 《畜牧兽医学报》2022,53(6):2024-2028

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^-3接种于密度为2×10⁶ cells·mL^-1的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL^-1时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。  相似文献   

77份裸燕麦品种籽粒相关性状分析北大核心CSCD     

沈吉成  王蕾  赵彩霞  叶发慧  吕士凯  刘德梅  刘瑞娟  张怀刚  陈文杰 《草业学报》2022,31(3):156-167

对77份裸燕麦品种籽粒品质等相关性状进行测定,运用聚类分析方法对测定指标进行分类比较,并采用灰色关联度进行综合评价,以期筛选出籽粒性状在青海表现良好的裸燕麦品种。主要研究结果如下:1)供试燕麦品种千粒重变异系数最高为49.29%,籽粒粗脂肪和粗蛋白含量变异系数相对较低,分别为12.23%和9.83%;千粒重与籽粒长度、宽度和直径呈极显著正相关;籽粒含水率与粗蛋白、淀粉含量呈极显著负相关,籽粒粗蛋白含量与粗脂肪含量呈极显著负相关;2)灰色关联分析表明77份裸燕麦品种籽粒性状综合评价较高的3个品种分别为5号(0.679)、73号(0.676)和26号(0.649);3)供试燕麦性状聚类分析表明,77份裸燕麦品种可被分成6个类群,其中类群Ⅵ中综合评价前10的品种占70%,包括综合评价较高的3个品种(5号、73号和26号),可考虑作为优异燕麦品种的选择区域。  相似文献   

槲皮素对PEDV感染幼龄仔猪的生长性能、血液生化指标和肠道吸收与屏障功能的影响     

汪曼丽  谭子涵  王帅杰  李倩  曾一桐  王蕾  赵迪  张倩  侯永清 《中国畜牧兽医》2022,49(9):3411-3418

【目的】 试验旨在探讨槲皮素在防治仔猪感染猪流行性腹泻病毒（PEDV）中的作用。【方法】 选取18头体重相近、健康的7日龄仔猪（杜×长×大）,随机分为3组（对照组、PEDV组和PEDV+槲皮素组）,每组6个重复,每个重复1头猪,试验期共11 d。经过3 d适应期后,于试验第4~10天给PEDV+槲皮素组仔猪口腔灌服10 mg/kg BW的槲皮素,其他组仔猪口腔灌服等体积的人工乳,于试验第8天给PEDV组与PEDV+槲皮素组仔猪口腔灌服1×10^4.5TCID₅₀的PEDV,对照组灌服等体积的PBS溶液。试验第11天早上空腹称重,全部仔猪灌服D-木糖（0.1 g/kg BW）,1 h后经前腔静脉采血,检测血液生化指标、血浆二胺氧化酶（DAO）活性和D-木糖含量;将所有仔猪屠宰取空肠黏膜,检测肠道屏障相关基因,包括肠绒毛蛋白（villin）,紧密连接蛋白-1（claudin-1）,闭合蛋白（occludin）和肠型脂肪酸结合蛋白（iFABP）的相对表达量。【结果】 与对照组相比,PEDV组仔猪平均日增重显著下降（P<0.05）,粪便评分显著升高（P<0.05）;血液中高密度脂蛋白含量显著降低（P<0.05）,肌酐和尿素氮的含量显著提高（P<0.05）;血浆中D-木糖含量显著降低（P<0.05）;空肠claudin-1、iFABP基因的相对表达量显著下调（P<0.05）。与PEDV组相比,PEDV+槲皮素组仔猪平均日增重和血浆D-木糖含量显著升高（P<0.05）;血液中肌酐和尿素氮的含量显著降低（P<0.05）;空肠claudin-1、villin和iFABP基因的相对表达量显著上调（P<0.05）。【结论】 10 mg/kg BW槲皮素可在一定程度上缓解PEDV感染导致的仔猪生长抑制和肾功能损伤,增强肠道吸收与屏障功能。  相似文献   

槲皮素对PEDV感染幼龄仔猪肠道形态、抗氧化功能及空肠脂质代谢基因表达的影响     

王帅杰  谭子涵  李晗博  孙香雪  艾思含  王蕾  赵迪  侯永清 《中国畜牧兽医》2022,49(9):3391-3399

【目的】 通过研究槲皮素对猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染仔猪肠道形态、肠道抗氧化功能及空肠脂质代谢相关基因相对表达量的影响,旨在探讨槲皮素对PEDV感染仔猪肠道的保护作用。【方法】 选取18头健康的7日龄断奶仔猪,随机分为3组：对照组、PEDV组和槲皮素＋PEDV组,每组6个重复,每个重复1头猪。试验期8 d,于试验第0~7天,对槲皮素＋PEDV组仔猪每天口腔灌服10 mg/kg BW的槲皮素,其余组灌服等体积的人工奶。于试验第5天晚上给PEDV组和槲皮素＋PEDV组仔猪口腔灌服10^4.5TCID₅₀的PEDV,对照组仔猪灌服相同体积的PBS溶液。于试验第8天早上屠宰,取仔猪十二指肠、空肠、回肠及结肠组织样品进行检测。【结果】 与对照组相比,PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著降低（P<0.01）,空肠、回肠和结肠中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）的活力显著降低（P<0.05）,十二指肠、空肠、回肠和结肠中过氧化氢酶（CAT）的活力显著降低（P<0.05）,回肠和结肠中丙二醛（MDA）的含量显著升高（P<0.05）,空肠中载脂蛋白A1（APOA1）、载脂蛋白B （APOB）、载脂蛋白C2（APOC2）、脂肪酸结合蛋白2（FABP2）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员3（ACSL-3）和脂肪酸合酶（FASN）基因的相对表达量极显著下调（P<0.01）。与PEDV组相比,槲皮素＋PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著提高（P<0.01）,空肠、回肠和结肠中GSH-Px和T-SOD的活力显著提高（P<0.05）,十二指肠、空肠和结肠中CAT的活力显著提高（P<0.05）,回肠和结肠中MDA的含量显著降低（P<0.05）,空肠中APOB、FABP2和FASN基因的相对表达量极显著上调（P<0.01）。【结论】 添加槲皮素可有效缓解PEDV感染导致的仔猪肠道损伤,提高仔猪肠道抗氧化能力以及空肠脂质代谢的能力。  相似文献   

貉源犬瘟热病毒CDV-ZC株分离鉴定、全基因测序与分析     

戴秀美  常维山  张永兵  王敏  王蕾  郭树源 《中国兽医学报》2015,35(5):711-717

应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒。分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC)。采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%。血凝素(H)基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T)。致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据。  相似文献   

流式细胞术在农业研究领域中的应用     

王蕾  罗帝洲  邓紫璇  莫敏莹  张健玲  苏颖辉  房元杰  张晓爱 《广东农业科学》2022,49(11):66-73

流式细胞术是一种对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选的生物学技术,基于流式细胞仪通 过检测散射或者偶联荧光信号快速、准确、客观、高通量获得悬浮微粒（通常是细胞、细菌等微小颗粒）一系 列重要的生物物理、生物化学相关特征参量,可以根据预选的参量范围对细胞、细菌等微小颗粒进行自动分析 和对特定群体进行分选。流式细胞术在许多科学领域特别是生物技术和医学领域应用广泛,虽然在农业研究中 的应用开始得比较晚,但目前已取得巨大进展。随着流式细胞仪性能的不断提高,标记方法和检测技术的不断 开发与完善,流式细胞术的应用前景将越来越广阔,在农业领域也将发挥越来越重要的作用。介绍了流式细胞 术的工作原理和流式细胞仪功能分类,综述了流式细胞术在农业研究领域中的应用,如对农作物基因组和原生 质体分析以及抗逆研究,对动物免疫、微量元素分析、精子质量和性别控制以及毒素毒性分析,对病原菌和病 毒分析研究等方面的应用和研究进展,展望该研究领域的发展前景,为流式细胞术在农业领域的潜在应用提供 新的思考方向。  相似文献   

大豆高产栽培技术     

王蕾 《农民致富之友》2014,(17):8-8

<正>一、地块的选择宜选择土壤比较肥沃,保水性好,通气性强,两年未种过大豆的地块。杜绝重茬,避免迎茬,上茬作物施用过阿特拉津的地块最好隔一年种豆。二、精细整地1.整地最好是秋整地。秋季,前茬收获后,用除茬机将茬子打碎,进行秋翻,耕翻深度16~20厘米,接着进行耙地、镇压。耕、耙、压作业后,地表要平整,土壤要细碎,耕层要上松下实,无大土块和暗坷垃。2.施基肥春耙前,亩施腐熟过的有机肥2000公斤、磷酸二铵10  相似文献   

青藏高原青稞及其他地区大麦种子表型的多样性分析     

王蕾  徐金青  夏腾飞  赵兴  张怀刚  刘登才  白生贵  沈裕虎 《西北农业学报》2014,23(3):40-44

以青藏高原六棱裸大麦(即青稞)和其他地区大麦共323份种质为材料,探讨其种子长、宽、长宽比、面积、密度指标和千粒质量6个性状。结果显示,6个种子性状变异系数为5.68%~15.67%,多样性指数为1.83~2.07,表明参试材料种子表型变异大,具有丰富的表型多样性。除密度指标与种子面积间相关性不显著外,其余各性状间均呈极显著相关(P0.01);主成分分析将所有参试材料的6个种子性状分为2个主成分,其累计贡献率为93.41%。在主成分分析的基础上采用最小方差法(Ward’s method)对323份大麦材料进行系统聚类分析,可将其划分为4大类群,第Ⅰ、Ⅱ类群主要是青稞农家品种和育成年份较早的品种,第Ⅲ类群主要是青稞现代育成品种和高代品系,第Ⅳ类群主要是青藏高原地区以外的二棱皮大麦。可见,在开展青稞种质资源内杂交的同时,不同棱形材料间杂交是改良青稞种子性状的有效途径之一。  相似文献   

猪繁殖障碍性传染病的综合诊治措施     

陈振勇  王蕾 《当代畜牧》2014,(23):52-53

猪的繁殖障碍性传染病严重制约着养猪业的健康发展。据有关资料介绍,我国每年因繁殖障碍淘汰的母猪,竟高达39.4%,其中大部分为传染性疾病所致。近几年来,由于大量引进外来猪种,导致母猪繁殖障碍性传染病种类逐年增多。  相似文献   

N-乙酰半胱氨酸对猪肠道功能的保护作用     

侯永清  王蕾  易丹 《动物营养学报》2014,26(10)

动物的肠道完整性在营养、代谢和机体内环境稳定中起着非常重要的作用,是机体抵御内源性和外源性有害物质的第一道屏障.肠上皮细胞的完整性是保障肠道功能的生理基础,肠上皮受损会影响营养物质的吸收,从而降低生产性能和影响动物的健康.N-乙酰半胱氨酸(NAC)是L-半胱氨酸与还原型谷胱甘肽(GSH)的前体物质,NAC的生理功能和应用效果在很大程度上与维持细胞内的GSH水平有关.饲粮中添加NAC可以缓解脂多糖应激引起的肠黏膜损伤、乙酸刺激引起的结肠炎及改善小肠吸收功能,这些与NAC促进表皮生长因子的生成、抗黏膜细胞凋亡和促进紧密连接蛋白表达有关.本文就NAC对猪肠道功能的保护作用相关研究作一综述.  相似文献