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【目的】建立检测鸡肠道黏膜柔嫩艾美耳球虫SIgA抗体的间接ELISA检测方法以期对鸡柔嫩艾美耳球虫特异性黏膜免疫水平进行评价。【方法】将鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC2和SO7基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体,构建EtMIC2-SO7重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。采用镍柱亲和层析法对EtMIC2-SO7重组蛋白进行纯化,用Bradford法测定蛋白浓度。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定法,确定ELISA检测抗原、待检黏膜的最佳工作浓度,通过单一变量法确定最佳待检黏膜孵育时间、封闭液种类、酶标二抗、显色液工作条件,参照ELISA抗体检测试剂盒阴阳性判定标准,以S/P≥0.4为阳性,S/P<0.4为阴性作为黏膜样品阴阳性判定标准,对ELISA检测方法的重复性、特异性、敏感性进行验证并与鸡柔嫩艾美耳球虫全蛋白包被ELISA板检测结果进行符合率比较。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果显示,获得大小约70 ku的EtMIC2... 相似文献
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试验旨在研究复合微生态制剂产品肽菌素对断奶仔猪生长性能、腹泻率及微生物菌群等的影响。试验选取45头定远黑断奶仔猪,随机分为3个组,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.1%、0.2%的肽菌素,每个组3个重复,每个重复为5头猪。饲养试验期为21d。试验结果表明:①试验组1和试验组2的日增重分别比对照组提高了22.5%和12.9%(差异显著,P<0.05);料肉比分别降低了7.87%(差异显著,P<0.05)和4.49%(差异不显著,P>0.05)。②在14d时,试验组1和试验组2的大肠杆菌数比对照组低5.87%和7.02%,均差异显著(P<0.05);在21d时,试验组1与试验组2的乳酸杆菌数分别高出对照组4.18%和4.79%(P<0.05),大肠杆菌数分别比对照组低6.68%和7.84%(P<0.05)。③试验组1和试验组2的IgG水平分别比对照组提高了18.5%和22.4%,均差异显著(P<0.05);试验组1和试验组2的总蛋白含量比对照组提高了9.46%和7.21%,血清尿素氮分别比对照组降低了22.9%和25.1%(P<0.05)。④在14d时,试验组1和试验组2的SIgA水平分别比对照组提高了27.8%和30.6%(P<0.05);在21d时,分别比对照组提高了33.0%和30.1%(P<0.05)。⑤在14d时,试验组1和试验组2的蛋白酶分别比对照组提高了84.0%和99.3%(P<0.01),淀粉酶分别提高了3.98%和7.65%(P>0.05);在21d时,试验组1和试验组2的蛋白酶分别比对照组提高了77.4%和91.2%(P<0.01),淀粉酶分别提高了13.1%和14.3%(P>0.05)。由此可以得出,肽菌素能够减少断奶仔猪的腹泻率,提高其生长性能,还能够改善其微生物菌群,增强其免疫功能。 相似文献
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采用常规微生物学方法从新鲜鸡粪中分离得到1株抑菌效果较好的菌株BX-6。结合菌落形态特征、生理生化特性及菌株特异性序列分析等手段,确定其分类归属,并采用管碟法对所产细菌素的抑菌特性进行了检测。结果表明,菌株BX-6为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。菌株在发酵过程中产生一定量的H2O2类抑菌物质,其所产细菌素具有较好的热稳定性、pH值耐受性,对大部分蛋白酶敏感,对鸡白痢沙门氏菌C79—13、鸡大肠杆菌01和金黄色葡萄球菌C56011有较好的抑菌效果,具有作为畜禽饲料添加剂的潜力。 相似文献
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为了分离具有产酸能力的芽孢杆菌,使用菌种分离培养基从牛粪中分离得到一株具有产酸能力的芽孢菌,命名为GF1。根据该菌株的生理生化特性鉴定和16S rDNA序列测定分析, 初步鉴定该菌为蜡样芽孢杆菌。对GF1发酵液中的代谢产物进行液相色谱分析,发现GF1可代谢产生乳酸、乙酸等有机酸。对GF1进行液体发酵,通过在沸水中加热10 min灭活菌体,检测GF1最终芽孢率可达到90%以上,对GF1进行耐热、耐酸和耐胆盐处理,发现GF1具有良好的耐热性能和较强的耐酸耐胆盐特性,以小鼠做安全性试验,结果成活率为100 %,表明GF1安全无毒。GF1不仅能够产酸,还可以产生芽孢,可以突破乳酸菌在颗粒料中添加的瓶颈。 相似文献
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一株植物乳杆菌的分离鉴定及特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
从泡菜中富集培养分离到12株乳酸菌,经测定发酵液pH值筛选到一株产酸性能较好的菌株PS-9,结合菌落形态特征、生理生化特性及菌株特异性序列分析等手段,确定其分类归属,并对其特性进行了研究。结果表明PS-9为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),菌株PS-9在pH值2.0环境中的存活率为85.2%,0.4%胆盐浓度环境中存活率为37.2%,对鸡大肠杆菌O78和金黄色葡萄球菌C56011的抑菌圈直径均超过18 mm。 相似文献
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棉籽粕是一种非常有价值的蛋白饲料,棉籽粕的有效脱毒可以提高饲料利用率。本实验建立了快速准确地测定棉籽粕游离棉酚的HPLC方法,并采用不同的脱毒方式对棉籽粕中的游离棉酚进行降解,筛选最优脱毒方法。结果显示:(1)HPLC法测定棉籽粕中棉酚含量,棉酚色谱峰出峰稳定性良好、分离效果好、峰型理想、灵敏度高,可以高效地检测棉酚含量;(2)不同处理方法对棉籽粕脱毒效果不同,棉酚脱毒率大小排序为:微生物法硫酸亚铁法尿素法高温高压法。最优的方法为微生物法,酵母菌发酵48 h后的发酵棉籽粕棉酚降解率高达93.86%;化学法(硫酸亚铁法和尿素法)脱毒率在53.64%~78.18%,物理法(高温高压)脱毒率最低为41.00%。 相似文献
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为进一步规范卵黄HI抗体效价检测方法,试验从所用红细胞的种源性、稀释液种类以及抗原厂家3方面对HI抗体效价检测方法进行对比分析。研究发现,当卵黄样品抗体效价较高时使用异种家禽的红细胞对试验结果影响差异不显著(P0.05),样品抗体效价较低时使用异种家禽红细胞对试验结果有一定影响,但差异同样不显著(P0.05);选择1×PBS或者0.9%的生理盐水作为稀释液对试验结果影响不大(P0.05);使用不同厂家的抗原检测抗体效价禽流感H5亚型(Re-7株)、禽流感H7亚型(H7N9),差异极显著(P0.01)。卵黄抗体效价的检测,对稀释液的要求不高,但应尽量选择同种家禽的红细胞,抗体效价检测结果的对比分析应当选择正规厂家相同批次的抗原进行比较。 相似文献
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复合微生态制剂、饲用抗生素对肉鸡生长性能、肠道菌群数量和免疫性能的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验旨在研究复合微生态制剂及饲用抗生素对肉鸡生长性能、肠道菌群数量和免疫性能的影响。选择体重接近、健康的600只1日龄白羽肉雏鸡随机分成5个组,每组6个重复,每个重复20只。Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮;Ⅱ组为肽菌素T3组,在基础日粮中添加1.0‰的复合微生态制剂肽菌素T3;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组为抗生素组,分别在基础日粮中添加20 g/t硫酸黏杆菌素、50 g/t杆菌肽锌及50 g/t杆菌肽锌和10 g/t硫酸黏杆菌素混合物。预试期3 d,正试期35 d。结果表明,与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组相比,肽菌素T3组肉鸡各阶段平均日增重（ADG）、盲肠和直肠乳酸杆菌数量显著增高（P<0.05）,料重比（F/G）、盲肠和直肠大肠杆菌数量显著降低（P<0.05）;脾脏指数分别提高27.44%、40.27%、29.01%和29.81%（P<0.05）,法氏囊指数分别提高12.82%、37.50%、33.33%和38.95%（P<0.05）。肽菌素T3组肉鸡血清内毒素含量低于Ⅰ组（P>0.05）和Ⅲ组（降低24.77%,P<0.05）。与Ⅰ组和Ⅲ组相比,肽菌素T3组盲肠内容物分泌型免疫球蛋白A（sIgA）含量分别提高32.37%和25.79%（P<0.05）。综合上述结果,本试验条件下,日粮中添加1.0‰肽菌素T3可提高肉鸡生长性能,改善肉鸡肠道菌群结构,促进肉鸡脾脏和法氏囊的发育,其提高盲肠内容物sIgA含量、降低血清内毒素含量的效果优于20 g/t硫酸黏杆菌素。 相似文献