水疱性口炎病毒糖蛋白基因的克隆和表达     

孙成群  彭金美  吴东来  童光志  仇华吉  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2005,27(4):250-256

对一株实验室保存多年的水疱性口炎病毒(VSV)的囊膜糖蛋白(VSV_G)基因进行了克隆和测序,并且构建了重组VSV_G真核系统表达载体。结果表明克隆的VSV_G基因全长1536个核苷酸(nt),其编码的G蛋白长为511个氨基酸(aa),氨基酸序列与20个Indiana血清型VSV毒株的同源性在95.4%左右(94.1%～98.0%)。种系发生树分析表明此病毒株属于水疱病毒属的VSV_Indiana血清型。经免疫荧光检测证明构建的重组VSV_G表达质粒pCIVG5和pCRVG6转染23T细胞后能够有效地转录和表达,这为进一步开发利用VSV_G奠定了基础。  相似文献   

鸡白介素-2基因在大肠杆菌中表达及多克隆抗体制备*   总被引：3，自引：0，他引：3  

萨仁高娃  刘胜旺  孔宪刚  丁忠庆  乌尼 《农业生物技术学报》2003,11(4):412-416

将编码鸡(Gallus gallus)白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)蛋白的基因亚克隆到大肠杆菌(Eschetichia coli)原核表达载体pPROEX^HT中，构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α并用IFTG于37℃诱导培养。SDS-PAGE和Western blot分析显示，表达的鸡IL-2融合蛋白分子量约为19kD。融合蛋白经薄层扫描发现目的蛋白表达量约占菌体蛋白的30％。包涵体被6mol／L，盐酸胍裂解后，通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡IL-2融合蛋白及其纯化产物免疫家兔，制备兔抗鸡IL-2多克隆抗血清，并用琼脂扩散实验对多克隆抗血清进行鉴定，表明其与纯化的重组鸡IL-2蛋白具有良好的反应性，而且该反应是特异的。  相似文献   

鸡传染性支气管炎诊断方法及其病原血清型鉴定的研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

高磊  孔宪刚等 《预防兽医学进展》2000,2(4):22-25

  相似文献   

3种基因型鸡传染性支气管炎病毒免疫对tl／CH／LDT3／03株的保护性     

李成仁张晓楠  王钰韩宗玺  刘乔然邵昱昊刘胜旺  孔宪刚 《中国兽医科技》2007,37(12):1024-1028

以鸡传染性支气管炎病毒（IBV）S1基因比较为基础，分析了IBV tl／CH／LDT3／03型毒株与中国其他流行IBV毒株之间的关系，选择5株代表3种基因型的毒株进行动物免疫攻毒试验，以发病率、死亡率、抗体产生及在不同脏器中的病毒检出率作为指标来评价异种毒株对tl／CH／LDT3／03株的保护性。结果显示，同种致弱毒株对tl／CH／LDT3／03强毒株具有良好的保护性，而异种毒株对tl／CH／LDT3／03强毒株的保护性低。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因免疫的研究     

刘思国  康丽娟  江国托  孔宪刚  张宪  刘忠贵  卢景良 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

将已经序列测定的鸡传染性支气管炎病毒ＨＢ株的核蛋白基因亚克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的Ｋｐｎｌ酶切位点。快速筛选鉴定出含有ＨＢ核蛋白基因的重组质粒，经酶切、ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定为正向插入的重组ＨＢ核蛋白基因后，将其命名为ｐｃＤＮＡ－Ｎ。对重组质粒ｐｃＤＮＡ－Ｎ进行大量扩增，应用聚乙二醇方法进行纯化，将纯化后的 ｐｃＤＮＡ－Ｎ按 １００／只免疫１４日龄雏鸡，并以ＰＢＳ免疫作为空白艰照。免疫后的攻毒试验结果表明，在基因免疫组的１０只雏鸡中，有４只雏鸡存活，保护率为４０％（４／１０）；而空白对照组的１０只雏鸡则全部死亡，无保护率。本试验认为，ＩＢＶ核蛋白在抗感染和致死方面起着一定的免疫保护作用。  相似文献   

新城疫病毒样颗粒(ND-VLPs)免疫效力的研究     

吴芬芳  闫丽辉  曹殿军  刘培欣  闻晓波  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2008,30(1):42-46,63

为了研究ND-VLPs的免疫原性,利用共表达NDV F、HN、NP和M蛋白的重组杆状病毒rBac-F-HN-NP-M感染Sf9细胞,采用蔗糖密度梯度离心法纯化释放到细胞培养上清的VLPs,免疫60只,18日龄SPF鸡,监测血清中NDV特异性抗体滴度的变化.2周后用相同剂量的VLPs加强免疫.二免后2周以3.16×103EID50的F48E9株强毒滴鼻攻毒.攻毒前,La Sota灭活苗、La Sota 20μg VLP和不同剂量VLPs组(10 μg、20 μg、25 μg)HI效价分别为28.3、28.9、24.1、26.1、26.7;攻毒后,10 μg和20 μg VLP免疫组仅能提供了80%和90%的保护率,但与La Sota灭活苗、La Sota 20 μg VLP一样,25 μg VLP试验组却能够完全抵抗致死剂量的NDV强毒攻击.本试验表明,ND-VLPs具有良好的免疫原性,25 μg VLP诱导机体产生的免疫应答能抵抗致死剂量强毒的攻击.ND-VLPs有可能用来研制针对新城疫流行变异株的高效疫苗.  相似文献   

马传染性贫血病毒囊膜基因gp90V3区糖化回复突变感染性克隆的构建     

韩秀娥  张萍  王雪峰  孔宪刚  相文华  周建华 《畜牧兽医学报》2008,39(12)

为阐明我国马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus,EIAV）弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,作者分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90V3区的潜在N-连接糖基化位点出现稳定的碱基替换,使该位点消失。为研究囊膜糖基化的作用,以疫苗株全长感染性克隆pLG—FD3—8为亲本,利用反向遗传技术对该突变位点进行糖基化序列回复操作,构建全基因感染性克隆pLGFDg5。将pLGFDg5转染驴胎皮肤细胞（FDD）,通过逆转录酶活性和RT-PCR方法评价其感染性。结果表明,将pLGFDg5在FDD细胞中盲传3代后,可在细胞培养上清中检测到逆转录酶活性,用RT—PCR检测到EIAV保守基因片段,在电镜下可见典型的EIAV粒子。在FDD细胞上的病毒复制动力学分析显示,与其亲本克隆pLGFD3—8的衍生病毒pLGFD3-V相比,回复突变克隆衍生的pLGFDg5-V复制速度较慢,获得较低的病毒载量。体外抗体中和试验表明,与其亲本pLGFD3-V相比,引入潜在的糖基化位点g5降低了衍生病毒对中和抗体的敏感性。这一结果为N-连接糖基化在我国马传贫弱毒疫苗致弱机理的作用研究提供了重要依据。  相似文献   

新城疫流行病学变化及综合防制进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘怀然  孔宪刚 《兽医导刊》2008,(6):27-30

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病,被国际动物卫生组织(OIE)列为危害禽类的两种A类传染病之一.尽管世界各国对ND采取了严格的防控措施,如对强毒感染的扑杀措施、限制使用中等毒力疫苗及强制性免疫等措施,但它仍然是危害禽类的主要传染病,并且呈现新的流行趋势,使防制工作变得复杂化.  相似文献   

应用单克隆抗体对马传贫弱毒疫苗接种马血清中相应抗原的检测     

孔宪刚  刘滨东  卢景良 《中国预防兽医学报》1992,(3)

应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明,自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原,持续期达51个月以上;自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及42盼健康马血清中均未捡出单抗相应抗原。病理学检查表明,弱毒疫苗免疫马无马传贫病理学改变。以弱毒免疫马肝、脾、骨髓材料进行生物学试验表明,弱毒免疫马体内不存在致病性病毒。这为阐明该弱毒疫苗的免疫本质提出一个非常值得今后深入加以探讨的课题。  相似文献   

爆发高致病禽流感疫区的自主活动鸟类 禽流感及新城疫的血清学调查与分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

崔尚金  李曦  符芳  王靖飞  吴春燕  童光志  孔宪刚 《畜禽业》2006,(2):4-7

应用血凝抑制试验（HI），时采自健康的鹰、鸽子、野鸭和鹌鹑中的54份血清血清学检测，分析结果显示。在总共采集的54份血清样品中，抗新城疫病毒（NDV）抗体流行血清型（seroprevalence）与抗H6亚型禽流感病毒（H6）抗体、抗H9亚型禽流感病毒（H9）、抗H5亚型禽流感病毒（H5）抗体阳性率分别为64．8％、75．9％、29．6％。而根据血凝抑制试验检测结果发现。H5亚型禽流感病毒抗体滴度较低，最高位为320，其阳性率为29．6％，推断其可能为新近传入的病毒或新近重组变异出现的新病毒，可能为与该次流感爆发相关的新病毒，这一推断还有待于通过对病毒基因序列的分析而做进一步验证；新城疫病毒在该生态系中的稳定循环．构成了对家禽潜在的威胁，我国目前非典型新城疫的一个主要原因是带毒鸟类的传入。  相似文献