猪瘟病毒实时定量PCR检测方法的建立及初步应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

程敏  郭抗抗  张彦明  何雷  董玲娟  李维维  刘伟  曹伟伟  张渭东 《西北农业学报》2012,21(9):29-33

为建立一种快速检测猪瘟病毒的基因检测方法,根据GenBank中猪瘟病毒(CSFV)基因组NS2基因序列设计并合成引物和Taq Man探针,通过各项条件优化并以10倍稀释度的质粒为标准品进行实时定量PCR扩增制作标准曲线,建立检测CSFV的实时定量PCR方法。该方法的检测灵敏度可达每微升10个拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高出1个数量级;对标准品质粒检测的线性范围是1.0×109～1.0×101μL-1。对1.0×107、1.0×105、1.0×103μL-13种稀释度的标准品质粒进行重复试验,批内变异系数分别是0.30%、0.85%、0.43%,批间变异系数分别是0.81%、1.36%、0.63%,具有良好的重复性。应用该方法对45份临床样品进行检测,检出26份阳性样品,而常规PCR只检测出19份阳性样品,说明该实时定量PCR方法的敏感性高于常规PCR。可见,该方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可用于检测病料中的猪瘟病毒。  相似文献   

整合素干扰载体的构建及细胞转染试验     

李维维  张彦明  王刚  程敏  陈婷 《动物医学进展》2012,(2):21-25

应用RNA干扰方法,设计合成了整合素的2个不同干扰位点的shRNA及空白对照载体,转化E.coli DH5α菌株,扩大培养后提取质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞。RT-PCR方法检测显示,干扰载体在mRNA水平上的干扰效果明显。该干扰载体的构建及转染,为进一步研究整合素对猪细胞增殖特性及猪瘟病毒在细胞中的增殖作用奠定了基础。  相似文献   

五味益肝安神颗粒成型工艺研究     

程敏 《陕西农业科学》2009,55(3):55-56

确定五味益肝安神颗粒的最佳制粒处方组成。以颗粒的成型性、溶化性、吸湿性及口感为考察指标,优选合适的制粒方法、辅料及其配比,并测定最优成型处方所制颗粒的临界相对湿度。采用湿法制粒,浸膏;糖粉：糊精为1：3：0．5时,颗粒的成型性高,溶化性合格,口感好。最优成型处方所削颗粒的临界相对湿度为70％．实验结果可为五味益肝安神颗粒制剂处方组成的确定及生产环境的控制提供实验依据。  相似文献   

日本的鳗鲡养殖技术     

程敏 《科学养鱼》1988,(4):10-11

日本的鳗鲡养殖过程主要为：鳗线采捕者采捕天然鳗线→向鳗线采捕者购买鳗线→鳗线的初步处理→鳗线或小规格鳗的饲养→把幼鳗养成商品规格→运往市场。  相似文献   

纤维板喷蒸热压传热传质规律研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

谢力生  李昱坤  李翠翠  程敏 《林业科技》2007,32(1):46-49

采用喷蒸热压方式对中低密度纤维板坯进行热压,测定并记录热压过程中板坯中心层开始升温的时间、达到100℃的时间、稳定温度及达到稳定温度的时间、热压结束后板坯的含水率;分析蒸汽压力、目标厚度、目标密度、热压温度及板坯含水率对其影响,得出了中低密度纤维板喷蒸热压传热传质的基本规律.  相似文献   

全基因组测序技术在猪源沙门氏菌血清分型和耐药性分析中的应用     

张璐  沈青春  徐锦涛  赵琪  李霆  程敏  张纯萍 《中国兽药杂志》2022,56(10):25-30

【目的】为研究全基因组测序技术在猪源沙门氏菌血清型和耐药性检测方面的应用能力。【方法】以60株猪源沙门氏菌为研究对象,应用传统玻片凝集法和微量肉汤稀释法对其进行血清分型和耐药性检测,并提取所有菌株核酸进行全基因组测序组装,利用SeqSero2和ResFinder4在线预测每株菌的血清型和耐药基因,然后与传统方法进行比较分析。【结果】血清凝集试验共鉴定出8种沙门氏菌血清型,而全基因组测序鉴定出9种血清型,二者分型结果的符合率为90.0%;对11种抗菌药物的药敏试验显示：沙门氏菌对四环素（73.3%）的耐药率最高,其次为氨苄西林（66.7%）、磺胺异噁唑（66.7%）和复方新诺明（53.3%）,基于全基因组预测的恩诺沙星、美罗培南、头孢噻呋和阿奇霉素的耐药性与药敏试验结果完全一致,对氨苄西林、磺胺异噁唑、四环素预测的结果符合率也均大于90.0%。【结论】全基因组测序分析的沙门氏菌血清型和耐药性与常规检测方法的符合率较高,且具有操作简便的优势,可以作为分析沙门氏菌血清型和耐药性的有效方法。  相似文献   

粉质仪和拉伸仪在面粉生产中的应用     

刘志伟  何宁  赵阳  王银萍  程敏 《农业机械化与电气化》2008,(5)

在介绍粉质仪和拉伸仪结构和原理的基础上,探讨了粉质曲线中吸水率、形成时间、稳定时间、弱化度和评价值等指标与面粉品质的关系,以及如何根据拉伸曲线中面团最大拉伸阻力、延伸度和拉伸曲线面积等指标来评价面团品质,并结合生产实际,概述了粉质仪和拉伸仪在面粉生产中的作用。  相似文献   

蛋鸡兽用抗菌药使用减量化养殖现状与研究对策     

赵琪  孙红洋  陈超超  张璐  李霆  王亦琳  张玉洁  崔明全  程敏  郝利华  张纯萍  王鹤佳 《中国兽药杂志》2024,58(2):81-88

不合理使用抗菌药严重威胁到蛋鸡养殖健康,引起鸡蛋中药物残留和细菌耐药性产生风险,影响鸡蛋食品安全和公共卫生安全。本文基于我国自2018年起开展的涵盖蛋鸡养殖的兽用抗菌药使用减量化行动,从蛋鸡养殖的减量化现状、问题、对策等方面进行综述,以期为推动蛋鸡兽用抗菌药使用减量化养殖提供参考。  相似文献   

礼泉超红葡萄建园栽培技术     

孙向军  程敏 《西北园艺》2018,(5)

正礼泉超红葡萄自2016年通过审定以来,因其生长势强、丰产、果穗果粒大、果实色泽靓丽、耐贮运、栽培效益高等优点,而受到果农的高度关注。现将其配套栽培技术总结如下。1园地选择该品种在排水良好的沙壤土、黄绵土和垆土中均能正常生长;坡地建园以小于25°背风向阳的东坡或南坡梯田为佳。海拔700 m以下地区栽植自根苗可以不用埋土防寒;海拔700~850 m的地区为埋土防寒过渡区,宜采用贝达  相似文献   

猪Jiv90基因打靶载体的构建与细胞转染试验          下载免费PDF全文

李宇立  张彦明  程敏 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2011,39(10):1-9

【目的】构建猪Jiv90基因的同源打靶载体,并转染猪血管内皮细胞系(SUVEC),对Jiv90基因的敲除效果进行初步验证。【方法】根据NCBI中公布的Jiv90基因序列,克隆得到Jiv90基因核心区两侧的基因序列,并以此为长短臂,构建了可定点敲除Jiv90基因的打靶载体。用该载体转染SUVEC,通过新霉素(G418)和丙氧鸟苷(GANC)的筛选得到稳定的细胞株,再利用PCR检测neo基因在细胞基因组上的整合情况,最后对筛选得到的neo阳性细胞进行猪瘟病毒(CSFV)感染试验,并用实时定量PCR(Real-time PCR)检测CSFV的增殖情况。【结果】以提取所得品质良好的SUVEC全基因组DNA为模板,克隆得到了针对Jiv90基因打靶的核心区两侧基因序列,基因片段长度分别为4 522bp和1 944bp。将长短臂与打靶骨架载体pA2T相连后,构建了关于猪Jiv90基因的同源打靶载体JKS。用JKS载体转染SUVEC,通过1 500μg/mL G418和200nmol/mL GANC正负筛选,得到了稳定转染JKS载体的SUVEC。对于稳定筛选后的试验组细胞,感染CSFV并进行Real-time PCR,结果表明,正常细胞中的CSFV核酸含量是转染JKS载体细胞的3.65倍。【结论】成功扩增了针对猪Jiv90基因的同源长短臂,并构建了猪Jiv90基因的打靶载体JKS,敲除Jiv90基因细胞中的CSFV核酸片段含量显著降低,说明Jiv90基因的敲除可降低细胞中猪瘟病毒的增殖量。  相似文献