耐氧氟沙星鸡大肠杆菌gyrA基因QRDR的扩增与测序     

雷连成  韩文瑜  王世若  冯现伟  江文正  陈伟 《中国兽医学报》2001,21(3):266-269

取临床分离的13株氧氟沙星（OFL）耐药菌，提取其质粒DNA，经纯化后人为模板，用PCR扩增gyrA基因喹诺酮耐药决定区（QRDR）；PCR阳性质粒的菌株，再扩增其染色体gyrA基因QRDR，直接测定质粒和染色体DNA扩增产物序列并进行分析。只有CE01菌株的质粒DNA和染色体DNA可扩增出长度为668bp的PCR产物片段，两者基因序列相同率为98．17％，相同位点突变相同的碱基有5个，相同位点突变不同的碱基有2个。与基因数据库中的大肠在杆菌gyrA基因相应序列比较，该菌质粒DNA PCR产物同源率为97．80％，有13个位点发生突变，3个氨基酸被替换；染色体DNA PCR产物同源率为97．80％，有13个位点发生突变，3个氨基酸被替换；染色体DNA PCR产物同源率98．00％，有12个位点发生突变，2个氨基酸被替换；都包括了国外资料报道的突变率较高的第83位氨基酸的突变。结果表明，该菌株质粒和染色体上都存在喹诺耐经基因，对OFL的耐药可能是质粒诱导和染色体突变共同作用的结果。  相似文献   

致病性耐药大肠杆菌的噬菌体裂解试验   总被引：3，自引：0，他引：3  

鲁会军  韩文瑜  雷连成  陈伟 《中国兽药杂志》2002,36(5):28-31

临床分离的致病性大肠杆菌的耐药谱很广,常规抗生素的治疗效果较差,对18种抗生素的平均耐药率高达80%。而用从污水中分离得到的噬菌体,经纯化增殖提高效价后,用来进行裂解试验则取得了比较满意的效果,其中对H1、H2、B1、P等几种菌的裂解率在80%以上。  相似文献   

结核疫苗研究进展     

刘珊珊  韩文瑜＊ 《中国兽药杂志》2013,47(3):52-57

综述了近年来结核疫苗研发过程中宿主抗结核感染免疫机制的研究进展,介绍了结核疫苗研发策略及已进入临床前期的结核疫苗,同时列举了新的结核疫苗评价标准,以期为结核疫苗的进一步研究提供参考.  相似文献   

胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗免疫仔猪前后差异表达基因的鉴定与分析     

杨舒心  雷连成  杜崇涛  王瑜  谢芳  韩文瑜 《中国预防兽医学报》2011,33(4)

为获得胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影诱导的仔猪淋巴细胞差异表达基因,本研究应用代表性差异分析技术构建APP菌影免疫前后正、反两个外周血淋巴细胞cDNA差减文库,并对文库中的差异基因进行克隆、测序和生物信息学分析.试验结果表明,正向文库中获得11个表达丰度上调的基因,其中7个基因与已知基因具有相似性,4个为未知新基因,经进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白RhoE、防御相关蛋白糖基转移样酶-1、上皮膜蛋白2、白介素-17和肿瘤免疫相关的周期素依赖性蛋白激酶抑制因子3等,这些功能基因表达丰度升高,可能有助于机体建立抗APP的免疫应答.  相似文献   

牛蛙皮肤抗菌肽Ranalexin 基因的原核表达及其抑菌活性   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

谢芳  韩文瑜  雷连成  韩俊友  胡博 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2009,35(1):27-32

    为了验证重组抗菌肽Ranalexin的抑菌活性,提取牛蛙皮肤组织总RNA,经RT-PCR 扩增抗菌肽基因ranalexin,克隆测序后,将该基因插入pGEX-3X融合表达载体,进行原核表达,通过改变IPTG剂量、培养液pH值、诱导表达温度和诱导时间优化表达条件,并采用谷胱甘肽氧化/还原系统对重组蛋白进行复性,用琼脂扩散法测定其体外抑菌活性.结果显示,扩增获得的牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 大小为201 bp,其序列与GenBank公布序列同源性达99.57%;正确构建了pGEX-3X-Ranalexin表达载体,最佳表达条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L-1、诱导时间5～6 h;表达产物的分子质量约为34 kDa,并以包涵体的形式表达,经复性纯化后该重组蛋白对金黄色葡萄球菌具有明显的体外抑菌活性.说明牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 的原核表达载体构建成功,并获得了具有抑菌活性的重组抗菌肽GST-Ranalexin.  相似文献   

病原菌自转运黏附素(Autotransporter adhesin)的研究进展     

韩文瑜  谢芳  雷连成 《中国兽医学报》2010,30(4)

病原菌对宿主细胞的黏附是引发感染的第一步.分泌到革兰氏阴性菌表面的自转运黏附素调节着细菌对宿主细胞的黏附,是重要的毒力因子.本文综述了自转运黏附素的结构和功能特征.并且评价了自转运黏附素用于疫苗的潜力,有望为研制防御革兰氏阴性菌感染疫苗提供新的设计靶位.  相似文献   

人溶菌酶基因hLYZ在小鼠乳腺中的表达及其抗菌活性检测     

吕爽  欧阳萍  雷连成  杨鹏  赵瑞丽  韩文瑜 《中国兽医学报》2010,30(6)

从人胎盘组织中克隆获得人溶菌酶基因hLYZ,选用体内表达载体pcDNA3.1,构建表达载体pcDNA3.1hLYZ,并转染至小鼠体内,采集小鼠乳汁和乳腺组织,通过RT-PCR方法检测基因的表达水平,用免疫组化反应、Western blotting检测蛋白的表达,并通过体外抗菌活性检测重组人溶菌酶的抗菌活性。经酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组质粒pcDNA3.1-hLYZ构建正确,小鼠乳清的SDS-PAGE电泳显示在约14700处有特异的蛋白条带出现,Western blotting检测表明成功表达了人溶菌酶,根据回归方程计算酶活性为4011U/mL,体外抗菌活性检测结果显示重组人溶菌酶对大肠杆菌有明显裂解作用。本试验成功地在小鼠乳腺中表达了重组人溶菌酶,表达的蛋白具有较高的酶活性,这些结果为哺乳动物乳腺生物反应器的研究奠定了基础。  相似文献   

新城疫病毒受体在不同动物细胞上的分布比较     

冯新  宋战昀  韩文瑜  丁壮 《中国兽医学报》2010,30(9)

细胞表面的SAα2,3Gal和SAα2,6Gal2种糖链可以作为新城疫病毒(NDV)入侵靶细胞的受体,但这2种糖链在不同动物细胞上的分布和相对丰度存在差异,为明确不同动物细胞上NDV受体的分布和相对含量,分别对鸡胚成纤维细胞、鹅胚成纤维细胞、鸭胚成纤维细胞以及Vero细胞,使用糖链检测试剂盒进行凝集素细胞原位免疫组织化学检测,FITC/PI双染色后激光共聚焦显微镜观察比较不同禽类细胞上受体分布。结果表明鸡胚成纤维细胞和Vero细胞表面同时分布有SAα2,3Gal和SAα2,6Gal2种受体,而鹅胚成纤维细胞、鸭胚成纤维细胞表面则只分布有SAα2,3Gal受体,缺乏SAα2,6Gal受体,提示NDV受体在不同禽类细胞表面的分布存在种属差异性。  相似文献   

牛布鲁菌强毒株544与猪型疫苗株S2基因组差异筛选与鉴定     

张俊敏  韩文瑜  雷连成  孙长江  冯新  赵伟栋  杜涛峰  刘珊珊 《中国兽医学报》2010,30(11)

应用代表性差异分析技术(Representational difference analysis,RDA)对流产布鲁菌强毒株544和疫苗株S2进行基因组差异分析。经过3轮差减杂交,对差异片段进行Southern-blot验证,BLAST分析和PCR鉴定,最终获得疫苗株S2特有的3条差异片段与已测序的所有猪布鲁菌(Brucella suis)同源性均为100%,只在弱毒株S2基因组中检测出,而在强毒株544中不存在,为建立布鲁菌自然感染菌与疫苗株的基因鉴别诊断方法奠定了基础。  相似文献   

结核分枝杆菌天然抵抗宿主防御和药物的机制及治疗策略     

刘珊珊  韩文瑜  雷连成  孙长江  张俊敏  刁昱文  杜涛峰 《中国预防兽医学报》2010,32(11)

<正>结核病严重威胁着人类健康,据世界卫生组织最新统计,结核分枝杆菌(Mycobacterium)感染者约占全球总人口的三分之一,每年约有800万新发病例,200多万死亡病例,死亡人数居单一传染病之首[1]。结核分枝杆菌与人  相似文献