噬茵体裂解基因E原核表达载体构建及大肠杆菌菌影的制备     

王丽哲  雷连成  韩文瑜 《吉林农业大学学报》2008,30(2):188-190

根据Genbank已知序列,设计1对引物,采用PCR方法扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,经克隆、鉴定及序列测定分析,将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,构建了能够在大肠杆菌中表达裂解基因E的载体pGEX-E,并采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后成功获得了大肠杆菌菌影,为进一步研究菌影这一新型的疫苗制备方法和新的疫苗佐剂奠定了基础.  相似文献   

鲤鱼IL8的克隆及序列分析^*     

李莲瑞  卢强  刘明远  崔国祯  韩文瑜 《云南农业大学学报(自然科学版)》2008,23(1):68-72

 利用DD-RTPCR（正常鲤鱼外周血白细胞和经有丝分裂源刺激后白细胞的总RNA）获得的差异显示片段B₁₀克隆（编码IL8的一段序列）,对该基因进行DIG标记,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×10⁴个重组噬菌体中,经过2轮筛选最终获得阳性克隆,挑选了3个分别命名为IL8-1,IL8-2,IL8-3。测序后经NCBI Blast分析表明,阳性克隆具有完整阅读框架,均为编码鲤鱼IL8的全长cDNA,编码的多肽由98个氨基酸残基组成,其相对分子质量理论推导值为 10 848.9 Da,等电点为8.68。且与2003年12月Dev Comp Immunol.杂志报道的荷兰鲤鱼氨基酸的同源性达84%。  相似文献   

肺炎克雷伯菌K7R噬菌体生物学特性及其抗性菌株的抗性机制     

付瑶  张昊  袭恒豫  冀亚路  徐莉  顾敬敏  韩文瑜 《中国兽医学报》2024,(3):504-513

以肺炎克雷伯菌K7R为宿主菌分离得到1株长尾噬菌体vB＿KpnS＿ZH01(简称P-K7R),其最佳感染复数为0.01,潜伏期约为10 min,暴发量为169 PFU/cell,且具有稳定、良好的杀菌活性。全基因组测序结果显示,P-K7R全长为52 111 bp,共编码86个开放阅读框。经过诱导,获得P-K7R抗性菌K7R-5P,尽管K7R-5P和K7R在显微镜下菌株、菌落形态以及生长曲线无明显差异,但在两者转录组学水平上检测到ompC、ompF、N5、N102及N103五个差异基因。此外,K7R-5P与K7R对噬菌体在吸附率上有明显差异,K7R的吸附效率达到80%以上,而K7R-5P的吸附效率不足20%。最后,利用qRT-PCR对转录组学结果进行验证,结果显示K7R-5P的ompC基因表达量恢复之后,菌株对噬菌体P-K7R的抗性消失,表明ompC基因在噬菌体P-K7R吸附肺炎克雷伯菌过程中起着关键作用。结果表明,成功获得1株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体P-K7R并在体外探究了细菌对噬菌体K7R-5P产生抗性的机制,为噬菌体治疗的进一步高效应用奠定了基础。  相似文献   

空肠弯曲菌共同抗原基因文库的建立与基因克隆   总被引：1，自引：0，他引：1  

韩文瑜  江文正  雷连成  殷震 《中国兽医学报》2000,20(4):358-361

  相似文献   

大肠杆菌耐药基因定位及耐药质粒消除   总被引：30，自引：0，他引：30  

鞠洪涛  韩文瑜  王世若  梁焕春  王兴龙  江文正  雷连成 《中国兽医学报》2000,20(6):561-564

对采集的9株野生型大肠杆菌在药敏试验的基础上,进行了耐药基因定位。结果表明,4个菌株的氨苄青霉素耐药基因位于质粒上,不同畜群来源菌株之间耐氨苄青霉素质粒存在差异。用中草药艾叶的乙醇提取物和蒸馏提取物对大肠杆菌庆大霉素耐药性及耐药质粒进行了消除试验,结果艾叶乙醇提取物的消除率最高可达69.4%。  相似文献   

致病性嗜水气单胞菌耐喹诺酮类药物菌株的分离鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

卢强  郑伟  刘明远  张雅斌  韩文瑜 《中国兽医学报》2003,23(4):331-333

对吉林省内12个水域采集和送检的66尾病鱼进行了细菌分离鉴定，共检出46株嗜水气单胞菌疑似菌，通过生化试验结合PCR扩增气溶素基因Aer，确定其中22株为致病性嗜水气单胞菌。进一步采用纸片扩散法和双倍稀释法测定嗜水气单胞菌分离株对多种抗生素的耐药性，其中有4株对喹诺酮类药物耐药，并且为交叉耐药，耐药菌检出率为18．2％，纸片扩散法检测其对喹诺酮类药物的抑菌圈均小于19mm。将病料中分离的8株嗜水气单胞菌负染后电镜观察，耐药菌表面有许多大小不同的球形结构，而敏感菌表面则为细丝状菌毛结构。  相似文献   

以红细胞作为标示物的免疫测定法     

韩文瑜 《黑龙江畜牧兽医》1985,(12)

红细胞(RBC)作为一种标示物(marker)已广泛用于体液免疫、细胞免疫及临床微生物学的检测中。所建立的实验方法的种类很多,但其理论根据主要基于以下几点:一是红细胞的溶解能力(lgsability),致敏的RBC与补体结合后可出现RBC溶解,进而用此来研究补体的活性及抗原抗体反应;二是RBC的凝集能力(agglutinability),RBC遇到某种被检物(如病毒)上的凝集素或相应的抗体时,便可发生肉眼可见的凝集反应;三是经过处理的RBC,可作为抗原或抗体的载体(carrier),当遇到相应的抗体(或抗原)时,RBC也随着免疫反应的发生而被动的凝集起来,在这种反应中,RBC即是载体,又起到了免疫反应“放大器”的作用。另外一点就是RBC还具有吸附到某些  相似文献   

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中应用——Ⅲ.在细菌快速检验中的应用     

韩文瑜  黎诚跃  王世若  沈广 《中国兽医学报》1990,(3)

应用抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体(4A7),建立了适用于空肠弯曲菌快速检验的间接-ELISA和BA-ELISA。两种方法的特异性检查表明,对受试的32种其它细菌,除与幽门弯曲菌发生交叉反应外,其余均为阴性反应。对空弯菌纯培养物检测的敏感性,BA-ELISA为3.2×104个菌/mL,间接-ELISA为1.6×105个菌/mL;对细菌动态培养物检测,BA-ELISA可检出接种约5个菌/mL、间接-ELISA可检出接种约10个菌/mL的24 h增菌培养物。应用BA-ELISA对人(140份)、猪(140份)、禽类(364份)及特种经济动物(265份)标本进行检测,阳性率依次为121%、52%、58.2%和32.8%;应用间接-ELISA对人(140份)、禽类(222份)及特种经济动物(265份)标本进行检测,阳性率依次为11.4%、61.7%、31.3%。两种方法的结果均与常规培养法相差不显著,可在27h内报告结果。  相似文献   

免疫增强剂研究的某些进展     

韩文瑜 《中国预防兽医学报》1988,(2)

免疫增强剂又称免疫佐剂,是指单独作用或与抗原同时使用(注射或口服),能增强机体对抗原免疫应答的物质。近些年来,在这方面的研究有很多新的进展,免疫工作者陆继发现了许多有免疫增强作用的物质,研究了它们的作用原理,并合成了众多的免疫增强剂,从而使之在免疫血清制造、增强疫苗保护效果、非特异性抗感染、肿瘤防治等方面得到了越来越广泛的应用。现将有关的进展情况作一简述。  相似文献   

外源性凝集素在细菌鉴定上的应用     

韩文瑜 《中国兽医学报》1986,(4)

自1888年Stillmark发现蓖麻豆含有能凝集红细胞的蛋白质—蓖麻蛋白(Ricin)以来,现已从许多植物的种子、根、茎、叶、皮中,以及某些动物,如蜗牛、马蹄形蟹、龙虾、蚝、电鳗等中发现了1000多种外源性凝集素(Lectin,简称凝集素),分离纯化的已近百种。由于凝集素能与细胞膜上的糖蛋白或糖脂发生特异性结合,以及具有刺激  相似文献