利用菌落多重PCR方法进行不同动物来源多杀性巴氏杆菌鉴定的研究     

赵耘  杜昕波  李伟杰  陈敏  康凯 《中国兽医杂志》2010,46(8)

参照文献报道的多杀性巴氏杆菌种和荚膜型的特异基因合成6对特异引物,建立多杀性巴氏杆菌鉴定的菌落多重PCR方法,结果5株多杀性巴氏杆菌荚膜型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对48株不同动物来源的多杀性巴氏杆菌进行了鉴定和荚膜型分型,同时与间接血凝试验以及Biolog细菌快速鉴定系统进行比对,结果表明,所建立的多重PCR方法与间接血凝试验、Biolog细菌快速鉴定系统的符合率均达到100%。  相似文献   

产毒素多杀性巴氏杆菌菌落双重PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李伟杰  赵耘  杜昕波  康凯  陈敏 《中国预防兽医学报》2010,32(4)

为建立快速特异的PCR方法以及同时检测并区分产毒素与非产毒素多杀性巴氏杆菌,本研究根据GenBank登录的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和toxA毒素基因序列,设计合成了2对特异引物。特异性试验表明产毒素多杀性巴氏杆菌C51-6扩增出了460bp和1854bp的2条目的片段,而不产毒素多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌和鸡白痢沙门菌的扩增均为阴性;敏感性试验表明该PCR方法能从含450CFU的菌液中扩增出相应的目的片段。同时用豚鼠皮肤坏死试验和小鼠致死试验对该PCR方法进行了验证。  相似文献   

葡萄上半年栽培管理技术     

肖志毅  张存花  薄康凯 《现代农业科技》2010,(2):128-129

阐述了葡萄上半年的栽培管理技术,主要包括3～6月病虫害防治、肥水管理、修剪方法等几个关键环节,以期为葡萄下半年丰产栽培奠定基础。  相似文献   

户县同兴牌大棚西瓜标准化生产技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘燕  杨广强  薄康凯 《陕西农业科学》2010,56(6):221-223

西安市户县农业技术推广中心依托本地自然优势和区位优势,经过8 a试验、示范,总结出了"嫁接育苗、多膜覆盖、规范管理、无公害化生产"的同兴牌大棚西瓜标准化生产技术和"一种两收"的栽培模式,取得了良好的经济效益和社会效益。  相似文献   

利用菌落多重PCR对传染性胸膜肺炎放线杆菌进行血清分型     

赵耘  杜昕波  李伟杰  陈敏  康凯 《动物医学进展》2010,31(1):9-12

参照文献报道的传染性胸膜肺炎放线杆菌的特异基因合成5对特异引物,建立传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的菌落多重PCR方法,结果为10株传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对41株传染性胸膜肺炎放线杆菌分离菌株进行血清型分型,结果所有菌株均扩增出了相应的特异片段,其中6株为1型,5株为7型,1株为5型,29株为9型。  相似文献   

菌落聚合酶链反应检测支气管败血波氏杆菌   总被引：1，自引：1，他引：0  

李伟杰  赵耘  杜昕波  康凯  陈敏  陈永林 《中国农学通报》2010,26(1):9-11

根据支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica) 鞭毛蛋白基因的上游序列设计1对引物Fla1和Fla2,采用菌落PCR方法扩增目的基因片段来检测支气管败血波氏杆菌。利用该方法成功的从8株支气管败血波氏杆菌中扩增出237 bp左右的特异性目的片段。特异性试验表明,该方法对大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌和副猪嗜血杆菌均无交叉性反应。灵敏性试验表明,将单个菌落稀释105倍利用此菌落PCR仍能扩增到相应的目的片段。结果表明建立的菌落PCR方法对支气管败血波氏杆菌的检测敏感性高、特异性强,可用于Bb感染的诊断和流行病学调查。  相似文献   

重组腐败梭菌α毒素对兔的免疫效力分析     

陈小云  刘莹  薛麒  朱真  李启红  印春生  姚文生  康凯  杜吉革 《畜牧兽医学报》2018,(8)

本研究旨在获得重组腐败梭菌α毒素,并评价其毒力及免疫原性。对已知的腐败梭菌α毒素编码基因进行优化设计,通过人工合成获得基因片段Gcsa。将Gcsa克隆至原核表达载体pET-30a(+)中进行表达与纯化,从而获得重组蛋白rCSA。利用Western blot方法检测纯化的rCSA与腐败梭菌α毒素抗血清的反应性,并采用犬肾细胞系(MDCK)和小鼠来检测rCSA的毒力。以甲醛脱毒后的rCSA与Montanide ISA 201佐剂以1∶1的比例制备疫苗,免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。结果表明,rCSA为可溶性表达,比例可达50%,且能与腐败梭菌抗血清反应。MDCK细胞毒性试验显示,0.15ng·mL~(-1)的rCSA即可引起明显的细胞病变;小鼠安全性试验显示,rCSA对ICR小鼠的最小致死量是1.5×10~6 ng·kg~(-1);每毫升的一免抗血清可中和100~130个小鼠MLD的腐败梭菌毒素;每毫升的二免抗血清可中和360~480个小鼠MLD的腐败梭菌毒素;1个家兔MLD的腐败梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔得到了4/4的保护。以上结果表明,rCSA具有良好的免疫原性,可作为腐败梭菌病基因工程亚单位疫苗的候选抗原。  相似文献   

动物维生素A缺乏症的临床症状、诊断与防治     

王相勇  康凯 《养殖技术顾问》2014,(7):195-195

1临床症状畜禽维生素A缺乏症的临床症状基本上相似,但其组织和器官的表现程度有些差异。动物生长发育缓慢,食欲不振,消化不良。幼畜生长缓慢,发育不良,增重低下,成年畜营养不良,衰弱乏力,生产性能低下。夜盲症是病畜早期症状,特别在犊牛,其他症状都不甚明显时,早晨或傍晚,病牛盲目前进,行动迟缓,碰撞障碍物。但猪血浆维生素A水平很低时,夜盲症的病征还不明显。  相似文献   

红斑丹毒丝菌SpaA抗原基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测   总被引：1，自引：0，他引：1  

李伟杰  赵耘  康凯  岂晓鑫  杜昕波  陈敏 《中国兽医学报》2011,31(11)

参照红斑丹毒丝菌表面抗原A（SpaA）基因的核苷酸序列合成1对引物,对我国生产用红斑丹毒丝菌CVCC43005的SpaA全基因进行了PCR扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,SpaA基因全长1881bp,含有1个开放性阅读框,编码626个氨基酸。与已提交的红斑丹毒丝菌血清型1a、1b、2a、2b、5、8、9、12、15、16、17、N型的氨基酸同源性为97．5％～100％,血清型4、6、11、19、21的氨基酸同源性为52．8％～55．2％。与已提交的丹毒丝菌血清型18的氨基酸同源性为57．5％～58．0％。采用ChouFasman和Karplus—Schulz方案预测蛋白质的二级结构和柔性区域;运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,按Jame—son-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N端的59～64、85～91、174～186、193～201、212～215、221～231、266～275、278～288、29l～308、314～327、329～349、356～376、403～456、508～516、528～537、568～576和607～626。  相似文献   

重组产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达与免疫保护力评价     

杜吉革  朱真  薛麒  赵俊杰  彭小兵  张秀坤  李启红  印春生  姚文生  康凯  陈小云 《中国兽药杂志》2018,52(9):1-8

为获得产气荚膜梭菌α毒素(CPA)的重组突变体,并评价其毒力和免疫原性,对已知的产气荚膜梭菌CPA编码基因进行优化设计,同时引入包括第56位和第130位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),及第275位的酪氨酸(Y)和第336位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)的4个氨基酸突变。此外,在该基因5'端添加Th细胞表位(T)和鞭毛蛋白(flagellin)N末端编码序列,经人工合成获得基因片段GTFNCPAm4。将GTFNCPAm4克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rTF_NCPA_(m4)。利用Western blot方法检测rTF_NCPA_(m4)与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清的反应性,并检测该蛋白的卵磷脂酶和溶血活性以及对小鼠的毒力。随后,将重组蛋白与Montanide ISA 201佐剂以1∶1(V/V)的比例混合乳化,免疫家兔,检测兔血清的中和抗体效价。二免后21 d,对家兔通过耳缘静脉注射1个MLD剂量的A型产气荚膜梭菌毒素,以检测rTF_NCPA_(m4)对家兔的免疫保护效果。结果表明,rTF_NCPA_(m4)主要以包涵体的形式表达,且能与A型产气荚膜梭菌毒素产生血清反应;体外实验显示,rTF_NCPA_(m4)无卵磷脂酶和溶血活性;小鼠安全性实验显示,5.5 mg/kg剂量的rTF_NCPA_(m4)对小鼠无致死性;免疫重组蛋白后,每毫升的一免抗血清可中和10个MLD、二免抗血清可中和40个MLD的A型产气荚膜梭菌毒素;1个MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔得到了100%(4/4)的保护。以上数据说明,表达的CPA重组突变体蛋白具有良好的安全性和免疫原性,为A型产气荚膜梭菌基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的实验数据。  相似文献