ALV-Jgp85重组蛋白与免疫佐剂联合接种雏鸡诱导免疫保护的研究     

窦文文  李宏梅  成子强  刘建柱  刘海港  井维芳  崔治中  郭慧君 《中国预防兽医学报》2013,35(3):232-236

为研究原核表达J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85囊膜蛋白诱导雏鸡产生保护性抗体及抗ALV-J感染的作用,本研究采用ALV-J gp85重组蛋白与不同免疫佐剂接种雏鸡,检测其免疫后血清抗体变化,并在二免后第35 d进行攻毒,检测鸡体内病毒血症。结果显示单一gp85重组蛋白只能诱导少部分雏鸡产生抗体,抗体效价较低、维持时间短;而弗氏佐剂(F)和CpG(C)佐剂联合重组蛋白能够使所有的免疫鸡产生抗体,效价较高,维持时间约56 d;二次免疫可以增强免疫效果,高效价抗体维持时间进一步延长。重组蛋白免疫组减少病毒血症的免疫保护率为33.3%,而F佐剂组及F和C佐剂与重组蛋白联合免疫组免疫保护率分别为53.8%和66.7%;另外,F和C佐剂与重组蛋白联合免疫明显增强机体对病毒的抵抗力。以上结果表明使用F和C佐剂可以增强gp85重组蛋白的免疫原性,产生较好免疫保护作用,为开发有效的ALV-J亚单位疫苗提供实验依据。  相似文献   

3株牛乳源乳酸菌安全性初步评价     

李金敏  张志焱  井维芳  刘永  吴焕荣  韩寅  徐海燕  谷巍 《乳业科学与技术》2016,39(2):4-7

通过小鼠的7d急性毒性实验及30 d喂养实验,对源自牛乳中的3株肠球菌LQ-R-16-1、FC-3-7、FC-3-2进行安全性初步评价.分别对清洁级昆明小白鼠进行7d及30d连续灌胃不同剂量的肠球菌LQ-R-16-1、FC-3-7、FC-3-2,实验期间观察小鼠体征变化、计算日增体质量,最后通过大体解剖,观察脏器变化、脏器细菌易位情况并称质量计算脏器指数,脏器细菌易位情况.结果表明:7d急性毒性实验及30d喂养实验中各实验组小鼠日增体质量、脏器指数与对照组之间无显著性差异(P＞0.05),30 d喂养实验结束后未发现脏器之间有细菌易位现象.初步表明,肠球菌LQ-R-16-1、FC-3-7、FC-3-2安全,无毒副作用.  相似文献   

不同剂量CpG-ODN佐剂与ALV-Jgp85重组蛋白联合免疫诱导种母鸡血清抗体和母源抗体的比较     

聂杰  张丹丹  井维芳  任庆亚  崔治中  郭慧君  李宏梅 《农业生物技术学报》2014,(2):219-224

为比较不同剂量非甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)免疫佐剂与J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian leukosis virus,ALV-J)gp85重组蛋白联合免疫后诱导母鸡血清抗体和母源抗体的效果,利用原核表达系统制备包含gp85基因的重组蛋白作为免疫原,与不同剂量CpG免疫佐剂联合接种成年海兰褐父母代种母鸡(Gallus domesticus),首免后2周加强免疫一次,于接种前和接种后每周动态检测血清抗体,接种后部分鸡只每周收集种蛋,检测卵黄抗体。结果显示,利用原核表达系统制备的gp85重组蛋白能与ALV-J单克隆抗体JE9特异性结合;与3个不同剂量CpG联合免疫成年种母鸡后均诱导鸡只产生一定效价的血清抗体,首免后28 d效价最高;所诱导的卵黄抗体效价首免后第4周最高。其中以50μg/羽剂量的CpG联合重组蛋白接种鸡只诱导的血清抗体和卵黄抗体效价和阳性比例最佳,100μg/羽剂量的CpG次之。3个不同剂量的CpG与ALV-J gp85重组蛋白联合免疫均能诱导母鸡产生一定的血清抗体和卵黄抗体,50μg/羽剂量的CpG联合免疫的效果明显优于较高剂量的免疫效果。本研究为使用CpG联合ALV-J gp85重组蛋白诱导母鸡产生母源抗体,阻断ALV-J早期感染提供科学依据。  相似文献   

山羊β雌激素受体多克隆抗体的制备及免疫组化方法的建立     

刘海港  李宏梅  王树迎  成子强  刘法孝  窦文文  井维芳  郭慧君 《畜牧兽医学报》2013,(2):302-308

本研究旨在克隆济宁青山羊雌激素受体β(ERβ)基因,进行原核表达,制备多克隆抗体,建立免疫组化分析方法,检测济宁青山羊卵巢和子宫内ERβ分布。根据GenBank发布的绵羊ERβ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR方法从济宁青山羊卵巢组织中扩增ERβ部分基因。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体pET32a(+),构建重组表达载体pET32a(+)-ERβ,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定;经Ni-NTA纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并检测抗体效价及特异性;使用该抗体检测济宁青山羊卵巢和子宫组织细胞中的ERβ分布。结果表明,成功扩增出ERβ部分基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量约为53ku的融合蛋白;Western blotting证明该融合蛋白能与兔抗人的ERβ多克隆抗体特异性反应。制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶213,以此抗体代替购置的标准兔抗人ERβ抗体,进行Western blotting反应,特异性良好;使用该抗体建立免疫组化方法检测结果表明济宁青山羊卵巢颗粒细胞和子宫内膜上皮细胞、平滑肌细胞存在ERβ的分布。本研究获得特异性兔抗山羊ERβ多克隆抗体,使用该抗体建立免疫组化方法首次报道了济宁青山羊卵巢和子宫ERβ的分布表达,为进一步研究β雌激素受体的生物学功能奠定了方法学和形态学基础。  相似文献   

苹果酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的影响     

刘秀侠  穆熙军  王鑫  赵效南  井维芳  亓秀晔  贾刚  孙学森  谷巍 《饲料广角》2015,(14)

为了研究苹果酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的影响,按2%比例转接枯草芽孢杆菌菌液至数瓶新的液体培养基中,随机分配为四个处理组,每组3个平行,180 r/min、37℃摇瓶培养至对数期后,分别添加噬菌体和苹果酸,21h时用分光光度计测菌液OD600值。结果表明,添加苹果酸对枯草芽孢杆菌的生长及芽孢的形成均无不利影响,对枯草芽孢杆菌噬菌体也无明显抑制效果。因此,苹果酸不适宜作为枯草芽孢杆菌噬菌体的抑制剂。  相似文献   

荧光定量RT-PCR检测性成熟前与性成熟山羊卵巢α/β-ER mRNA表达的比较     

王洪进  李宏梅  胡洪杰  刘海港  窦文文  井维芳  郭慧君 《中国兽医学报》2013,33(7)

为分析性成熟前与性成熟波尔山羊和沂蒙黑山羊卵巢内α、β雌激素受体(α/β-ER)表达的差异规律,根据已发表波尔山羊α/β-ER基因序列,设计不同引物,对PCR反应条件进行优化,建立稳定检测2种山羊卵巢雌激素受体mRNA含量的荧光定量RT-PCR方法;并对性成熟前后2种山羊卵巢组织中α/β-ER mRNA进行了检测比较.结果显示,性成熟前2种山羊卵巢α-ER和β-ER mRNA表达含量较性成熟山羊低;而且这2种山羊无论性成熟前还是性成熟后,α雌激素受体表达均显著低于β雌激素受体.  相似文献