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1.
应用多重PCR检测人工感染鸡呼吸道疾病的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本文报道了IBV,NDV,ILTV,MG人工感染4周龄SPF鸡和非免疫鸡后,用多重PCR检测试验鸡的咽喉棉拭子和器官组织样品,并与传统的病原分离鉴定,血清学方法进行比较,多重PCR无论是对单一感染病原,还是对两种以上混合感染病原,其敏感性和检测速度都优于传统的鉴别诊断方法,具有较高的实用价值,可以直接应用于临床检测,服务于生产。 相似文献
2.
二温式多重PCR同时检测鸡的6种呼吸道病病原方法的建立 总被引:8,自引:1,他引:7
设计了6对分别针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV),禽流感病毒(AVI)、鸡毒素霉形体(MG)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、新城疫病毒(NDV)和滑液霉形体(MS)的特异性引物,根据反转录滞酶链反应(RT-PCR)和多重PCR原则,优化建立了一次PCR反应同时检测6种禽呼吸道病原的二温式多重PCR。该方法可同时扩增出6条区段大小与设计相符符的特异性片段,即IBV 1720bp,AIV 1050bp,ILTV647bp,NDV310bp,MS207bp,对人工感染鸡临床样品检测结果证明,该方法可用于临床诊断。 相似文献
3.
4.
应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,以随机引物单条或成对组合的方式对9株禽巴氏杆菌(PM)广西分离株和3个参考株的DNA进行了多态性分析。结果显示,在选用的20个引物中,有4对引物(4条引物成对组合)扩增的条带为1~16条,其长度在90~2600bp。相似指数分析显示,PM广西分离株GX2与GX4的相似指数最高,为0.97;GX7与B26T1200的相似指数最低,为0.21,C48—1标准强毒株与PM广西分离株间的相似指数为0.33~0.64。表明广西当地的流行株呈现多样性,与PM标准强毒株存在差异。 相似文献
5.
6.
7.
根据GenBank登陆的新城疫病毒L基因序列,设计了3对引物(L1和L2、L3和L4、L5和L6)。用RT-PCR技术对3株新城疫病毒广西分离GX7/02、GX9/03、GX11/03的L基因进行了分段扩增和克隆,并对克隆出来的3个片段进行序列测定,用DNAstar软件比较分析后进行拼接,得到长约为6.8 kb、包含有L基因全长的核苷酸序列。L基因的RNA全长为6 704 bp,拥有一个6 615 bp的开放阅读框,推导其编码的氨基酸数为2 204个。氨基酸同源性分析表明广西分离株之间同源性为98.6%~98.7%;与ZJ1株同源性为98.8%~98.9%;与La-Sota、B1、F48E9、HB92同源性为92.0%~94.2%。 相似文献
8.
从广西各地患禽巴氏杆菌病急性死亡的鸡、鸭肝脏分离出56株禽巴氏杆菌强毒株,经培养特性和生化特性试验鉴定,从中选出15株典型禽巴氏杆菌菌株。Carter荚膜抗原分型鉴定,15株菌均为荚膜A型,间接血凝滴度为1∶160~1∶640。通过毒力和免疫原性测定,从中选择毒力较强、免疫原性较好的B25、B26、B273菌株进行人工致弱,其中B26菌株在0.1%裂解全血马丁汤中,通过物理诱变方法致弱,即在传代过程中,把培养温度由37℃逐渐提高到45℃,每12h传1代而成功致弱,传至1200代时,毒力显著减弱,且仍保持其良好的免疫原性和培养特性,从而获得了禽巴氏杆菌B26-T1200弱毒菌株 相似文献
9.
对虾WSSV和IHHNV多重PCR检测试剂盒的研究与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
在对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)二温式PCR检测技术前期研究的基础上,将这2种病原的特异性引物与PCR基础反应液一起组装成快速检测试剂盒。通过对试剂盒敏感性、稳定性和保存期等技术指标的测定以及对临床样品的检测试验,该试剂盒对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板均能特异性地扩增出2条与实验设计相符的593 bp(WSSV)和356 bp(IHHNV)的DNA片段,而对其它对虾病原的扩增结果均为阴性;该试剂盒最低能检测到102pg的WSSV DNA和10 pg的IHHNV DNA。对WSSV和IHHNV DNA的检出量分别为102~103pg和10~102pg。 相似文献
10.
分别针对桃拉综合征病毒(TSV)基因、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因,设计了2对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测TSV和IHHNV的二温式多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该技术只对TSVRNA和IHHNVDNA进行扩增,分别得到1条231bp的TSV特异性cDNA扩增片段和1条356bp的IHHNV特异性DNA扩增片段,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性,该技术最低能同时检测到10pg的TSVRNA和IHHNVDNA,具有高度的特异性和敏感性.临床应用试验证明,该技术可以用于对虾养殖业中TSV和IHHNV的快速检测和鉴别诊断. 相似文献