牛流行热病毒灭活疫苗免疫后牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究     

金红  李媛  宋晓华  孟庆文  吴东来  于康震  刘保全  严隽端 《中国预防兽医学报》2002,24(6):449-452

对牛流行热病毒灭活疫苗免疫并攻每后，牛外周血淋巴细胞亚类的变化进行了研究。结果表明，灭活苗免疫后，牛的CD4^ 显著升高，可能与参与辅助B淋巴细胞合成抗体有关，攻毒后，γδT细胞均显著上升，免疫组在攻毒后3周仍保持在相当的高水平，IL－2Rα阳性细胞在攻毒后高热期也有显著升高，而CD8^ 细胞没有明显变化。  相似文献   

应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭海龙  童光志  仇华吉  周艳君  兰文生  王云峰  吴东来 《兽医大学学报》2003,23(3):278-280

运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段，经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段，将余下的2个较大片段连接，并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物，从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体，重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定，验证无误后作为竞争性模板内对照，一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR，产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD)，经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴，取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴，绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明，本方法操作简单，结果可靠，稳定性高，适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。  相似文献   

赤羽病微量病毒中和试验诊断方法的研究   总被引：6，自引：1，他引：5  

刘焕章  李树清  吴东来  李健  陈健康  王巧金  陆晓东  胡永强 《中国预防兽医学报》2001,23(1):53-55

应用引自日本的赤羽病病毒，制备了微量病毒中和试验抗原和高免阳性血清，建立了赤羽病微量病毒中和试验诊断方法，应用此方法对广东省７２４头牛血清进行了检查，阳性率为３５．３％，对上海６６５头牛血清作了检查，阳性率为６７．７％，说明这些地区曾流行过赤羽病，同时对澳大利亚当地牛１０８头进行检查，阳性率为５５．５％，与外报道一致。对澳大利亚、加拿大，美国进口牛１７３头的检查结果，全部阴性，对澳大利亚进口羊９９２头的检查结果，发现阳性１头，已得到澳方认可。  相似文献   

羟基蛋氨酸锌对断奶仔猪镉损伤的修复作用     

刘粉粉  倪姮佳  黄攀  吴信  张彬  张维军  姚亚军  印遇龙 《畜牧兽医学报》2018,(2)

旨在探讨日粮添加羟基蛋氨酸锌(Methionine hydroxy analog chelated zinc,MHZn)对镉(Cadmium,Cd)引起断奶仔猪脏器损伤的修复作用。本研究选用24头45日龄的二元阉公猪(长×大,体重(13.22±1.36)kg)。随机分为4个处理组:对照组(Con组)、含镉日粮(30mg·kg~(-1),Cd组)组、镉(30mg·kg~(-1))+低浓度羟基蛋氨酸锌(100mg·kg~(-1))日粮(LMHZn组)组、镉(30 mg·kg~(-1))+高浓度羟基蛋氨酸锌(200 mg·kg~(-1))日粮(HMHZn组)组。每组6个重复,每个重复1头猪,代谢笼单栏饲喂,试验期30d。第31天清晨对仔猪进行前腔静脉采血,空腹称重、屠宰、采样,称量肝、脾、肾重量,计算仔猪平均日增重、日采食量、料重比、脏器系数;制作肝、肾、十二指肠、空肠、回肠组织切片;检测肝、肾中Cd和微量元素含量;测定血浆生化指标。结果显示:1)与Con组相比,Cd组仔猪的平均日增重显著降低,料重比显著升高(P0.05);十二指肠和空肠肠绒毛长度显著降低(P0.05),十二指肠、空肠的隐窝深度显著加深(P0.05),十二指肠、空肠绒毛长度/隐窝深度比显著降低(P0.05);导致肝、肾细胞损伤、变性;肝、肾中的镉含量显著升高(P0.05);血浆白蛋白含量显著降低(P0.05)。2)当含镉日粮中添加MHZn时,与Cd组相比,仔猪日增重显著升高(P0.05),料重比显著降低(P0.05),并且LMHZn和HMHZn组与Con组无显著差异(P0.05);提高十二指肠和空肠绒毛长度(P0.05),减少仔猪小肠绒毛损伤;HMHZn组肝脏系数显著降低(P0.05),并接近Con组水平,表明MHZn可有效缓解镉导致的肝肿大。并且,MHZn可有效缓解镉引起的肝细胞颗粒变性和脂肪变性,减少肾小管上皮细胞的变性和损伤,减少淋巴细胞的增生。MHZn(200mg·kg~(-1))可显著减少镉在肝、肾中的蓄积(P0.05),减少镉对血浆白蛋白和总蛋白的影响,表明MHZn对缓解肝、肾、消化道镉损伤有一定的修复作用。综上所述,MHZn有助于缓解并修复镉对小肠、肝、肾的损伤。  相似文献   

杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

王喜军  胡森  王清华  邓国华  王笑梅  吴东来  申之义  步志高 《中国预防兽医学报》2005,27(6):549-552

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS).SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染圆昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性.以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性.结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础.  相似文献   

赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立     

徐树兰李少英  辛九庆尹训南孟庆文  吴东来 《中国兽医科技》2006,36(11):868-875

以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原，建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法，初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化，确定最佳抗原包被量为每孔1μg（100μL），样品稀释度为1：100，兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1：8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测，以中和试验为参照，经统计学处理，得出检测临界值分别为0．411和0．303，2种方法的符合率分别为72．7％（56／77）和91．4％（85／93）。试剂盒在37℃保存3d，对敏感性无明显影响。  相似文献   

断奶仔猪猪舍的设计和实用化管理     

曹文斌  李文全  张维军  王文魁 《吉林畜牧兽医》2006,27(5):27-30

随着养殖业规模化集约化生产的发展,断奶仔猪猪舍的设计与推广越来越受到人们的重视。本文就断奶仔猪猪舍的设计和实用化管理的发展过程,实际存在的问题做了详细的分析,并给出了相应的策略。  相似文献   

马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

白宇童铁钢  刘光亮肖一红 王群徐树兰  张维军吴东来 《中国预防兽医学报》2007,29(11):878-882

采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞（PBMC）中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素（Equine interferon-γ，EIFN-γ）基因，将其克隆至载体pCR2．1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒（pCR-EIFN-γ）中扩增马干扰素成熟蛋白（MatureEIFN-γ，mEIFN-γ）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定，将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明，mEIFN-γ基因全长为441b口，含一个开放阅读框，编码146个氨基酸的成熟蛋白；对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，重组蛋白相对分子量约为18Ku，且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下，采用Ni^＋亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体，为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。  相似文献   

禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

李贺  孟庆文  冉多良  于康震  陈化兰  李永强  吴东来 《中国预防兽医学报》2006,28(3):294-297

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV／Restock／1／34（H7N1）1．7kbHA基因的cDNA，将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis，筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA，测序正确后与线性化的杆状病毒DNA（Bac-N-Blue^TMDNA）共转染sf9昆虫细胞，挑取蓝色蚀斑，经三轮蚀斑纯化，获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA，经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中，血凝实验、SDS-PAGE和Western blot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。  相似文献   

马白细胞介素18成熟蛋白(mEIL-18)基因在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化   总被引：2，自引：0，他引：2  

童铁钢  刘光亮  白宇  肖一红  王群  李少英  孟庆文  吴东来 《畜牧兽医学报》2007,38(3):307-312

用RT—PCR从经ConA刺激的马外周血单个核细胞（PBMC）中扩增出马白细胞介素18（Equine interleukin-18，EIL-18）前体蛋白（precursor EIL-18，pEIL-18）基因的cDNA，然后克隆至载体pCR2．1-TOPO中，鉴定并命名为pCR2．1-pEIL-18。自pCR2．1-pEIL-18中扩增马白细胞介素18成熟蛋白（mature EIL-18，mEIL-18）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）中。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并纯化其表达产物。结果表明，mEIL-18基因全长474bp，含1个开放阅读框，编码157个氨基酸的成熟蛋白；表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，经SDS-PAGE和Western—blot分析，重组蛋白相对分子量约为20ku，且具有免疫生物学活性。mEIL-18基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下采用Ni^＋亲和层析纯化方法获得了高纯度的重组mEIL-18，为探究马白细胞介素18的生物学活性及其应用奠定了基础。  相似文献