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维氏气单胞菌菌影疫苗的构建及其溶菌动力学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
细菌菌影(Bacterial ghosts)是通过诱导PhiX 174噬菌体中裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达所获得的无细胞内容物的空细菌体.它保持了与活菌相同的膜蛋白成分、天然结构、细胞表面抗原等特性,是一种新型的死菌疫苗.为优化维氏气单胞菌(A.veronii)菌影制备条件,本实验将带有庆大抗性的裂解基因E转入A.veroniiATCC35624株中,通过温度变化对其进行溶菌动力学试验,每隔30 min对菌液OD600nm及其活菌数进行测定,当OD600nm稳定不再下降时,通过扫描电镜观察裂解后菌体的形态变化.结果显示,在诱导30 min后OD600nm值开始持续下降,当其下降到最低值时,活菌检测结果表明几乎无活菌存在.本研究利用菌影形成机制构建A.veronii菌影,为新型疫苗的制备提供依据. 相似文献
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利用PCR方法检测锦鲤疱疹病毒3个主要靶基因 总被引:1,自引:1,他引:0
为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和ORF7基因进行PCR检测.通过优化后的反应体系进行特异性、敏感性试验和样品检测.结果表明:3对引物能够分别特异性扩增出409bp、292 bp和484bp片段;敏感性试验表明对TK基因检测的敏感性高于Sph和ORF7基因,其最低检测量为1.9×106copies/μL;采用优化的3个PCR方法对8个有临床症状的样品进行检测,其中3份样品的3个基因PCR扩增结果均为阳性.因此,本研究选取的3个基因均可用于KHV的检测及确证实验. 相似文献
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鹅源H5N1亚型禽流感病毒株HA基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:3,他引:0
本研究对1株鹅源H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行了扩增、克隆及序列测定。结果表明:所扩增的片段长1707bp,包含完整的开放阅读框架,编码568个氨基酸。该毒株裂解位点的氨基酸序列为RRRKKR,具有高致病性的分子特征;该毒株有6个潜在糖基化位点;受体结合位点的氨基酸分别为YWIHELY,其左侧壁氨基酸为SGVSSA,右侧壁为NGQSGR。该毒株与国内外一些参考毒株的HA基因序列比较,核苷酸同源率为76.8%~98.1%,氨基酸同源率为85.7%~97.4%,属于欧亚种系。 相似文献
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为建立快速检测框镜鲤致病性维氏气单胞菌(A.veronii)双重PCR方法,本研究以A.veronii CY0806株和国际标准株DNA为模板,分别以16S rRNA和Aer基因特异性引物进行PCR扩增,分别获得大小约880 bp和430 bp的DNA片段。通过序列比对分析,16S rRNA基因片段、Aer片段序列与GenBank中登录的A.veronii ATCC35624株的的同源性均为99%。进一步试验显示该方法的敏感性较高,达到1.58×10-3ng/μL,特异性较强,只有A.veronii标准株及分离株结果呈阳性;人工模拟污染样本试验显示:该方法的检出率达到了86.7%,高于细菌分离培养的70%检出率。双重PCR检测方法的建立,为框镜鲤致病性A.veronii的检测提供新的方法。 相似文献
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自1982年细菌活的非可培养状态(Viable but nonculturable,VBNC)发现以来,人们就已逐渐明确和认识到由这些无法培养但却仍然存活的非可培养微生物所导致的公共卫生危害[1-2].细菌VBNC独特的生物学特征已经让人们意识到,在仍以培养技术为主要检出手段的情况下,一旦病原菌进入VBNC状态,便可保留毒力和致病性,极易成为逃避监测的隐性传染源,而造成漏检[3-4].目前,细菌VBNC状态形成机制尚不完全清楚,对其形成机理研究(即揭示环境因素对基因表达的调控机制)和实际(检测VBNC病原)意义已逐渐受到关注并成为研究的热点. 相似文献
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