山羊甲状腺球蛋白的分离,纯化及抗血清制备     

陈创夫 《塔里木大学学报》1989,(2):44-49

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转基因植物生产疫苗的研究现状及前景     

包慧芳  陈创夫  任雪艳  王彦芹 《畜牧兽医科技信息》2005,(1):9-10

随着转基因植物技术的日益成熟，植物体正成为具有重要经济价值的药用蛋白、抗体和疫苗的生物反应器，利用转基因植物生产，这种“分子药厂”的潜势在几年以前就已显露出来，并且已有几种用此系统生产的蛋白质正在进行临床试验。  相似文献   

绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S RPS11基因的克隆、表达及重组蛋白免疫原性研究          下载免费PDF全文

田路路  孟庆玲  乔军  才学鹏  陈创夫 《家畜生态学报》2017,38(5):64-69

本研究以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)新疆流行株基因组DNA为模板,通过PCR扩增30S RPS11基因,对其进行分子特征性分析,并将其抗原表位集中区进行原核表达,分析重组蛋白免疫原性。结果表明,30S RPS11基因全长405bp,编码134个氨基酸,该蛋白是一种受磷酸化调控的蛋白,含有一个核糖体蛋白S11信号。SDSPAGE结果显示,筛选的抗原表位集中区重组蛋白分子质量为29kDa;Western blot分析显示,该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别,说明其具有良好的反应原性;小鼠免疫试验表明,重组蛋白诱导机体产生的间接血凝抗体效价可达1∶32~1∶64,表明其具有较强的免疫原性。本试验首次证实MO核糖体蛋白(30SRPS11)具有良好的免疫原性和反应原性,为MO血清学诊断及亚单位疫苗研发提供了科学依据。  相似文献   

淋巴细胞活化基因-3蛋白表达与生物信息学分析     

吴鹏  尹欣悦  陈创夫 《黑龙江畜牧兽医》2019,(17)

为了研究淋巴细胞活化基因-3蛋白的生物学特性,试验采用PCR方法扩增淋巴细胞活化基因-3胞外区序列,构建重组质粒,将重组质粒转染至HEK293感受态细胞中表达目的蛋白,并对目的蛋白进行SDS-PAGE及Western-blot检测,通过ProtParam软件分析淋巴细胞活化基因-3蛋白性质,通过SWISS-MODEL软件预测蛋白质结构。结果表明:PCR法成功扩增出目的条带,大小约为1 430 bp,1. 0%琼脂糖凝胶电泳显示酶切成功;经10%SDS-PAGE凝胶电泳分析,在68 ku处出现目的条带,目的蛋白成功表达;纯化后的蛋白质经Western-blot检测证明具有特异性;目的蛋白具有22种可能的折叠形态,理论等电点pI值为9. 08,蛋白质结构不稳定,亲水性较差。说明试验成功表达了淋巴细胞活化基因-3蛋白。  相似文献   

中国荷斯坦奶牛IL-18基因的克隆与真核表达研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

乔军  孟庆玲  陈创夫  才学鹏  刘佳旭  任艳  张辉 《江苏农业科学》2009,(4)

为了克隆并表达中国荷斯坦奶牛白介素18(interleukin,IL-18)基因,用牛白介素18基因特异性引物对刀豆蛋白(ConA)刺激后荷斯坦奶牛外周血单核细胞(PBMCb)总RNA进行RT-PCR扩增,并将扩增产物纯化后克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,将目的基因亚克隆到真核表达载体pGFP-C1中,构建了重组质粒pGFP-IL-18,转染BHK-21细胞,检测目的基因是否表达.结果:该基因全长582 bp,编码193个氨基酸,与羊、犬和猪IL-18基因相比,核苷酸序列有较高的同源性,但与小鼠和鸡IL-18基因相比有明显的种属差异,转染48 h后,可在转染细胞胞浆中检测到黄绿色的荧光,表明已成功克隆了中国荷斯坦奶牛IL-18基因,并实现了该基因在真核细胞中的表达.  相似文献   

患隐性乳房炎的奶牛乳汁pH变化与体细胞关系的研究   总被引：5，自引：1，他引：5  

刘文进  陈创夫  滕文军  王琦  詹勇华 《中国畜牧兽医》2005,32(3):19-22

采集新疆垦区奶牛乳样若干份(604份)，利用奶牛隐性乳房炎诊断液、光学显微镜，以及pH211酸度计测定乳汁的pH与体细胞的含量，确定奶牛隐性乳房炎与牛乳pH的变化关系。结果表明，牛乳pH的变化与体细胞和炎性细胞的含量呈正相关，即泌乳奶牛乳汁的正常pH在6．4～6．6之间；体细胞在20万～50万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在6．6～6．8之间；体细胞在50万～150万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在6．8～7．0之间；体细胞在150万～500万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在7．0～7．2之间；体细胞大于500万个／ml时，奶牛乳汁pH在7．2以上。  相似文献   

犬瘟热的诊治     

陈创夫  徐国红 《畜牧与兽医》1998,(1)

犬瘟热的诊治陈创夫徐国红（塔里木农垦大学动物科学系新疆阿拉尔８４３３００）近几年阿拉尔地区犬的发病率较高，通过临床观察、病理剖检及免疫组织化学诊断为犬瘟热。经过治疗、预防免疫注射，控制了本病的流行。现报告如下。１临床症状病犬体温达４０～４１０℃，持...  相似文献   

布鲁氏菌DnaJ蛋白的表达及功能分析     

印双红  张俊波  李寅翠  张孟琴  毛宏  易萌  蔡春连  张红  李志强  陈创夫 《中国兽医杂志》2022,(1):10-15+26

本试验旨在运用分子生物学与生物信息学方法对布鲁氏菌DnaJ蛋白进行分析;将该蛋白进行原核表达,并检验纯化蛋白在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应的能力。以布鲁氏菌M5-90为模板成功扩增目的基因DnaJ,构建重组表达载体pET-30a-DnaJ;利用SDS-PAGE检测DnaJ重组蛋白在大肠杆菌中的表达,并对其进行纯化;用DnaJ蛋白刺激RAW 264.7细胞和小鼠脾细胞,并用DnaJ蛋白免疫小鼠;利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-4及小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体水平的变化。结果显示,DnaJ蛋白二级结构以无规则卷曲结构为主,该蛋白有11个抗原决定簇;SDS-PAGE结果显示,重组菌在37.7 kDa大小的位置有特异表达条带,获得了DnaJ纯化蛋白;DnaJ蛋白可诱导宿主细胞和小鼠产生高水平IFN-γ、IL-4、IgG1和IgG2a抗体。鉴于DnaJ蛋白可在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应,有望成为布鲁氏菌病的候选亚单位疫苗。  相似文献   

STAT6介导的巨噬细胞极化对布鲁氏菌胞内存活的影响     

席静  王月丽  邓肖玉  杨琴  李培东  张江伟  孙天浩  朱良全  易继海  陈创夫 《畜牧兽医学报》2022,53(1):263-271

旨在探讨STAT6介导的巨噬细胞极化对布鲁氏菌胞内生存的影响。本研究采用布鲁氏菌光滑株S2308（S2308）和粗糙型疫苗株RB51（RB51）侵染巨噬细胞。利用qRT-PCR检测M1型巨噬细胞标志因子p65、NOS2和IL-1β,M2型巨噬细胞标志因子STAT6、ARG1、IL-10的mRNA表达水平;流式细胞术检测M1型标记分子CD86和M2型标记分子CD206的表达;Western blot检测p-STAT6蛋白及抑制剂AS对蛋白的抑制作用;ELISA检测M1型细胞因子TNF-α、IL-12和M2型细胞因子IL-4、IL-10的表达量;最后对胞内菌落进行CFU计数。qRT-PCR结果显示,在感染8、12 h时可显著诱导M1型因子mRNA转录表达,72 h时低表达,而M2型因子在72 h时高表达;流式细胞术结果显示,S2308感染12 h可显著诱导CD86的表达,感染72 h可显著诱导CD206的表达,但RB51对二者无影响;Western blot结果显示,S2308菌株在感染72 h时激活STAT6信号通路,而RB51几乎不激活该通路,抑制剂AS在2 μmol·L^-1浓度时抑制效果最佳;ELISA结果显示,AS抑制剂可显著抑制IL-4、IL-10的释放,并促进TNF-α、IL-12的释放;CFU计数结果显示,S2308组的胞内菌呈先降低后显著上升趋势,加入AS抑制剂后可显著抑制布鲁氏菌胞内复制。布鲁氏菌S2308在感染后期能够通过STAT6诱导M1型巨噬细胞向M2型转化,并促进Th2型细胞因子的释放,从而有利于布鲁氏菌的胞内生存。而RB51几乎不激活该通路,不影响胞内生存。  相似文献   

牛布鲁菌侵染对HPT-8细胞p38基因转录水平的影响     

韩玉霞  王震  张倩  孙志华  刘娟  张辉  陈创夫 《动物医学进展》2015,(4):1-6

探讨布鲁菌侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8)过程中对p38基因转录的影响。用牛布鲁菌2308和RB51株分别侵染HPT-8细胞,在不同侵染时间点(0、4、8、12、48h)收集细胞,提取总RNA,反转录获得cDNA;构建p38α、p38β和内参基因GAPDH的克隆质粒,并绘制3种基因扩增的标准曲线;RT-qPCR检测p38α和p38β基因的转录表达。结果显示,获得了HPT-8细胞侵染前后的cDNA,构建了pMD18-T-p38α/p38β/GAPDH克隆质粒,绘制了标准曲线。RT-qPCR结果显示,布鲁菌2308和RB51侵染滋养层细胞后(4、8、12、48h),p38α和p38β的相对表达量比0h均明显下降,差异极显著(P0.01),布鲁菌RB51株和2308株也存在一定差异。结果表明,在布鲁菌侵染HPT-8细胞的过程中,p38 MAPK信号通路被下调,提示p38 MAPK信号通路参与了对细胞生物学效应的调控,且这种调控作用与菌株的毒力强弱存在密切联系。  相似文献