牛分支杆菌CFP-10的原核表达及其在牛结核病诊断中的应用     

李超然  别克·吐尔逊  蔡宏  朱玉贤 《动物医学进展》2007,28(8):21-26

低分子质量的蛋白抗原CFP-10是一种重要的牛分支杆菌早期分泌蛋白.为了检测该蛋白和其他几种抗原在牛结核病诊断中的临床应用,对CFP-10的基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达.PCR法扩增cfp-10基因片段,连接到pET-22b( )原核表达载体中,再转入表达宿主E.coli BL21(DE3)PlysS菌株内,用IPTG诱导,进行蛋白表达、纯化.分别以CFP-10、ESAT-6、MPT83、MPT70、牛PPD、CFP-10与ESAT-6混合蛋白,MPT83与MPT70混合蛋白为抗原,用间接ELISA法诊断牛结核病.结果表明,以CFP-10与ESAT-6混合蛋白作为抗原检测牛结核病的特异性和敏感性分别达到了100%和63.6%,均超过了其他单抗原或抗原组合,为以筛选合适抗原为基础的血清学诊断技术提供了有力的支持并创造了良好的应用前景.  相似文献   

贵州省黎平县地表覆被变化引起的生态系统碳储量变化   总被引：2，自引：0，他引：2  

李义平  蔡宏  田鹏举  张蓓蓓  廖书冰 《水土保持通报》2020,40(2):92-99

[目的]对贵州省黎平县地表覆被变化引起的生态系统碳储量变化进行评估,为区域碳源和碳汇管理及"大生态"发展目标提供科学依据。[方法]基于黎平县2005,2010和2015年3期土地利用数据,结合CA-Markov模型和InVEST模型碳储量模块,在对土地利用变化趋势进行分析的基础上定量评估了研究区2005—2025年生态系统固碳能力。[结果]①2005—2015年,黎平县耕地、林地、未利用地呈减少趋势,草地、建设用地、水域呈增加趋势。②2015—2025年土地利用整体变化趋势与2005—2015年一致但幅度增大。耕地由2005—2015年的降幅2.37%到2015—2025年的增幅4.21%,整体趋势发生转变;③2015年黎平县生态系统总碳储量和平均碳密度分别为9.12×10~7 t和206.61 t/hm~2。自2005年以来分别下降2.00×10~5 t和0.45 t/hm~2。2025年黎平县碳储量和平均碳密度分别为8.98×10~7 t和203.44 t/hm~2。[结论]黎平县生态系统固碳能力呈减弱趋势,林地的大面积转出和建设用地的扩张是碳储量下降的直接原因,未来应加强对土地利用结构的优化。  相似文献   

苹果对土施~(10)B的吸收、分配与利用   总被引：9，自引：0，他引：9  

刘晓红  刘琼英  邝炎华  蔡宏  余海虎 《核农学报》1998,12(1):0-0

采用同位素示踪技术研究了＾１２５Ｉ在模拟水稻田中的吸收和分配。结果表明,水稻能吸收＾１２５Ｉ,并可将吸收到的一半以上转运至地上部;水稻各部分＾１２５Ｉ的比活度大小顺序为根〉茎〉叶〉谷粒,谷粒中＾１２５Ｉ的积累量最低,约占全株的０．１８％;田表水及表土中＾１２５Ｉ的比活度随时间而下降,到第６０天田表水中＾１２５Ｉ的比活度下降到只占引入量的０．１９％;在收获期,水稻各部位中＾１２５Ｉ的比活度大小次序表  相似文献   

牛结核分枝杆菌特异性核酸探针的克隆与分析   总被引：7，自引：0，他引：7  

蔡宏  陈东 《中国畜禽传染病》1996,(6):13-16

牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源，其染色体ＤＮＡ中含有插入序列ＩＳ１０８１，属于结核杆菌类特异性基因片段，在牛结核杆菌染色体中含有６个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分枝杆菌染色体Ｄ避的特民插入片段即ＩＳ１０８１为模闰于ＩＳ１０８１中４３８－４５９和６６４－６８５碱基 的两个片段为引物。利用ＰＣＲ技术扩增出一段２４８ｂｐ的特异性片段，将其克隆进ｐＵ  相似文献   

结核分支杆菌HSP65 DNA疫苗的制备和重组蛋白的原核表达     

赵博  蔡宏  于大海  朱玉贤 《动物医学进展》2005,26(1):62-65

结核分支杆菌分子量为65ku的热应激蛋白(HSP65)是一种非常重要的抗原，为了研制结核病核酸疫苗，构建编码HSP65DNA，并将其分别克隆到原核和真核载体中进行了表达。以标准结核分支杆菌H37Rv基因组DNA为模板，用PCR法扩增出HSP65基因，经限制性内切酶消化后，插入真核表达栽体pJW4303中，获得重组质粒pJW-HSP65。同时将HSP65基因插入原核表达栽体pET-22b( )，获得重组质粒pET22b-HSP65。将pET22b-HSP65重组质粒转化大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)／PolysS，用IPTG诱导，进行蛋白表达。结果表明，经酶切鉴定和序列测定证实插入片断为目的基因HSP65，构建成功了真核重组质粒pJW-HSP65即可作为结核病DNA疫苗。经SDS-PAGE检验证明可以在大肠杆菌细胞中高效表达，将表达蛋白进行纯化，作为保护性结核杆菌抗原以便检测HSP65DNA疫苗的免疫效果。  相似文献   

成林油茶丰产培育技术     

蔡宏 《现代农业科技》2005,(10):26-26

1冬春深挖垦复深度垦复可以疏松土壤,提高肥力,蓄积水分,减少病虫害,促根伸展,增加产量。对于地势平坦、坡度在15度以下的荒芜油茶林实行全垦;对于坡度15度以上,林相对比较整齐的地方实行带垦;坡度在30度以上或土质带砂性的地方实行穴垦,避免垦复造成水土流失。2夏季中耕浅锄夏  相似文献   

颗粒型复合酸化剂-康乐酸加工性能与饲养效果   总被引：1，自引：0，他引：1  

胡文锋  蔡宏  单羿  陈国寿  李加琪 《饲料研究》2003,(5):4-5

在饲料中添加康乐酸这种颗粒型复合酸化剂，由于其良好的流散性及抗吸潮性能，添加到饲料中其混合均匀度比柠檬酸高。另一方面，添加康乐酸的饲料制粒效果比其他酸化剂优，在3．0mm环模下也能顺利制粒，相比之下添加柠檬酸的饲料在3．0mm环模制粒出现严重堵塞，加大了能耗，增加了饲料成本。添加康乐酸比添加柠檬酸仔猪日增重分别提高了6．5％和8．2％，料肉比平均下降3．1％。经济效益的分析结果表明：添加康乐酸比添加柠檬酸饲料成本降低45元／t;仔猪增重成本节省0．22元/kg。  相似文献   

人结核病病原菌型的PCR指印分析     

呼西旦  蔡宏  李淑霞  张玲  李君莲  许苗 《西北农业学报》2000,9(2):11-14

以结核分枝杆菌特异插入序列ＩＳ６１１０两端序列为模板,设计一对外向ＰＣＲ引物进行ＰＣＲ扩增,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术,该试验的基础是利用ＩＳ６１１０在结核分枝杆菌染色体ＤＮＡ中反复重复且ＩＳ６１１０序列之间相距较近,经ＰＣＲ扩增呈现多条带型构成ＤＮＡ指印。采用ＰＣＲ指印技术,对人结核病患者痰标本中的结核分枝杆菌进行分型,５７份痰标本呈现７种ＰＣＲ指印。该ＰＣＲ分型技术对结核  相似文献   

利用TB_PCR试剂盒对牛结核病的检测   总被引：5，自引：0，他引：5  

蔡宏  呼西旦  李淑霞 《中国预防兽医学报》2000,22(6):447-450

应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术制备的ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对来自新疆６个牛场的２３８份血样、奶样、口腔分泌物标本中结核分枝杆菌进行检测,结果显示：ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对４０份奶样样本进行检测,７头为阳性,阳性检出率１７．５％。ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对１７８份血样标本的检测,２３头牛为阳性,阳性检出率为１２．９２％。ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对２０份口腔分泌物标本中结核分歧杆菌检测结果均为阴性。本试验中共计检测６个牛场的２３８份不同标本的ＰＣＲ阳性牛共计２７头,阳性检出率为３．０２％。将ＰＣＲ和传统的ＰＰＤ检测方法的结果比较显示ＰＰＤ检出阳性率高于ＰＣＲ,ＰＰＤ检出阳性牛３９头,检出阳性率６．７％。本试验对口腔分泌物标本的检测结果不理想。总之,ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点。为今后牛结核病的检测  相似文献   

牛结核杆菌DNA疫苗的纯化工艺研究及质量鉴定   总被引：1，自引：1，他引：0  

宋振忠  黄炯  徐雪萍  徐志光  张云峰  蔡宏  许礼义  呼西旦 《中国畜牧兽医》2011,38(4):186-190

为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。  相似文献