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克隆山羊Δfosb基因的cDNA片段,分析其基因序列,为进一步研究Δfosb基因在奶山羊钙代谢机制中的作用提供理论依据.无菌采集泌乳期奶山羊乳腺组织样并提取总RNA备用.根据已知其他物种的fosb基因保守性区域设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增奶山羊Δfosb基因的CDS区,测序后进行核苷酸和推导的氨基酸序列分析,并利用保守区序列对9个物种进行聚类分析.结果显示,得到953 bp的Δfosb基因cDNA片段(GenBank登录号: FJ455501).核酸序列分析结果显示,该基因编码240个氨基酸,与人、小鼠和牛的核苷酸序列比对,同源性分别为93.33%、88.19%和98.47%,氨基酸同源性分别为96.68 %、95.83%和99.17%.表明该基因在不同物种间具有高度的保守性.9个物种Δfosb基因的保守区聚类结果显示,羊和牛亲缘关系最近,其次依次为大鼠和小鼠、人和黑猩猩、马、狗、猪. 相似文献
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【目的】利用腺病毒pAdEasy-1表达系统构建含山羊Δfosb基因的重组腺病毒,为在原代细胞中研究该基因的功能奠定基础。【方法】扩增山羊的Δfosb基因,与pAdTrack连接构建pAdTrack-HA-Δfosb。用pAdTrack-HA-Δfosb转化含有pAdEasy-1的BJ5183细胞,同源重组后获得重组腺病毒质粒pAd-HA-Δfosb,用其转染HEK293细胞,包装得到重组腺病毒。对重组腺病毒进行PCR和Western blot鉴定。【结果】酶切鉴定、绿色荧光蛋白观察及PCR均证明,重组腺病毒质粒构建正确;Western blot检测到了Δfosb蛋白的表达。【结论】成功构建获得了可表达Δfosb蛋白的重组腺病毒rAd-HA-Δfosb。 相似文献
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miR-92a对奶山羊乳腺上皮细胞增殖及凋亡的调控分析 总被引：2，自引：1，他引：1
miRNAs是对哺乳动物乳腺组织发育及泌乳机能进行调控的重要因子。本研究依据已有的关中奶山羊乳腺组织miRNA表达谱,选择不同泌乳时期差异表达的miR-92a为研究对象,探究miR-92a对山羊乳腺上皮细胞（GMEC）增殖及凋亡的调控作用,并挖掘其潜在的调控基因。采用荧光定量PCR、MTT检测、EdU检测及流式细胞术,检测miR-92a在不同泌乳时期乳腺组织的表达情况,并在细胞水平检测miR-92a对乳腺上皮细胞增殖、凋亡及细胞周期的调控作用。利用RNA-seq技术,分析过表达miR-92a乳腺上皮细胞中的差异表达基因。qRT-PCR结果显示,miR-92a在奶山羊泌乳初期乳腺组织中表达量极显著高于泌乳中期（P<0.01）,表明miR-92a可能对奶山羊泌乳性状有重要的调控作用。GMEC过表达miR-92a后,试验结果显示：与NC对照组比较,miR-92a过表达组的EdU阳性细胞数极显著减少（P<0.01）,S期的细胞数显著下降、G1期的细胞数显著增加,同时miR-92a组的凋亡细胞数目显著增加（P<0.05）。采用RNA-seq,构建了miR-92a过表达mRNA文库,发现下调基因54个,上调基因160个。GO terms及KEGG通路分析显示差异表达基因调控乳腺上皮细胞多种生物学功能。以上结果表明miR-92a促进GMEC凋亡、抑制其增殖,测序结果进一步证明miR-92a对奶山羊乳腺发育及泌乳性能具有潜在的调控作用。 相似文献
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