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抗鸽IgG单克隆抗体的制备及鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
鸽卵黄经硫酸铵盐析、酒精沉淀及凝胶（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００）柱层析后,得到较纯的鸽ＩｇＧ,以其免疫ＢＡＬ Ｂ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）进行细胞融合,经过酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,得到两株能稳定分泌抗鸽ＩｇＧ的单克隆抗体（以下称单抗）,分别命名为１Ｅ５和４Ｃ２。经亚类鉴定,该类抗均为ＩｇＧ１亚类。在鸽ＩｇＧ包被的９６孔板上用间接用ＥＬＩＳＡ方法测定单抗腹水的ＥＬＩ 相似文献
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为研究人CD46(hCD46)基因启动子的启动特性,研制具有hCD46组织特异性表达特征的转基因小鼠,设计扩增hCD46基因启动子的PCR引物,用HeLa细胞基因组DNA为模板扩增hCD46基因启动子DNA片段,测序结果表明:其序列与GenBank中hCD46完整基因5′端某片段的同源性高达99.9%。用此DNA片段替换表达载体pcD-NA3EGFP中的CMV启动子,且在该片段与EGFP基因之间插入兔β-球蛋白基因的第2内含子RGI。重构的表达载体在2种鼠源细胞CHO和SP2/0中均可启动EGFP表达,表达量与人体内同源组织中hCD46的相似,说明该研究克隆了结构和功能正确的hCD46基因启动子。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒分离株核衣壳基因克隆、序列分析和真核表达 总被引：2，自引：0，他引：2
根据GenBank公开序列自行设计一对引物，采用RT—PCR扩增出鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）W和C9001分离株完整的核衣壳（N）基因，并将其克隆至pMD18-T载体进行核苷酸序列测定和分析。结果表明，扩增的2个IBV分离株核衣壳基因片段长度均为1230bp，编码409个氨基酸，彼此间核苷酸和氨基酸同源性分别为88．0％和89．5％，与GenBank中有代表性的参考毒株相应基因核苷酸和氨基酸序列比较显示，w株核苷酸序列与GenBank中的广东分离株（AY646283）同源性最高，为94．1％，氨基酸序列同源性为94．6％；与国内部分毒株核苷酸序列同源性在86．1％～88．0％之间，氨基酸序列同源性在88．0％～90．7％之间；C9001株与国内部分毒株核苷酸序列同源性在86．4％～99．8％之间，氨基酸序列同源性在88．0％～99．8％之间。从核衣壳基因编码的氨基酸序列的系统进化树可见，W株与C9001株处于不同的进化分枝，亲缘关系较远。同时将核衣壳基因构建于真核表达质粒pVAX1中，用脂质体法将重组质粒转染入COS-7细胞中，间接免疫荧光检测出核衣壳蛋白的体外表达。研究结果为进一步研究IBV核衣壳蛋白的结构与功能以及基因工程疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒S1基因的真核表达及其产物的免疫原性 总被引：4，自引：0，他引：4
采用RT-PCR扩增出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M 41株的全长S1基因,并将其片段连接到pGEM-T载体,经酶切、PCR及序列测定表明,获得的S1基因ORF全长为1 659 bp,与G enB ank上公布的IBV M 41 S1基因序列一致。将S1基因与真核表达质粒pVAX 1连接,构建重组真核表达质粒pVAX 1-S1。将重组质粒转染COS-7细胞,采用间接免疫荧光检测转染细胞S1蛋白的表达。同时以重组质粒免疫小鼠,可诱导产生特异性针对IBV S1蛋白的抗体(P<0.01)。这为鸡传染性支气管炎新型基因工程疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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采用RecAb同源重组系统,将携带Ⅰ-Fb亚型CRISPR-Cas系统的鲍曼不动杆菌临床分离株AB43的csy1基因敲除,观察野生株(AB43)和缺失株(AB43△csy1)的耐药性、生物膜形成以及小鼠致死率等生物学性状变化,并通过转录组测序分析两者间的差异表达基因.与野生株相比,csy1的缺失显著提高突变株的耐药水平和体外形成生物膜的能力,且AB43 △csy1感染组小鼠的存活率与AB43感染组相比显著降低,提示其毒力有所提高.RNA-seq分析结果显示,csy1的缺失能影响细菌与抗生素耐药性、毒力以及代谢相关基因的表达,推测是引起AB43△csy1表型变化的主要原因.结果 提示Csy1蛋白可通过调节自身基因表达抑制鲍曼不动杆菌的耐药性、生物膜形成及致病性.这说明创造有利于维持CRISPR-Cas系统的环境,保证CRISPR-Cas系统阳性菌株处于进化优势地位,使鲍曼不动杆菌保持低毒力和抗生素敏感状态. 相似文献
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采用纸片琼脂扩散法检测扬州地区淋病奈瑟菌临床分离株对常用抗生素的耐药性,并研究耐药基因的定位和转移机制。对耐药菌株YZ1008分别提取染色体DNA和质粒DNA,用PCR技术检测氨苄青霉素抗性基因的定位,含抗性基因的质粒DNA转化大肠埃希菌敏感株,观察大肠埃希菌耐药性的变化。结果表明:淋病奈瑟菌扬州分离株对受试的11种抗生素具有严重的耐药性,氨苄青霉素耐药基因在染色体DNA和质粒DNA上都存在,质粒耐药基因的转移可使大肠埃希菌DH5α获得氨苄青霉素抗性。这为淋病奈瑟菌耐药性防控研究积累有益数据。 相似文献
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通过PCR扩增噬菌体PhiX174裂解基因E,并将其插入到温控表达载体pBV220中,构建重组温控表达质粒pBV220-E。将重组质粒pBV220-E转化至大肠杆菌DH5α中,升温到42℃诱导E基因的表达。将真核表达质粒pEGFP-N1与大肠杆菌菌影孵育后转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,荧光显微镜观察pEGFP-N1的表达情况。结果表明:扩增的E基因全长为276bp,与GenBank公布的基因序列一致。电镜观察结果显示,细菌表面出现跨膜孔道,细菌内容物经孔道排出形成空壳。荧光显微镜观察结果显示,大肠杆菌菌影介导的pEGFP-N1在小鼠巨噬细胞中获得表达。为进一步研究以细菌菌影为基础的新型灭活疫苗和载体疫苗提供参考依据。 相似文献
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