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从梅花鹿的舌黏膜上皮组织中提取RNA,根据已获得的驯鹿β-防御素reBD-1基因序列设计并合成引物,采用RT-PCR技术进行梅花鹿β-防御素siBD-1基因的扩增,将获得的300bp的cDNA进行双向克隆及序列测定分析。结果表明所克隆出的cDNA为梅花鹿β-防御素siBD-1,该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),编码64个氨基酸残基的前原防御素,该前原防御素含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。siBD-1 cDNA的获得为以后更好地研究梅花鹿黏膜防御机制奠定了基础。 相似文献
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为了研究奶牛乳腺防御素基因的表达调控机制,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出LAP基因的核心片段序列,并与NCBI数据库序列比对同源性;进一步扩增其DNA序列中间片段;其后运用反向PCR技术并结合半巢式PCR技术扩增其侧翼的序列。结果表明:序列与NCBI数据库中序列同源性为100%,确认为LAP基因;DNA序列扩增得到1 760 bp的中间序列,并预测了其酶切位点;得到5’侧翼序列107 bp,3’侧翼序列87 bp,经预测发现有转录因子GATA。为进一步研究防御素的防御功能、寻找防御素基因体外表达调控机制以及利用基因工程防治奶牛乳腺炎积累了基本资料。 相似文献
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本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%, BNBD7、TAP为98.5%;实时荧光定量PCR检测6种防御素的mRNA水平的表达,它们之间的表达量都有显著性差异(BNBD4与BNBD5除外),其中LAP表达量最多,BNBD7,EBD,BNBD5,BNBD4次之,TAP的表达量最低。 相似文献
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为了评估当前优势流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）NADC30-like毒株的毒力，试验利用经猪肺泡巨噬细胞分离的5个NADC30-like毒株接种6～7周龄健康易感猪，以进行毒力评价（A-E组），并设立未攻毒阴性对照组（F组）。所有组攻毒后进行临床症状观察，并在第0、3、5、7、10、14和21天采集全血、咽拭子和肛拭子进行病毒载量检测。结果显示，除D组外其他攻毒组表现一过性体温升高，偶有到41℃，而D组在攻毒后第4～15天，该组试验猪平均体温均不低于40.5℃，体温显著高于其他攻毒组。病毒血症检测发现，除D组外，其他攻毒组在第3、5、7和10天均为核酸阳性，在第14天部分转为核酸阴性，但到第21天又转为阳性，而D组从攻毒到结束病毒血症始终为阳性。肛拭子和咽拭子病毒载量测定发现，除D组外，其他攻毒组在第3、5和7天均为核酸阳性，在第10、14和21天部分猪有时转为阴性，后又转为阳性；D组攻毒到结束肛拭子始终为阳性。从上述数据统计综合分析，结果表明D组所攻击的毒株毒力高于其他毒株，可引起3/5猪发病，且死亡一头，该毒株感染能产生PRRSV的典型临床症状，可初步用于NADC30-... 相似文献
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