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【目的】 研究牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）E0和E2串联基因重组腺病毒作为基因工程疫苗的应用潜力。【方法】 采用PCR扩增、E0-E2基因融合并构建重组穿梭质粒pDC316-E0-E2,将其与AdMax腺病毒系统的骨架质粒共转染HEK293T细胞包装成重组腺病毒,通过Western blotting进行验证,并通过Reed-Muench法测定病毒滴度,通过肌内、皮下免疫接种小鼠后用ELISA方法及流式细胞检测进行免疫效果试验。【结果】 成功扩增到E0、E2基因目的片段,大小分别为681和1 122 bp,得到了完整的腺病毒Ad5-E0-E2;测定其滴度为1.1×1010 PFU/mL;Western blotting检测结果显示,Ad5-E0-E2外源基因在HEK293T细胞中表达,得到了与预期相符的目的条带（65 ku）;ELISA检测结果表明,通过肌内和皮下注射Ad5-E0-E2均能产生较高的抗体水平;流式细胞检测显示首免、二免后肌内和皮下注射Ad5-E0-E2组CD4＋、CD4＋/CD8＋比值均极显著高于PBS对照组（P<0.01）。【结论】 本试验成功构建重组腺病毒Ad5-E0-E2,且具有较好的反应原性和免疫原性,能诱导机体产生针对BVDV的特异性抗体。 相似文献
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细菌的Ⅲ型分泌系统(T3SS)与毒力密切相关。为探究鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和伴侣蛋白Hfq对T3SS相关基因spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK的调控,利用Red同源重组技术构建了上述基因与lacZ的融合菌株,在此基础上利用P22噬菌体转导技术分别构建上述融合菌株与gcvB、hfq的单缺失菌株,通过qPCR和β-半乳糖苷酶试验分别检测gcvB、hfq缺失后各基因的转录水平和蛋白水平的变化。结果显示：与标准菌株相比,gcvB缺失后,spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调;prgJ、prgK的转录水平上调,蛋白水平下调。hfq缺失后,spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调,prgH、prgI、prgJ、prgK的蛋白水平下调。表明Hfq和GcvB均可对spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK进行调控。上述结果可为鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和Hfq的作用机理研究提供参考。 相似文献
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为了调查近几年贵州地区猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株的遗传变异趋势,为猪圆环病毒病的有效控制提供参考,利用实验室所建立的多重PCR对贵州不同地区送检的病死仔猪及采集的血样进行检测,并对PCV2核酸进行全基因的扩增,应用生物学软件对PCV2全基因序列进行核苷酸同源性和遗传进化分析。结果:从PCV2检测为阳性的病料中成功扩增出8条PCV2全基因序列,均属于PCV2d基因型。结果表明:近年来贵州地区猪群PCV2d基因型的感染病例增多。研究结果为贵州PCV2疫苗毒株提供了选择依据。 相似文献
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为研究发酵酒糟对西威牛免疫指标、炎症指标以及十二指肠细菌群落的影响,试验将18头西威公牛随机分为3组,对照组饲喂基础饲粮,试验1、2组分别添加15%、30%发酵酒糟,预试期15 d,正试期90 d。结果表明：与对照组相比,试验1组免疫球蛋白G (IgG)、分泌型免疫球蛋白A (SIgA)、Muribaculaceae分别显著提高了18.83%、27.99%、25.77%(P <0.05),试验1组疣微菌科UCG-010极显著降低了10.43%(P <0.01),试验2组白介素2、白介素4、白介素6、CD8、免疫球蛋白A、变形菌门、放线菌门、纤维杆菌门、疣微菌门和Muribaculaceae分别显著提高了22.22%、17.43%、19.31%、11.91%、18.91%、31.64%、41.5%、50%、42.86%和25.41%(P <0.05),试验2组瘤胃菌科显著降低了27.17%(P <0.05),试验2组CD4分子、IgG、SIgA和毛螺菌科分别极显著提高了14.53%、24.89%、38.52%和50%(P <0.01),试验2组疣微菌科UCG... 相似文献
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为探究日粮添加15%和30%发酵酒糟对西威牛血液和瘤胃菌群的影响，将体况良好、体质量相近的18头西威公牛（西门塔尔牛♂×威宁黄牛♀）随机均分成3组，对照组饲喂基础饲粮，试验I组、II组分别添加15%、30%发酵酒糟，预试期为15 d，正式试验期为90 d。采用全自动动物生化分析仪、酶标仪检测西威牛血清生化和抗氧化指标，使用Illumina NovaSeq 6 000测序平台对瘤胃菌群进行扩增和测序。结果显示：与对照组相比，试验I组总抗氧化能力（T-AOC）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）显著升高（P <0.05）；试验II组超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）极显著升高（P <0.01），丙二醛（MDA）极显著降低（P <0.01）,T-AOC、AST、碱性磷酸酶（ALP）、甘油三酯（TG）显著升高（P <0.05）；试验I组、II组广古菌门（Euryarchaeota）相对丰度显著低于对照组（P <0.05），而试验II组绿弯菌门（Chloroflexi）相对丰度极显著高于对照组（P <0.01），试验I组显著高于对照组（P... 相似文献
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