寨卡病毒SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用     

于宁  刘宇梦  李成辉  李卓昕  汪伟  孙文超  鲁会军  金宁一 《中国动物传染病学报》2021,(1)

为建立一种针对寨卡病毒的快速诊断方法,本研究根据寨卡病毒的3’端保守基因序列,设计合成1对引物,建立了检测寨卡病毒的荧光定量PCR方法。结果显示:所建立的检测方法的Ct值与标准品在1.41×10^1~1.41×10^10^ copies/μL具有良好的线性关系,相关性为1,斜率为-3.502;灵敏性结果显示,该方法的检测限度为1.41×10^1 copies/μL,是普通PCR的10000倍;特异性结果显示,对CHIKV、DENV和JEV无特异性扩增,特异性强;重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于1%,重复性好。本研究建立的SYBR Green I real-time PCR检测方法,可用于寨卡病毒感染的快速诊断。  相似文献   

“新发现动物疫病综合信息系统”的建立     

金宁 《中国禽业导刊》2005,22(4):9-10

一目前我国动物防疫形势 1 动物疫病和药物残留已成为阻碍我国养殖业健康发展的重要因素 在过去20年间我国的肉类增加了4倍多，从1980年的1450万吨猛增到2000年的6270万吨，从占世界总产量的10．6％跃升到279％，成为肉类第一生产大国。然而我国猪、牛、羊、禽等的死亡率高出发达国家1倍以上。权威机构估计我国每年因畜禽死亡造成的损失为260～300亿元，另外由于疫病引起的生产性能下降、兽医卫生和其他损失约700亿元。  相似文献   

通过农杆菌介导法将口蹄疫结构蛋白全长基因P1导入大豆的研究     

王萍  郭永来  王罡  季静  余云舟  李昌  金宁一 《西南农业学报》2005,18(5):643-646

本研究以大豆体细胞胚为受体。用农杆菌介导法将口蹄疫病毒结构蛋白全长基因P1导入大豆基因组中．获得了抗性植株。经GUS染色、PCR及PCR-southern杂交等分子检测。证明目的基因已导入并整合到大豆基因组中。为利用大豆作为生物反应器生产口蹄疫新型口服疫苗奠定了基础。  相似文献   

黑龙江省禽肉厂新城疫流行情况调查     

张子群  邵昱昊  李维刚  金宁 《黑龙江畜牧兽医》2003,(9):42-42

通过对黑龙江省7个禽肉厂养禽场的饲养情况，疲劳免疫、消毒隔离措施及疫情发生情况进行调查，统计各禽肉厂新城疫疫情的流行情况，并对出口的18批次90栋舍540只宰前肉用禽类进行新城疫（NDV）血清血凝抑制抗体检测和病毒分离鉴定。共从12批次25栋舍87只肉用禽中分离出新城疫病毒，并对其中69株新城疫病毒进行毒力鉴定。均为中等以下毒力，来分离出强毒株。  相似文献   

H5N1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析     

王振国  金宁一  马鸣潇  金扩世  张洪勇  尹革芬  葛淑敏 《中国预防兽医学报》2004,26(6):436-438

用RT-PCR法,以1株h5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA.将cDNA克隆于pMD18-T载体,并对其进行测序.测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸.将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92.5%～95.9%,编码的氨基酸同源性为97.0%～98.4%.本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系.  相似文献   

马动脉炎病毒RT-PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

杜建王志亮  陈继明金宁一 张念祖 《中国动物检疫》2005,22(5):28-30

根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列，设计并合成了1对引物，通过对影响PCR扩增因素的筛选，成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段，与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)作为对照的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明，该方法可以检测出10^-4个TCID50的病毒含量，说明具有较好的敏感性。  相似文献   

猪细小病毒6型SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立     

孙文超  刘立明  赵翠青  汪伟  赵冠宇  曹亮  张赫  庄忻雨  韩继成  鲁会军  金宁一 《中国兽医学报》2018,(3)

采用PCR方法扩增PPV6保守区域基因252bp,将其克隆到pClon007载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒。以质粒模板建立PPV6的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果表明,重组质粒特异性好;建立的real-time PCR方法Ct值与标准品模板在8.80×109~8.80×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.993,斜率为-4.320。该方法检测灵敏度可达8.80×101 copies/μL。该方法对JEV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV等猪常见病原检测均无特异性扩增;对临床样品的检测结果表明,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为40.63%。本试验成功建立了PPV6SYBR Green I real-time PCR检测方法,可实现对PPV6快速灵敏的诊断。  相似文献   

鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律     

金明兰  侯继波  南文龙  鲁会军  马鸣潇  郑敏  金宁一 《江苏农业科学》2011,(1)

采用鸡痘弱毒疫苗按1个使用剂量、增加免疫剂量、2次免疫和对照组(生理盐水)对鹌鹑进行刺种,在免疫后的1～8周采血,检测特异性抗体和中和抗体,研究鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律,对鸡痘病毒疫苗应用于鹌鹑的免疫效果及生物安伞性进行初步评价.在试验期间试验动物精神状态良好,采食、饮水正常,未发生病理变化:抗鸡痘病毒特异性抗体和中和抗体效价免疫后1周显著升高,3周达到高峰,5周开始下降,8周时仍高于对照组的抗体水平,增加免疫剂量组产生的抗体水平高,但消长规律与使用剂量组相同.表明鸡痘病毒疫苗能刺激鹌鹑产生特异性抗体和中和抗体,维持时间较长,无毒副作用,生物安全性好.  相似文献   

不同灌水下限及氮素形态配比对西兰花干物质分配、产量及品质的影响     

车旭升  吕剑  冯致  张国斌  秦启杰  张辉  金宁  李金武  罗建 《华北农学报》2020,35(5):149-158

  相似文献   

反转录病毒载体介导的EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤纽胞中的表达     

丛艳昭  任大勇  李昌  李林溪  杜寿文  王卓越  王婧  胡博  金宁一 《黑龙江畜牧兽医》2011,(3):40-42

为了构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的反转录病毒载体,并观察EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达情况.试验将增强型绿色免疫荧光基因片段定向插入反转录病毒载体pFB-neo,获得重组反转录病毒质粒pFB-NE,利用三质粒共转染系统,将含有目的基因的重组反转录病毒质粒pFB-NE以及含有辅助病毒...  相似文献