聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定禽呼肠孤病毒   总被引：1，自引：0，他引：1  

单松华  刘学忠 《中国动物检疫》1993,(2):13-14

从感染禽呼肠孤病毒的细胞中,以SDS和酚提取病毒核酸,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法将分节段的核酸分开,经银染色显示,呈3-3-1-3分布,此法可用于禽呼肠孤病毒的快速检测、鉴定。同样方法未能使传染性法氏囊病毒核酸显示。  相似文献   

应用多重PCR检测人工感染鸡呼吸道疾病的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

庞耀珊  谢芝勋  谢志勤  刘加波  邓显文  廖敏  M.I.Khan 《中国预防兽医学报》2001,23(6):415-418

本文报道了IBV，NDV，ILTV，MG人工感染4周龄SPF鸡和非免疫鸡后，用多重PCR检测试验鸡的咽喉棉拭子和器官组织样品，并与传统的病原分离鉴定，血清学方法进行比较，多重PCR无论是对单一感染病原，还是对两种以上混合感染病原，其敏感性和检测速度都优于传统的鉴别诊断方法，具有较高的实用价值，可以直接应用于临床检测，服务于生产。  相似文献   

犬腺病毒SY-45株不同大小蚀斑特性研究     

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲  殷震 《动物医学进展》2001,22(4):86-87,99

应用蚀斑方法将SY－45毒株经过3次蚀斑纯化直到蚀斑大小相对稳定。从不同大小的蚀斑中挑选出三种蚀斑，大斑直径约3mm(简称LP）、中斑约2mm(简称MP）、小斑约1mm(简称SP）。分别在MDCK细胞上增殖并进行了三种不同大小斑毒对犬的毒力、免疫原性和在MDCK细胞上产毒量比较，以筛选最佳的疫苗株，试验结果表明用不同大小蚀斑病毒大剂量人工感染易感犬后，所有的试验犬临床症状和病理解剖学和病理组织学表现均正常；对挑选的4窝CAV HI抗体效价小于等于1：2的健康幼犬进行免疫试验，测定血清的中和抗体效价和血凝抑制抗体效价，结果表明：大斑毒的免疫原性要稍高于中斑毒，而明显高于小斑毒；不同大小蚀斑毒在MDKC细胞上产毒量差异很大，大斑毒可达10^7TCID50／mL、小斑毒达10^6TCID50／ml、小斑毒达10^4.5TCID^50/mL。综合所有试验结果表明：大斑毒株具有产毒量高、安全性好、免疫原性强的优点，是较为理想的疫苗株。  相似文献   

表达HAV结构基因的重组腺病毒鉴定及细胞病变分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

李嘉琦  吴娟  孙茂盛  戴长柏 《动物医学进展》2003,24(2):68-71

利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构基因(vp3 vp1),克隆到穿梭质粒pXCX2NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。在光学显微镜下观察到明显的细胞病变(CPE);经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定证明HAV的结构基因已插入到腺病毒基因组中;在电子显微镜下观察发现有二十面体的病毒颗粒。以上结果表明获得了重组腺病毒rAdHAV,纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。  相似文献   

鸡白血病病毒抗原ELISA试剂盒的研制和应用   总被引：5，自引：2，他引：3  

黄进  陈德威 《中国兽医杂志》1994,20(4):3-5

以双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）为基本原理，成功地研制出鸡白血病病毒抗原ＥＬＩＳＡ试剂盒，该试剂盒与国外同类试剂盒相比，具备相同的特异性和敏感性，对ＲＡＶ－１纯化样品的最小检出量可达０．７８ｕｇ／ｍｌ，且敏感性高于直接补体结合试验。经初步应用发现，我国商品种鸡群ＡＬＶ阳性率为０．７－１４％，在部分ＳＰＦ鸡群中未检出阳性鸡。  相似文献   

用酶联免疫吸附试验检测鸡白血病以及控制、根除鸡白血病措施的探讨     

李厚达 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1987,(4)

用酶联免疫吸附试验(ELISA),对2群鸡的鸡蛋清和1株鸡的马立克氏病疫苗进行检测,发现2群鸡的鸡蛋清中,鸡白血病病毒的阳性率分别是11％和29％,鸡马立克氏病冻干苗隐藏鸡白血病病毒群体特异性(gs)抗原的阳性率为100％。本文指出我国禽苗可能带有鸡的白血病病毒,分析讨论了鸡白血病病毒的垂直传递和水平传播的规律,提出在曾祖代和祖代鸡群中,采用ELISA试验,检测鸡蛋清,能减少以至根除鸡的白血病。  相似文献   

鸭流感病毒4/2004-H6N2亚型毒株的血凝素基因全序列克隆与分析     

顾节清 陈杰李晓成  杨增岐吴发兴张燕霞  黄保续 《中国动物检疫》2005,22(5):31-33

2004初从正常鸭群中分离到一株鸭源禽流感病毒，命名为A／Duck／HN／4／2004(H6N2)。经对血凝素基因(HA)序列分析发现HA基因全长为1744bp，共编码566个氨基酸，在裂解位点仅含一个碱性氨基酸-精氨酸(R)，符合LPAIV的标准。将所得基因序列与已发表的同一亚型参考序列分析表明，与H6亚型流感HA基因同源性为89．2％-97．1％，经分子遗传演化分析表明本次分离株与香港分离株A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)、A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)最近。  相似文献   

Novel reassortant H5N6 highly pathogenic influenza A viruses in Vietnamese quail outbreaks     

《Comparative immunology, microbiology and infectious diseases》2018

Avian influenza A H5N6 virus is a highly contagious infectious agent that affects domestic poultry and humans in South Asian countries. Vietnam may be an evolutionary hotspot for influenza viruses and therefore could serve as a source of pandemic strains. In 2015, two novel reassortant H5N6 influenza viruses designated as A/quail/Vietnam/CVVI01/2015 and A/quail/Vietnam/CVVI03/2015 were isolated from dead quails during avian influenza outbreaks in central Vietnam, and the whole genome sequences were analyzed. The genetic analysis indicated that hemagglutinin, neuraminidase, and polymerase basic protein 2 genes of the two H5N6 viruses are most closely related to an H5N2 virus (A/chicken/Zhejiang/727079/2014) and H10N6 virus (A/chicken/Jiangxi/12782/2014) from China and an H6N6 virus (A/duck/Yamagata/061004/2014) from Japan. The HA gene of the isolates belongs to clade 2.3.4.4, which caused human fatalities in China during 2014–2016. The five other internal genes showed high identity to an H5N2 virus (A/chicken/Heilongjiang/S7/2014) from China. A whole-genome phylogenetic analysis revealed that these two outbreak strains are novel H6N6-like PB2 gene reassortants that are most closely related to influenza virus strain A/environment/Guangdong/ZS558/2015, which was detected in a live poultry market in China. This report describes the first detection of novel H5N6 reassortants in poultry during an outbreak as well as genetic characterization of these strains to better understand the antigenic evolution of influenza viruses.  相似文献   

禽呼肠病毒感染鸡胚成纤维细胞后Toll样受体mRNA转录水平的动态变化     

蓝元喜  谢芝勋  黄莉  谢丽基  邓显文  范晴  罗思思  谢志勤  黄娇玲  张艳芳  王盛  曾婷婷 《动物医学进展》2016,(9)

为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。  相似文献   

Dvl1及其突变体腺病毒载体的构建与在MSCs中表达鉴定     

王春燕  崔恒进  胡君  谢桂琴  张焕相 《广西农业生物科学》2014,(2):314-321

Dvl1及其结构缺失突变体ΔDIX（dsh and axin）和ΔDEP（dsh,Egl-10 and pleckstrin）腺病毒载体的构建并验证其在MSCs（mesenchymal stem cells）中的表达情况。将目的基因定向克隆至pAdTrack-CMV穿梭载体上,并经PmeⅠ线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组,获得重组腺病毒载体,在QBI-293A细胞中包装及扩增,实时荧光定量PCR和Western bolt验证Dvl1在MSCs中的表达情况。经PCR、PacⅠ单酶切鉴定及测序分析,成功构建Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,目的基因序列与GenBank报道一致,并选出150 MOI为最适感染MSCs的感染复数,成功构建了Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,并获得高滴度的病毒子,qPCR和Western blot证实Dvl1在MSCs中高表达并增加了β-catenin在细胞中的累积,为进一步研究Dvl1在MSCs迁移过程的作用奠定了基础。  相似文献