共查询到20条相似文献，搜索用时 15 毫秒
1.
Rapid detection and differentiation of Newcastle disease virus isolates by a triple one-step RT-PCR 总被引：6，自引：0，他引：6
Wang Z Vreede FT Mitchell JO Viljoen GJ 《The Onderstepoort journal of veterinary research》2001,68(2):131-134
A triple one-step RT-PCR was developed to screen and differentiate virulent from avirulent Newcastle disease virus (NDV) isolates. Three sets of oligonucleotides were designed, each specific for amplifying NDV fusion protein gene-specific RNA from virulent, avirulent or all isolates respectively. The sensitivity of one-step RT-PCR was determined using viral RNA extracted from serially diluted NDV-infected allantoic fluid and found to be 10(-5) HA units. Application of one-step RT-PCR to various NDV samples, including wild-type virulent isolates and avirulent vaccine strains, demonstrated the potential for rapid identification (3-4 h) of NDV isolates as well as the differentiation of virulent from avirulent strains. 相似文献
2.
从山东济南某非典型新城疫发病鸡群中分离到一株新城疫病毒株（ShD-5—06）,研究其生物学特性表明,该病毒具有新城疫强毒株的一些特征。从该分离株扩增出其F和HN基因,并与标准株进行同源性比较,为探讨NDV是否发生变异提供理论依据。本试验通过RT—PCR法特异性地扩增出F和HN基因全基因序列,并对其与已经发表的序列进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,ShD-5—06株的F和HN基因开放性阅读框架（ORF）为1662bp和1716bp,分别编码489个和571个氨基酸。与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相应序列进行比较,F基因核苷酸序列的同源性在84．1％～88．7％之间,氨基酸同源性在88．1％～93．3％之间;HN基因核苷酸序列的同源性在82．19,5～87．4％之间,氨基酸同源性在88．6％～90．9%之间;F蛋白裂解位点区（112～117）氨基酸组成与强毒株一致,说明NDV山东分离株（ShD-5—06）为新城疫强毒株。 相似文献
3.
RT-PCR法快速鉴别新城疫强弱毒株的试验 总被引：2，自引：0，他引：2
通过对大量不同毒力NDV F基因核苷酸序列的分析，根据强弱毒株F0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物，建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，整个试验过程可在5h内完成。试验表明，该方法具有快速特异和操作简便的特点，不仅适用于对鸡胚毒的检测，而且适用于对病鸡组织匀浆液的检测，是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。 相似文献
4.
从山东潍坊某非典型新城疫发病鸡群中分离到一株新城疫病毒(暂命名:ShD-5-04),其生物学特性表明该病毒具有新城疫强毒株的一些特征。通过RT-PCR特异性地扩增出F和HN基因序列,并对其进行核苷酸序列测定和分析,结果表明ShD-5-04株的F和HN基因开放性阅读框架(ORF)为1662bp和1716bp,分别编码489个和571个氨基酸,与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相应序列进行比较,F基因核苷酸序列的同源性在84.1%～88.7%之间,氨基酸同源性在88.1%～93.3%之间;HN基因核苷酸序列的同源性在82.1%～87.4%之间,氨基酸同源性在88.6%～90.9%之间;F蛋白裂解位点区(112-117)氨基酸组成与强毒株一致,说明NDV山东分离株(ShD-5-04)为新城疫强毒株。 相似文献
5.
应用多重RT-PCR反应(mRT-PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立禽产品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速检测方法。以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单相RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感和新城疫,其PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测分析后,检测极限分别达10-0.5ELD50/0.1mL和10-1.5ELD50/0.1mL。与普通凝胶电泳比较,敏感性高2个数量级。特异性试验表明,mRT-PCR-DHPLC仅检测到禽流感病毒与新城疫病毒,而对其他5种禽类病原体和SPF鸡胚尿囊液均未检测到阳性吸收峰。所建立的方法检测不同亚型禽流感病毒29株、不同来源及不同毒力的新城疫病毒16株,结果与实时荧光定量PCR检测结果完全一致;与病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,两种方法检测禽流感的符合率为94.4%(34/36),检测新城疫的符合率为95.4%(21/22)。病原分离法的检出率虽高于DHPLC方法,但经统计学分析两者差异不显著,两种方法同时对27份进口鸡胗样品与90份棉拭子样品进行检测,阴性符合率为100%,可适用于进出口禽肉产品的检测。 相似文献
6.
A rapid, sensitive and specific semi-nested RT-PCR was developed to detect and differentiate virulent and avirulent strains of Newcastle disease virus (NDV). For a total of 67 NDV strains, the results obtained from the semi-nested RT-PCR were consistent with those from nucleotide sequence analysis, plaque forming assays, mean death time (MDT) measurements and intracerebral pathogenicity index (ICPI). Furthermore, 13 class I NDV strains can be characterized by the semi-nested RT-PCR approach, which was feasible by the conventional methods. The detection limit for the semi-nested RT-PCR was two plaque forming units (PFU) both for NDV strain F48E9 in allantoic fluid and for isolate APMV1/ch/ChinaND4031 in oral or cloacal swabs. In conclusion, this semi-nested RT-PCR method offers a new assay for the rapid detection and differentiation of NDVs. 相似文献
7.
为建立一种新城疫病毒(NDV)的简便、快速、高灵敏度的检测方法,本研究根据NDV融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,在恒温水浴中进行核酸扩增反应,对反应温度、反应时间以及反应液中Mg2+浓度进行优化,获得最佳反应条件,结果经凝胶电泳分析并在可见光下直接观察.整个RT-LAMP检测用时0.5 h,检测敏感度比RT-PCR高100倍,对禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒无交叉反应.本研究建立的NDV RT-LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强,操作简单等特点,有望在核酸扩增检测方法中取代RT-PCR技术. 相似文献
8.
新城疫病毒F48E9株病毒糖蛋白的功能分析 总被引：4，自引：1，他引：3
对抗新城疫病毒（ＮＤＶ）ＨＮ和Ｆ糖蛋白的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的生物学活性，应用ＥＬＩＳＡ、ＨＩ、ＨＬＩ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等进行了分析，结果证明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ蛋白除有ＨＡ和ＮＡ功能区外，还有一个促进（启动）融合的功能区。此外，还筛选到４株ＮＤＶ强毒株特异性ＭｃＡｂ，为ＮＤＶ强弱毒株的鉴别打下了基础 相似文献
9.
10.
用RT-PCR对新城疫病毒分离株毒力的快速鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
根据新城疫病毒NDV强、弱毒株在F蛋白裂解位点氨基酸组成的序列上的差异,参照有关文献,设计了三对引物A+B,A+C,A+D。引物A+B能从Lasoa,B1,I系和强毒F48E8的含毒尿囊液中扩增出362bp的核酸片段,引物A+C仅能从强毒F48E8的含毒尿囊液中扩增出254bp的片段,引物A+D仅能从Lasota,B1,I系的含毒尿囊液扩增出254bp片段。三对引物均不能从IB,IBD,AI的含毒尿囊液和正常鸡胚尿液中扩增出特异片段。从发病鸡群中分离到3株NDV毒株中均被A+C引物扩出,它们的鸡胚平均死亡时间MDT分别为51.8h、53.2h、52.6h,1日龄雏鸡脑内接种指数ICPI为1.65、1.63、1.60,证明是NDV强毒。利用RT-PCR对NDV人工感染鸡最早可于攻毒后第二天从病鸡气管中检测到NDV,其次为泄殖腔和脾、肾。利用RT-PCR对NDV毒力的鉴定与传统生物学试验对强弱毒的测定结果完全吻合。但前者可在24小时内直接对组织匀浆进行诊断,具有快速简便和敏感的特点。 相似文献
11.
12.
Wambura PN Meers J Kattenbelt JA Gould AR Spradbrow PB 《Veterinary research communications》2007,31(1):105-112
A single-tube RT-PCR technique generated a 387 bp or 300 bp cDNA amplicon covering the F0 cleavage site or the carboxyl (C)-terminus of the HN gene, respectively, of Newcastle disease virus (NDV) strain I-2. Sequence analysis was used to deduce the amino acid sequences of the cleavage site of F protein and the
C-terminus of HN protein, which were then compared with sequences for other NDV strains. The cleavage site of NDV strain I-2
had a sequence motif of 112
RKQGRLIG119, consistent with an avirulent phenotype. Nucleotide sequencing and deduction of amino acids at the C-terminus of HN revealed
that strain I-2 had a 7-amino-acid extension (VEILKDGVREARSSR. This differs from the virulent viruses that caused outbreaks of Newcastle disease in Australia in the 1930s and 1990s, which
have HN extensions of 0 and 9 amino acids, respectively. Amino acid sequence analyses of the F and HN genes of strain I-2
confirmed its avirulent nature and its Australian origin. 相似文献
13.
根据新城疫病毒F基因的裂解位点序列,设计合成一对引物和TaqMan探针,以本室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株F基因阳性重组质粒作为中、强毒力新城疫病毒RNA定量检测的标准品,建立检测方法。结果表明本试验建立的标准曲线循环阈值（Ct值）与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.999,灵敏度约为3拷贝/μL,对禽流感病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为中、强毒力新城疫病毒检测提供了一种快速高效的定量检测方法。对28株标准分离株强弱毒力的检测与经典病毒分离方法符合率达100%,对187份临床样品的检测,二者结果符合率接近90.0%。在新城疫病毒临床样品快速检测、流行病学监测等方面显示良好的应用前景。 相似文献
14.
新城疫病毒某水禽分离株经鸡体传代后由非致病型转变为速发型的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
于圣青 丁铲 NORIKO KISHIDA HIROSHI ITO HIROSHI KIDA KOICHI OTSUKI TOSHIHIRO ITO 《中国预防兽医学报》2003,25(1):59-64
最近，一株无毒力的新城疫病毒（NDV）在鸡体内繁殖时，变成了强毒株，但致今尚未能证实，经鸡体传代的野生水禽新城疫病毒是否也具有变成速发型毒株的能力，为了通过实验证明从水禽中分离的非致病型NDV可以转变为速发型病毒，我们通过在鸡体内传播鹅源性无毒力株，经气囊接种连续传代9次，随后再在鸡脑内传代5次，结果显示，该病毒的毒力变得很强，致死率可达100%，通过致病性试验证实，其具有典型的速发型病毒特征；融合蛋白裂解位点的序列分析表明，原始的分离株含有无毒力型毒株共有的裂解序列；E-R-Q-E-R/L，而通过鸡体反复传代后，该序列变为致癞 性毒株共有的序列：K-R-Q-K-R/F，这些结果表明，野生水禽中自然存在的无毒力毒株，具有无毒力株相应的序列，但当其在鸡群中传播时，则具有变成高致病性病毒的能力，同时研究表明，鸡体提供了该病毒从非致病型向致病型转变的选择机制。 相似文献
15.
Hybridisation of PCR fragments with fluorogenic probes specific for pathotype allowed an estimation of pathogenicity of Newcastle disease virus (NDV) isolates using a modified TaqMan procedure. Six probes were used, designed to recognise nucleotide sequences in the fusion protein gene sequence corresponding to the precursor protein F0 cleavage site of both virulent and avirulent viruses. Forty-three of the 45 isolates tested, including 18 examined in a blind study were pathotyped successfully and rapidly, with close correlation between cleavage site nucleotide sequences, TaqMan results and intracerebral pathogenicity index (ICPI) values. One isolate, which could not be pathotyped by nucleotide sequencing, was shown using the TaqMan system to be a mixture of virulent and avirulent NDV. The results of this study suggest that using this modified TaqMan protocol, the likely virulence of most ND isolates can be determined rapidly and reproducibly. 相似文献
16.
17.
一步法多重RT-PCR检测新城疫、禽流感、传染性支气管炎病毒试验的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
为了提高检测鸡肉中新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV)，禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)，传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus,IBV)的效率和敏感性，利用引物设计软件Primer Primer5.0设计了NDV的F基因片段，AIV的M基因片段，IBV的M基因片段的引物，在以前一步法RT-PCR扩增各种病毒RNA的基础上，进行了两种病毒和三种病毒的一步法多重RT-PCR的试验。结果确定了两种病毒的一步法多种RT-PCR的试验条件。三种病毒的一步法多重RT-PCR的试验条件基本确立，本试验初步建立了检测NDV，AIV，IBV一步法多重RT-PCR技术。 相似文献
18.
1种检测新城疫病毒的微滴式数字PCR方法 总被引：1，自引：1，他引：0
本研究旨在构建一种新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的微滴式数字PCR方法（droplet digital PCR，ddPCR）。以NDV F基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，构建了NDV ddPCR。对ddPCR反应引物和探针浓度、退火温度进行了优化，并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行测定。试验结果表明，ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900和250 nmol·L-1，最佳的退火温度为55℃。ddPCR的线性良好，最低检测下限为1.8 copies·μL-1，与禽传染性支气管炎病毒等其他6种病毒无交叉反应，样本重复的变异系数为2.4%。结果提示，本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强，可对新城疫病毒感染的临床样品进行定量检测。 相似文献
19.
MEI Li WANG Yingchao WU Di LI Yue SONG Yanjun WEI Haitao WANG Lin GAO Xiaolong FENG Xiaoyu 《畜牧兽医学报》1956,51(12):3187-3192
This experiment was conducted to establish a droplet digital PCR (ddPCR) method for the detection of Newcastle disease virus (NDV). A ddPCR method was developed, which the primers and probes were designed based on the conservative regions of F gene of NDV. The concentration of primer and probe, the annealing temperature in ddPCR reaction were optimized. The sensitivity, specificity and reproducibility of ddPCR method were evaluated. In results, the optimal primer concentration and the probe concentration were 900 and 250 nmol·L-1, the optimum annealing temperature was 55℃. The detection limit of ddPCR method was 1.8 copies·μL-1 with a good linear response, it had no cross reaction with other six viruses (include IBV), the coefficient of variation of sample repetition was 2.4%. All the results showed that NDV ddPCR was sensitive and specific, it was suitable for quantitative detection of clinical samples infected with NDV. 相似文献
20.
新城疫病毒西藏分离株的生物学特性鉴定及遗传进化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从西藏病死藏鸡中分离到具有血凝活性的病毒、经血凝抑制试验、电镜观察、PCR扩增和测序鉴定为新城疫病病毒(NDV),通过动物致病性试验证明该病毒对鸡具有致病性;分离毒株毒力测定结果显示,MDT为120h,EID50为10-8.44、IVPI为0.5、ICPI为0.6,均符合NDV弱毒株特征。血凝解脱及血凝素热稳定性试验显示:各分离株的血凝解脱时间短,血凝素热稳定性较差,符合NDV弱毒株的特征。F基因的序列测定遗传进化分析表明,西藏分离毒株之间的核苷酸序列具有99%的同源性,与疫苗株LaSota的同源性为90%;与国内标准强毒株F48E8同源性为81%。推导其氨基酸序列分析表明,各分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸112 G-K-Q-G-R-L117,具有NDV弱毒株特征,与毒力测定结果相符。本研究首次报道了NDV西藏分离毒株遗传进化情况和生物学特性情况,为进一步研究高海拔、缺氧环境下NDV生物学特性变化研究奠定了基础。 相似文献