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高效液相色谱荧光检测法检测Beagle犬血浆中伊维菌素的试验 总被引：1，自引：0，他引：1
建立一种灵敏、简便、可重复的高效液相色谱检测方法检测Beagle犬血浆中伊维菌素(Ivermectin,IVM)的含量。样品中加入内标多拉菌素(DRM),采用乙腈提取,涡旋振荡后高速离心,上清液于60℃N2吹干,衍生化后进样分析。色谱柱为ODS-2 Hypesil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),检测器为荧光检测器,流动相为甲醇-乙腈-0.2%乙酸(55∶43∶2,V/V/V),流速为1 mL/min,激发波长365 nm,发射波长475 nm,柱温为35℃。测得DRM的保留时间为8.9 min,IVM保留时间为10.7 min。在0.25 ng/mL120 ng/mL的范围内,血浆药物浓度与峰面积之比呈良好的线性关系,其线性方程为:y=5.34e-003x+2.86e-003(n=10,R2=0.9998)。120 ng/mL、10 ng/mL、0.25 ng/mL三个浓度的添加回收率为83.01%120 ng/mL的范围内,血浆药物浓度与峰面积之比呈良好的线性关系,其线性方程为:y=5.34e-003x+2.86e-003(n=10,R2=0.9998)。120 ng/mL、10 ng/mL、0.25 ng/mL三个浓度的添加回收率为83.01%91.75%,日内变异系数为3.75%91.75%,日内变异系数为3.75%6.45%,日间变异系数为3.26%6.45%,日间变异系数为3.26%8.86%,最低检测限为0.05 ng/mL。本方法操作简便,灵敏度高,可应用于Beagle犬血浆中伊维菌素的检测。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2015,(21)
为了探讨脂多糖(LPS)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、5-羟色胺(5-HT)和血栓素B2(TXB2)在低聚果糖诱导的马急性蹄叶炎中的作用,将24匹蒙古马随机分为试验组和对照组,每组12匹,试验组灌服低聚果糖,从0~72 h,每4 h采集一次颈静脉血,4℃、3 000 r/min离心10 min后检测血浆中的LPS、p38MAPK、5-HT和TXB2的浓度。结果表明:LPS、p38MAPK、5-HT和TXB2的浓度分别在16,16,24,28小时达到峰值,峰值分别为(0.025 2±0.003 5)EU/m L、(50.914 2±12.341 7)ng/m L、(10.313 2±1.532 6)ng/m L和(3.992 3±0.565 0)ng/m L,与0小时比较差异显著(P0.05)。说明LPS、p38MAPK、5-HT和TXB_2的浓度随时间发生较大变化,可能在急性蹄叶炎的发展过程中起到重要作用。 相似文献
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为了研究双峰驼CYP2D6酶体外活性,建立双峰驼肝微粒体孵育体系并对孵育体系中探针底物浓度、肝微粒体蛋白浓度和孵育时间等进行优化研究。首先采用改良差速离心法制备双峰驼肝微粒体、BCA法测定双峰驼肝微粒体蛋白浓度、CO还原差示光谱法检测CYP总酶含量,然后采用HPLC法跟踪检测孵育体系中CYP2D6酶特异性底物的主要代谢产物去甲右美沙芬含量进而优化孵育条件。结果表明,双峰驼肝微粒体蛋白浓度为5.565 0mg/mL±0.519 7mg/mL,CYP总酶含量为0.177 7nmol/mg±0.050 3nmol/mg;肝微粒体孵育体系的最适底物浓度为250μg/mL,肝微粒体蛋白浓度为5.565 0mg/mL,最适孵育时间为40min。所制备的双峰驼肝微粒体各项指标和优化后的肝微粒体孵育条件均能满足后续对双峰驼CYP2D6酶体外活性研究的基本要求。 相似文献
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饲料中T-2毒素的高效液相色谱-荧光法检测研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以甲醇和水(体积分数8∶2,v/v)为提取溶剂,采用硅镁吸附剂层析柱结合T-2毒素免疫亲和柱两阶段净化处理、柱前衍生,建立了饲料中T-2毒素的高效液相色谱法结合荧光检测方法。衍生液选用2-萘甲酰氯(2-NC),4-甲基氨基吡啶(DMAP)作为反应促进剂。确立的色谱检测条件为:流动相是乙腈和水(体积分数75∶25,v/v),激发波长(Ex)381 nm,发射波长(Em)470 nm,流速0.6 mL/min,柱温30℃。方法的检测限1.8 ng/g,定量限为6×103 ng/kg,标准方差(RSD)低于4.25%,回收率72.24%～83.31%,T-2毒素在25～800 ng/mL范围内线性回归良好,线性方程为:y=2186.2x-31953,标准方差R2=0.9992。本方法简单快速、灵敏、准确、重复性好,能满足饲料中检测T-2毒素的需要。 相似文献
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本试验通过体外培养法,研究在不同精粗比饲粮中添加维生素B12对体外瘤胃发酵和微生物酶活力的影响。试验采用3×3双因子试验设计,即3个底物精粗比(玉米∶羊草=35∶65、50∶50和65∶35)和3个维生素B12添加量(0、40和90 ng/mL)。体外试验用瘤胃液取自3只安装有永久性瘤胃瘘管的湖羊。体外培养24 h后测定体外瘤胃发酵参数和微生物酶活力。结果显示:1)随着底物精粗比和维生素B12添加量的提高,体外培养24 h的产气量、潜在产气量和有机物消化率极显著地增加(P<0.01),且维生素B12添加量与上述指标存在线性剂量效应(P<0.01)。2)当底物精粗比为50∶50和65∶35时,添加维生素B12显著提高了发酵液中氨态氮、微生物蛋白、总挥发性脂肪酸、乙酸和丙酸浓度(P<0.05),但对丁酸浓度和乙酸/丙酸无显著影响(P>0.05)。3)当底物精粗比为35∶65和50∶50时,添加40 ng/mL维生素B12使发酵液中羧甲基纤维素酶、木聚糖酶活力显著提高(P<0.05);当精粗比为65∶35时,添加90 ng/mL维生素B12使发酵液中羧甲基纤维素酶、木聚糖酶活力显著提高(P<0.05)。结果提示,底物精粗比和维生素B12添加量影响体外瘤胃发酵。添加维生素B12可增加瘤胃微生物酶的活力,从而提高有机物消化率以及微生物蛋白和总挥发性脂肪酸的产量。当底物精粗比(玉米∶羊草)较高(50∶50和65∶35)时,维生素B12的添加效果更明显,并且具有剂量依赖效应。 相似文献
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为了建立测定莫能菌素预混剂中莫能菌素含量的高效液相色谱(HPLC)检测方法,试验采用C_(18)色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(94∶6∶0.1)等度洗脱,甲醇-硫酸-香草醛(95∶2∶3)为衍生试剂,流动相与衍生试剂的流速为0.7 mL/min,衍生温度为98℃,检测波长为520 nm,进样量为200μL,考察方法的专属性、精密度、线性、中间精密度、准确度、耐受性等。结果表明:莫能菌素在0.01～0.03 mg/mL范围内线性关系良好(R~2=0.999 5),方法的专属性、精密度、中间精密度、准确度、耐受性等均符合要求。说明用本试验建立的HPLC检测方法可以准确地测定莫能菌素预混剂中莫能菌素的含量。 相似文献
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《科技视界》2016,(8)
本文以紫杉醇为底物,建立其CYP2C8代谢产物6α-羟基紫杉醇的LC-MS/MS方法,为CYP2C8酶活性的研究提供可靠、灵敏、快速的检测分析方法。采用电喷雾离子源(ESI),三级四级杆串联质谱,多级反应监测进行定量,正离子扫描,选取离子对为6α-羟基紫杉醇892.3→308.1;内标多西紫杉醇830.3→549.4。利用Agela Venusil XBP C18色谱柱(50×2.1mm;5μm)实现代谢物分离,柱温40℃,流速为0.3m L/min,流动相为A相(水∶乙腈=95∶5)与B相(水∶乙腈=5∶95)梯度混合。代谢物6α-羟基紫杉醇与内标实现基线分离,峰形良好,而且不存在代谢与内标之间的干扰,且6α-羟基紫杉醇在5-500ng/ml的范围为线性关系良好;该方法快速灵敏可用于CYP2C8活性检测。 相似文献
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对牛、羊肉中氯氰碘柳胺(Closantel)残留的检测方法进行了研究.取2 g动物组织样品用乙腈提取,正己烷脱脂,于50℃减压蒸干.残留物用2 mL甲醇-正己烷(8∶ 2)溶解,通过氧化铝B柱,用2 mL正己烷淋洗,不收集;该柱用10 mL甲醇洗脱,收集洗脱液于50℃减压蒸干后,残留物用1.0 mL的流动相溶解并用带有紫外检测器的高效液相色谱仪于221 nm波长处测定;流动相为乙腈∶水(85∶ 15),含有0.05%二乙胺并用磷酸调整pH值至3.氯氰碘柳胺浓度在200～8 000 ng/mL时,呈线性关系,检测限量为25 μg/kg.本方法平均回收率为87.8%±7.5%(牛肉)、83.2%±10.0%(羊肉). 相似文献
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《中国畜牧兽医》2017,(9)
试验旨在阐明前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)和F_(2α)(prostaglandin F_(2α),PGF_(2α))对体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞中环氧合酶-1(cyclooxygenase-1,COX-1))与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞和传代细胞,第4代细胞以1×106个/孔接种于6孔板,以10-7 mol/L PGE_2和PGF_(2α)分别预处理细胞24h,以100ng/mL细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞4、8和12h后分别提取RNA和总蛋白质,采用实时荧光定量PCR与Western blotting等技术检测COX-1与COX-2mRNA和蛋白质的表达量。结果表明,与对照组相比,COX-1 mRNA表达量在PGE_2单独作用4、8和12h后显著上调(P0.05);COX-2mRNA表达量在PGE_2单独作用4和12h后显著上调(P0.05),PGE_2单独处理使COX-1、COX-2蛋白表达量均显著上调(P0.05)。与对照组相比,LPS刺激8和12h时COX-1mRNA表达量显著下调(P0.05),LPS刺激后COX-1蛋白表达量无显著变化(P0.05);LPS刺激后4、8和12h时COX-2mRNA表达量显著上调(P0.05),LPS刺激后COX-2蛋白表达量显著上调(P0.05)。与LPS单独处理组相比,LPS+PGE_2处理组在8和12h时COX-1和COX-2mRNA表达量均显著上调(P0.05),同时COX-1和COX-2蛋白表达量也显著上调(P0.05)。PGF_(2α)在LPS未刺激和刺激后对COX-1和COX-2mRNA的表达无显著影响(P0.05),仅在PGF_(2α)单独处理8和12h后COX-1mRNA表达量上调(P0.05)。两种激素联合处理与各自单独处理及LPS单独刺激相比,对COX-1和COX-2mRNA表达具有一定的协同诱导作用。 相似文献
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魏静 《四川畜牧兽医学院学报》2009,(4):28-32
在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。 相似文献
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以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。 相似文献
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本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。 相似文献
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REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air. 相似文献
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