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1.
应用 3′RACE方法扩增并克隆了口蹄疫病毒 ( FMDV) OH99株基因组 3′端真实序列。测序结果表明 ,所扩增的目的基因片段长 15 0 0 nt,包括 3D基因部分序列、3′端非编码区 ( Non- Coding Region,NCR)和 Poly( A)尾巴 ,其中 3′NCR位于终止密码子 TAA之后 ,长 93nt,Poly( A)尾序列至少含有 5 6个 A。与参考毒株进行序列比较 ,结果显示 ,OH99株与 OTY TW/ 97株的核苷酸同源性较高 ,为 91.4 % ,而与 O1K、CHINA99、A12等毒株的核苷酸同源性较低 ,其同源性分别为 6 8.1%、71.0 %、70 .2 %。 3′NCR的末端存在保守性较高的基序 :CCCTCAGATG,TTTTCCC-CGCTTCCT。本研究为进一步研究 FMDV基因组的功能、构建 OH99株的反向遗传操作系统奠定了基础。 相似文献
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应用3’RACE法降落式扩增并克隆了猪水泡病病毒（SVDV）HK／70株基因组3’端的真实序列。测序结果表明，所扩增的目的基因片段长4200nt，包括非结构蛋白编码区（P2和P3）、3’端非编码区和poly（A）尾，其中3’NTR位于终止密码子TAA之后，长99nt，poly（A）至少含有74个腺嘌呤碱基。经与参考毒株进行序列比较，结果显示，HK／70株与J1’73、H／3’76和AUG／22／90株的核苷酸同源性较高，为99．0％（仅第65位碱基不同），而与NET／1／92参考毒株的核苷酸同源性较低，为83．3％，与人柯萨奇病毒B5UK／54株（UK／54-CB5）的同源性为75．7％。同时对3’NTR的二级结构进行分析，并与参考毒株和CB5毒株的二级结构进行了比较。结果表明，它们具有协同变异性，有共同的祖先，显示出3’NTR存在支持其功能所必需的一些结构域。 相似文献
3.
采用RT-PCR法对FMDV OX株基因组全序列进行了分子克隆与测序。结果表明不含poly(C)序列和poly(A)尾巴的OX株基因组全序列长8104nt,开放读码框(ORF)长6969nt、编码2322aa,5’UTR长1040nt,3’UTR长95nt。应用分子生物学软件将OX株与FMDV其它参考毒株进行序列比较,并对其基因特征进行分析。结果显示,OX株与OTwyl／97的核苷酸同源性最高,在基因组功能未知区和3A编码区具有两处明显的缺失现象,其一是在3A编码区有30nt的连续缺失,这与OTwyl／97株相同,其二是在功能未知区域有44nt的缺失,这与OTwyl／97株相同,与OAkesu58相似(43nt缺失)。 相似文献
4.
对猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构基因 (ORF1)和非编码区分别进行了克隆和测序 ,并对其基因特征作了分析。结果表明 ,CH_1a株ORF1全长 11882nt,其中ORF1a长 75 12nt、ORF1b长 4374nt。它们与VR2 332株的核苷酸同源性分别为 89%、92 % ;与LV株的核苷酸同源性分别为 5 4%、6 3.3%。ORF1编码两个聚合蛋白 ,其中ORF1a编码的聚合蛋白经裂解后产生 6个成熟的非结构蛋白 (Nsp1α、Nsp1β、Nsp2_5 ) ,以Nsp2的变异性最为显著 ,它与LV株的氨基酸同源性为 41%。ORF1b编码的聚合蛋白经裂解后 ,产生 4个成熟的非结构蛋白 (RdRpCP2_4) ,其中RdRp为病毒的复制酶 ,CP4表现出较大的变异性 ,与LV株的氨基酸同源性为 48%。在ORF1a_ORF1b的衔接区有保守的庚核苷酸滑动序列和拟节结构 ,它们是核糖体移码翻译所必需的结构。在基因组末端存在非编码区 ,其中 5’NCR长 190nt,比LV株 5’NCR短 31nt,其核苷酸同源性为 6 1%。 3’NCR长 15 1nt,比LV株 3’NCR长 37nt,保守性稍高 ,其与VR2 332株和LV株的核苷酸同源性分别为 95 .4%和 78.2 %。在 3’NCR末端有一个poly(A)尾巴 ,长 2 0nt。在Poly(A)尾上游有保守的八核苷酸序列 ,是复制酶识别并结合的区域。本研究进一步证实CH_1a株在基因型上属于北美洲型 相似文献
5.
提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmB Ⅰ/Xma Ⅰ、Xma Ⅰ/BamH Ⅰ、BamH Ⅰ/Not Ⅰ、Hpa Ⅰ/Kpn Ⅰ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠ cDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pP1-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定.结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾.其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段.将pPⅠ FMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应.利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒. 相似文献
6.
参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对口蹄疫病毒OT株进行分段克隆及序列测定.结果表明不含poly(C)序列的OT株基因组全序列长8 142 nt,开放读码框(ORF)长6 969 nt、编码2 322 aa,5'UTR长1 004 nt,3'UTR长93 nt,3'UTR之后为23nt的poly(A)尾巴.应用分子生物学软件将OT株与FMDV其它参考毒株进行序列比对,并对其基因特征进行分析.结果显示,OT株的假结节(Pseudoknots)从第415-499位连续缺失85 nt,但是其3A基因却未发生碱基的缺失.其VP1基因的核苷酸同源性与O/Akesu58、OMⅢ两株最高,但OT株在进化时间上要比O/Akesu58、OMIII早很多,其毒株起源和遗传衍化关系还需要进一步的关注. 相似文献
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参照已发表的猪瘟病毒弱毒株的序列,设计7对覆盖全长基因纽的引物,通过RT-PCR从感染猪瘟病毒弱毒株的PK-15细胞中扩增得到7个cDNA片段,分别克隆到pMD18-T载体并测序,利用DNASIS软件获得猪瘟病毒C81株全基因组序列（GenBank：AY665656）。C81株基因组全长12310nt,只有一个大的开放阅读框,编码3898个氨基酸的聚蛋白。序列分析表明,c81株开放阅读框与其它各毒株核苷酸和氨基酸序列的同源性变化较大,分别为84．4％～99．6％和91．6％～99．4％。同时,我们绘制了26株CSFVORF的进化树,比较了CSFV5’非翻译区核苷酸序列并推测其二级结构,发现不同毒株之间存在较大的差异,另外对C81株聚蛋白的功能域和三维结构进行了预测。 相似文献
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猪O型口蹄疫病毒强弱毒株VP1基因的克隆与序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
本研究根据口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因的序列，设计并合成了1对用于扩增整个VP1基因的引物（5P、P6）。从细胞培养液或组织中提取总RNA，通过PT－PCR扩增，从F29株O3I3株和T509株中均获得了1条约740bp的DNA电泳带。将PCR产物双酶切后电泳回收，插入到相应双酶切的pUC18质粒中，获得了重质粒。通过PCR鉴定，证明重组质粒pUCVP1/F29,pUCVP1/0313,pUCVP1/T509均插入了VP1基因。对上述3个重线质粒进行测序后分析，F29强毒株与O313、T509弱毒株相比，其核苷酸序列同源性分别为98．75％和99．06％；因F29株核苷酸发生3个碱基缺失与1个碱基替换，故推导的氨基酸序列同源性分别仅为44．13％和41．32％，而T509和O3I3株相比，其核苷酸、氨基酸序列同源性分别为99．37％和95．31％。通过序列分析发现，本研究的3个毒株与国内大多数毒株（包括1997年台湾暴发FMDV所分离的毒株，除O／A／58株外）均属同一基因型，核苷酸序列同源性为85％－94％；而与国外毒株相比，属不同的基因型，核苷酸序列同源性仅为81％－82％，其推本研究的3个毒株与国内分离的大多数毒株的VP1基因的氨基酸序列同源性高达87％－95％，本项研究对猪O型FMDV的强弱毒株VP基历进行克隆与序列分析，将进一步丰富我国FMDV毒株VP1基因资料库，为更加科学地防制FMD提供分子水平依据。 相似文献
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口蹄疫病毒3ABC基因的克隆与测序 总被引：1，自引：0，他引：1
参考 Gen Bank中发表的猪源 O型口蹄疫病毒 3 ABC的基因序列 ,设计一对特异引物 ,以猪源 FMDV/ O/ CC株基因组 RNA为模板 ,RT-PCR扩增 3 ABC基因 ,并克隆到 p MD1 8-T载体中。测序结果显示 ,FMDV/ O/ CC株 3 ABC基因 c DNA长 1 2 81 bp,编码为 42 7个氨基酸残基组成的多肽。核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性比较发现 ,FMDV/ O/ CC株和 FMDV/O/ TW/ 99株 3 ABC基因亲缘关系密切。核苷酸同源性为 97% ,推导氨基酸序列同源性为96.3 %。 相似文献
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本研究测定了3个鸡贫血病病毒（Chinken anemia virus,CAV）国内分离株及12个直接来源于临床样品的CAV毒株全基因组序列,结果表明15个CAV毒株的全基因组长度和结构与已报道的其它CAV毒株一致,长度均为2298nt,包含有3个重叠的ORFs。与GenBank发表的13个毒株序列进行序列比较发现,所有毒株核苷酸序列的相似性在95．2％～99．5％之间,CAV全基因组序列有2个高度变异区（HVR）,分别位于1033nt～1470nt和1858nt～2193nt。CAVORF3变异度最高,其5’端2／5处和3’端2／5～1／5处为2个高度变异区。ORF2变异度也较高,主要出现在5’端1／4处,ORFI最为保守。以CAV全基因组核苷酸序列和ORF3核苷酸序列为基础分别构建的CAV毒株分子进化树,均可以将全部CAV毒株划分为2个基因群。我国部分地区分离的大多数毒株,属基因Ⅰ群,与德国Cux-1等主要流行毒株有较为相近的亲缘关系;其它CAV国内毒株,属基因Ⅱ群,与日本G6株和TR20株有着更为相近的关系。 相似文献
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二丁酰环腺苷酸的合成与性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以ATP为原料采用化学方法合成了dbcAMP及其钠盐 ,并对其理化性质和吸收特性进行了研究。经质谱分析 ,其结构为C18H2 3 N5O8PNa ,分子量为 4 90 .0 ;经紫外光谱测定其含量为 96 .0 % ,产品的得率为 85 .6 %。dbcAMP钠盐为白色粉末 ,可溶于水与乙醇 ,对热和酸碱比较稳定。经饲料添加和皮下注射dbcAMP检测其经消化道和皮下吸收的性能。通过测定饲喂和皮下注射dbcAMP后 0 .5h、1～ 96h不同时间内血液dbcAMP的浓度表明 ,饲料添加在 3h内达到最大浓度 84 .75pmol/mL ,皮下注射在 2h内达到最大浓度 92 .96pmol/mL ,之后血液中dbcAMP的浓度逐渐下降 ,在 96h达到较低水平。 相似文献
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水解ATP制备环状腺苷酸的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用0.3mol Ba(OH)_2 96℃加热40min水解ATP制得cAMP,纸电泳分离样品中的cAMP,紫外吸收测定其含量。结果表明,ATP水解后cAMP的生成率为85.3％,cAMP含量为10.6mg/ml。 相似文献
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应用RT-PCR技术,用特异性引物扩增出SVDV HK’70 5’和3’非编码区,并将目的片段连接于pMD18-T载体,转化JM109感受态细胞。重组质粒经双酶切、PCR鉴定后测序。核苷酸序列比较结果表明,SVDV HK’70 5’非编码区与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.6％、1.9％;SVDV HK’70 3-NCR与参考毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76核苷酸的差异率分别为1.0％、1.0％。应用计算机软件对3个SVDV毒株非编码区的二级结构进行预测,结果表明,SVDV HK’70 5’非编码IX-"级结构中存在13个结构域,SVDV J1’73 5’非编码区二级结构中存在9个结构域,SVDV H/3’76 5’非编码区二级结构中存在10个结构域;SVDV HK’70 3’非编码区二级结构中存在3个结构域,且与其他的两个毒株SVDV J1’73、SVDV H/3’76基本相同。 相似文献
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根据GenBank的核酸序列,设计6对引物自TGEV SCY株中分别扩增了长为1.5 kb、2.0 kb、1.1 kb、1.4 kb、1.4 kb、1.3 kb的6个片段,经克隆测序拼接后获得8 495 bp的TGEV部分序列.根据与其他TGEV和冠状病毒的序列和结构特征比较表明,该段序列克隆了除TGEV聚合酶基因以外的S、M、N、E、NSP3a、NSP3b、ORF7共7个基因的核酸序列;根据S、M、N基因的序列构建了系统进化树,分析表明TGEV-SCY株与TS、HN2002、TO14、pudue等毒株亲缘关系较近;密码子偏爱性分析结果认为TGEV在对密码子的使用上存在轻微的偏向性,个别氨基酸偏向于选择以A和T结尾的密码子. 相似文献
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采用反转录及聚合酶链式反应 ( RT-PCR) ,成功地扩增出鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)人工致弱毒D41株 S1基因、M基因、N基因和基因组 3′端非编码区 ( U TR)的 c DNA。序列测定结果表明 :D41株的 S1基因全长 1611bp(从 ATG到 S前体蛋白裂解位点 ) ,编码一条由 53 7个氨基酸组成的多肽 ;M基因全长 678bp,编码一条由 2 2 6个氨基酸组成的多肽 ;N基因全长 12 3 0 bp,编码一条由 410个氨基酸残基组成的多肽 ,3′端 UTR长度为52 5bp,其中高变区 ( HVR)长度为 2 2 5bp。与国内外已报道的一些 IBV标准毒株的相应基因序列进行核苷酸序列同源性分析后发现 :D41株与麻省血清型的毒株同源性最高 ,尤其与国际常用的标准疫苗株 H52和 H12 0的亲缘关系最接近。但它与国内“腺胃型”毒株 QXIBV在系统发生进化树上却相隔较远 相似文献
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1品 种 蛋壳颜色的深浅与蛋鸡的品种有很大关系。现在农户养殖的蛋鸡品系多，而且来源复杂，由于品系上的差异就造成了蛋壳颜色深浅的不同。有些不法父母代鸡场，为了牟取暴利，将父母代的公鸡与商品代的母鸡杂交，其结果蛋壳颜色深浅不一，白的白，红的红。 2产蛋鸡的年龄 蛋壳颜色是在子宫中沉积色素的结果。一般在产蛋初期母鸡刚进入性成熟期，卵泡发育正常，其对色素的吸收率较高，所以蛋壳颜色也越来越深。然后随着年龄的增加，鸡群的老化，蛋壳颜色也越来越浅。 3产蛋率的高低 产蛋率高的鸡，其对营养的需求量也越高，所… 相似文献
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转基因植物对蜜蜂的安全性（上） 总被引：2，自引：0，他引：2
转基因植物已在全球范围内大面积推广应用 ,全球 5大转基因植物中的油菜、棉花、玉米均是主要的蜜粉源植物 ,对养蜂生产有重要意义 ,其对蜜蜂的安全性问题值得关注。 2种主要的抗虫 (Bt毒蛋白、蛋白酶抑制剂 )基因或抗真菌基因的产物只有在高浓度时才可能对工蜂的寿命、消化酶活性、行为等有不良影响。从目前的研究来看 ,转基因植物对蜜蜂是安全的。 相似文献