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1.
《养猪》2016,(6)
为了解37株猪链球菌2型(S.suis 2)山西分离株的毒力基因型及毒力基因变异情况,通过PCR扩增S.suis 2毒力基因GDH、SLY、EPF、MRP,对这4种毒力基因的扩增片段进行测定,并与国内外其他分离株的基因进行比较。结果显示,GDH、SLY、EPF、MRP基因在37株S.suis 2中的检出率分别为86.5%、70.3%、56.8%、62.2%;37个受试菌株毒力基因型主要为GDH+/SLY+/EPF+/MRP+占51.35%,为优势基因型;S.suis 2山西分离株4种毒力基因与国内其他地区S.suis 2分离株的相应基因之间同源性均在99.1%以上,与国外S.suis 2分离株的相应序列同源性在89.9%~100%之间。 相似文献
2.
为了解19株猪链球菌2型(S.suis 2)安徽分离株的毒力基因型及毒力基因变异情况,通过PCR扩增S.suis 2毒力基因cps2J、mrp、epf和sly,对这4种毒力基因的扩增片段进行序列测定,并与国内外其他分离株的基因序列进行比较.结果显示,cps2J、mrp、epf和sly基因在19株S.suis 2中的检出率分别为100％、68.4％、68.4％、78.9％;19个受试菌株共分为7个毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/epf+/sly+占57.9％,为优势基因型;S.suis 2安徽分离株4种毒力基因的检测序列之间及其与国内其他地区S.suis 2分离株的相应序列同源性均在99.1％以上,与国外S.suis 2分离株的相应序列同源性在87.8％～100％之间;19株cps2J+菌株中有1株菌cps2J基因序列有变异,13株mrp十菌株中有6株菌mrp基因序列发生变异,检测的epf和sly基因序列没有变异.表明cps2J +/mrp+ /epf+/sly+是S.suis 2安徽分离株优势毒力基因型,检测的S.suis 2安徽分离株cps2J、epf和sly基因部分序列较保守,mrp基因部分序列存在较大的变异. 相似文献
3.
2型猪链球菌分离鉴定及毒力基因检测 总被引：2，自引：0，他引：2
黎敏 《广东畜牧兽医科技》2016,(3):18-20
猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病病原体,对养猪业和公共卫生构成严重威胁。从广东省某猪场发生急性死亡、伴有神经症状的病猪脑组织样品中分离到2株细菌,经培养特性观察、镜检、生化鉴定和PCR检测,确定为具有强毒力分子特征的2型链球菌,其毒力因子基因型均为:cps2J+/mrp+/sly+/epf+/fbps+/orf+/gapdh+/gdh+。 相似文献
4.
猪链球菌扁桃体分离株的毒力因子分布特征与致病性 总被引：6，自引：0，他引：6
本研究设计并合成7对引物,用PCR方法对猪链球菌7种主要毒力因子,包括谷氨酸脱氢酶(gdh)、溶血素(sly)、胞外蛋白因子(ef)、溶茵酶释放蛋白(mrp)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)、三磷酸甘油醛脱氢酶(gadph)和毒力相关序列orf2进行检测,分析了29株猪链球菌扁桃体分离株的毒力因子分布特征.在被检的25株2型菌株中,共检测出7个基因型.其中10株(40%)的基因型为cps2/gdh+/sly+/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+,7株(28%)表现为cps2/gdh+/sly-/ef-/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+,4株(16%)表现为eps2/gdh+/sly-/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orl2+,基因型表现为eps2/gdh+/sly+/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orf2-、cps2/gdh+/sly-/ef-/mrp+/fbps+/gadph+/orf2-、eps2/gdh+/sly-/ef-/mrp*/fbps+/gadph+/orf2+、eps2/gdh+/sly-/ef-/mrp-/fbps-/gadph+/orf2-各1株;1株猪链球菌7型(SS7)分离株,基因型表现为cps7/gdh+/sly+/ef-/mrp-/fbps+/gadph+/orf2+;3株猪链球茵9型(SS9)扁桃体分离株,均表现为cps9/gdh+/sly-/ef-/mrp-/fbps+/gadph+/orf2+.可见我国SS分离株的毒力基因分布较为复杂,而且SS2的优势流行菌株是同时具有多种毒力因子的高致病茵株.通过对不同毒力基因型毒株对西藏小型猪的感染试验发现:毒力基因型为cps2/gdh+/sly-/ef+/mrp+/fbps+/gadph+/orf2+的健康扁桃体分离株SH06-21D对西藏小型猪有较强的致病性,仅次于标准株HA9801,而基因型为sly-/ef-/mrp-/fbps-/gadph+/orf2-的健康扁桃体分离株GZ06-122B对西藏小型猪不表现明显的致病性. 相似文献
5.
《畜牧与兽医》2016,(5):26-31
为了探究猪链球菌(Streptococcus suis,SS)2型菌株中前噬菌体基因与毒力因子分布的关系,利用生物信息学方法预测了19株已全基因测序的SS2中的前噬菌体基因分布,并设计前噬菌体保守基因引物2对,通过PCR检测前噬菌体在101株SS2菌株中的分布,并与毒力因子分布进行比较。结果表明,已全基因测序的猪链球菌2型菌株中,弱毒株含有比强毒株更多的前噬菌体片段。PCR检测显示,14株4种代表性毒力因子(sbp2',mrp,ef,sly)为阴性的菌株中均含有前噬菌体解旋酶基因和末端酶基因,而86株不完全含有这4种代表性毒力因子的菌株中不含有上述前噬菌体基因,说明猪链球菌2型菌株中毒力因子分布与前噬菌体基因分布无明显相关性。 相似文献
6.
7.
猪链球菌2型毒力相关基因在分离株中的分布与突变研究 总被引：1，自引：0，他引：1
猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人畜共患病病原,研究表明其致病力与毒力因子的相关性各有不同。为探究SS2毒力因子与致病性间的相关性,明确毒力因子能否用于致病性的评价,本研究通过PCR方法对来自吉林省9个不同规模和经营模式的猪场临床健康猪群的32株SS2分离菌株和5个强毒参考菌株的毒力相关基因(38KD蛋白、GDH、OFS、SLY、HYL、FBPS、GAPDH、ORF2和Ssn A)进行克隆测序,比较这9个毒力相关基因在该37株SS2分离株中的分布差异和突变情况。结果显示各个毒力相关基因在来自临床健康猪群的32个分离株和5个强毒参考株中呈现不均等的分布,在强毒参考菌株中谷氨酸脱氢酶(GDH)、38KD蛋白、分泌性核酸酶(Ssn A)基因的检测阳性率达到100%,在健康猪群分离株中它们的阳性率也超过90%。纤维蛋白原结合蛋白(FBPS)和溶血素(SLY)基因在强毒参考菌株中阳性率为100%,而在健康猪群分离株中FBPS和Sly基因检测率分别为68.75%和65.63%。透明质酸裂解酶(HYL)基因在两类菌株间阳性率相差较大,在强毒参考株中其阳性率约为60%,在健康猪群分离株中HYL阳性率仅为18.75%。通过测序和Blast比对分析显示,健康猪分离株中毒力相关基因突变情况非常少,而SS2强毒参考株中其突变位点较多,并呈现多种突变方式,GAPDH、HYL、Ssn A基因属于保守序列,突变较少。SLY和GDH基因也是保守序列,在健康猪群分离株中只发现一株无意义突变,但在强毒参考株中却发现多个导致氨基酸改变的突变位点和突变方式。OFS、ORF2和FBPS基因在两组菌中均有突变,但在强毒参考株中存在较多的突变,并且可造成其编码的氨基酸序列改变。提示SS2毒力相关因子复杂,仅仅依据毒力基因是否存在不能判断其毒力的强弱,其突变位点及突变方式对毒力的判断也具有一定的参考意义。 相似文献
8.
根据GenBank上公布的MRP与CPS2J的开放性阅读框保守序列,运用BEACON Desigener 2.0软件设计和合成了2对引物和其相应的荧光探针,优化各个反应物的浓度和实时荧光PCR循环程序,建立从组织中直接检测2型链球菌主要毒力因子MRP与CPS2J的实时荧光PCR方法.双重实时荧光PCR检测2型猪链球菌方法能够从病料中直接检测2型猪链球菌并可以检测出该菌的主要毒力基因MRP,运用该方法可以最低检测到24CFU/mL 2型猪链球菌,并且与其他血清型链球菌和其他病原菌无交叉反应.特异性良好.通过对8个样品在3个不同时间的检测.结果显示该方法的稳定性和重复性均很好. 相似文献
9.
为探究广西部分地区猪链球菌(Streptococcus suis,SS)流行菌株主要血清型及毒力因子分布情况。本试验于2018年1月至2018年6月对从多个猪场采集到的116份疑似链球菌感染的组织病料(脑、肺脏、淋巴结等)进行病原菌检测,采用细菌分离鉴定、形态学观察及PCR扩增等方法对病原菌及其血清型和部分毒力因子进行鉴定。结果显示,116份样品共分离到链球菌32株,阳性率为27.59%(32/116),其血清型主要以SS2和SS9为主,分离率分别为40.63%(13/32)和43.75%(14/32),其他血清型为15.63%(5/32);毒力因子检测结果表明:SLY、MRP、EPF以及SBP2′因子的检出率分别为:81.25%(26/32)、59.38%(19/32)、50.00%(16/32)和71.88%(23/32)。32株链球菌中以SLY^+MRP^+EPF^+SBP2′^+(13株)、SLY^+MRP^-EPF^-SBP2′^-(5株)、SLY^+MRP^+EPF^-SBP2′^+(5株)为主要的毒力基因型,其中SS2均能检测出3个或3个以上的毒力因子。玉林、柳州市主要分布SS9型,南宁、百色市主要分布SS2型;广西不同地区毒力因子的分布情况存在差异且不同血清型或同一血清型的链球菌毒力因子的分布情况也各不相同,其中SS2携带的毒力因子检出率明显高于其他血清型。该研究可为今后猪链球菌疫苗及致病机理研究提供理论依据,为广西地区猪场链球菌血清型疫苗选择提供指导。 相似文献
10.
为探究广西部分地区猪链球菌(Streptococcus suis,SS)流行菌株主要血清型及毒力因子分布情况。本试验于2018年1月至2018年6月对从多个猪场采集到的116份疑似链球菌感染的组织病料(脑、肺脏、淋巴结等)进行病原菌检测,采用细菌分离鉴定、形态学观察及PCR扩增等方法对病原菌及其血清型和部分毒力因子进行鉴定。结果显示,116份样品共分离到链球菌32株,阳性率为27.59%(32/116),其血清型主要以SS2和SS9为主,分离率分别为40.63%(13/32)和43.75%(14/32),其他血清型为15.63%(5/32);毒力因子检测结果表明:SLY、MRP、EPF以及SBP2′因子的检出率分别为:81.25%(26/32)、59.38%(19/32)、50.00%(16/32)和71.88%(23/32)。32株链球菌中以SLY~+MRP~+EPF~+SBP2′~+(13株)、SLY~+MRP~-EPF~-SBP2′~-(5株)、SLY~+MRP~+EPF~-SBP2′~+(5株)为主要的毒力基因型,其中SS2均能检测出3个或3个以上的毒力因子。玉林、柳州市主要分布SS9型,南宁、百色市主要分布SS2型;广西不同地区毒力因子的分布情况存在差异且不同血清型或同一血清型的链球菌毒力因子的分布情况也各不相同,其中SS2携带的毒力因子检出率明显高于其他血清型。该研究可为今后猪链球菌疫苗及致病机理研究提供理论依据,为广西地区猪场链球菌血清型疫苗选择提供指导。 相似文献
11.
12.
为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对检测疑似猪链球菌感染猪临床样品,并与常规细菌分离鉴定方法进行了比对。结果表明成功建立SS种和SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100个CFU,特异性和重复性好;利用该方法对34份临床分离自疑似猪链球菌感染样品的细菌培养物进行了应用检测试验,其中有11份样品为gdh阳性,11份gdh阳性样品中有3份样品同时为SS9阳性。本研究成功建立了SS种与SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,可用于猪链球菌种和SS9型猪链球菌的快速诊断。 相似文献
13.
猪链球菌的鉴定及其主要毒力基因的多重PCR检测 总被引：1，自引：0，他引：1
通过革兰氏染色镜检、生化试验及PCR鉴定,对分离的猪源链球菌进行初步研究.同时根据猪链球菌主要毒力因子基因Sly、MRP、EF的核苷酸序列,设计并合成了3对特异性引物,通过体系和条件优化,建立多重PCR检测方法,对实验菌株及阴性对照菌株进行检测分析.结果从不同地区分离到的30株猪源链球菌中,确认16株为猪链球菌.多重PCR检测结果显示,Sly检出率为5/16,MRP检出率为4/16,EF检出率为2/16,阴性对照菌株毒力因子检测结果均为阴性.分析结果表明,该多重PCR体系可用于猪链球菌毒力相关因子Sly、MRP、EF的基因检测,特异性和敏感性较好. 相似文献
14.
猪链球菌2型的鉴定及其毒力因子检测 总被引：1，自引：0，他引：1
猪链球菌的感染不仅对养猪业造成巨大的损失,同时对公共卫生尤其是相关从业人员的生命造成威胁,严重感染引起死亡.根据参考文献,设计了1对猪链球菌2型特异性引物.对四川分离的7株链球菌、江苏分离的1株、北京分离的6株和菌种中心保存的5株C群马链球菌兽疫亚种、1株D群链球菌、4株R型链球菌、2株S群链球菌和E、F、G、K、L、M、N、O、P群链球菌各1株进行了检测.结果7株四川分离株均为2型;1株江苏分离株为2型;6株北京分离株有3株为2型;1株R群、2株s群链球菌为2型猪链球菌.对检测出的14株猪链球菌2型的毒力因子做进一步检测.MRP基因检出率为92.9%(13/14);EF基因检出率为100%(14/14);sly基因检出率为71.4%(10/14);Cps2A基因检出率为92.9%(13/14);gapdh基因检出率为64.3%(9/14);FBPS基因检出率为92.9%(13/14);orf2基因检出率为71.4%(10/14).毒力因子全为阳性的菌株有6株,MRP-EF+菌株有2株.本研究从259份健康猪扁桃体中分离到16株2型猪链球菌,健康猪带菌率为6.2%(16/259).16株猪链球菌2型中,MRP、EF、Cps2A全为阴性,只从1株2型猪链球菌中检测到了sly基因(1/16);gapdh基因检出率为56.25%(9/16);FBPS基因检出率为75.0%(12/16);Orf2基因检出率为37.5%(6/16). 相似文献
15.
《中国兽医杂志》2015,(4)
为了解猪链球菌及其血清型流行情况,对2010-2012年从河北省各地区临床病死猪分离获得的32株链球菌进行了生物学特性鉴定及血清分型。结果表明,分离的链球菌以兰氏D群为主,占34.4%,其次为C群(18.8%)。利用PCR扩增猪链球菌的种特异性16SrRNA基因以及荚膜多糖cpslI、eps2J、cps7H和eps9H基因,对32株链球菌分离株进行猪链球菌种的鉴定和分型。结果显示,属于猪链球菌的为16株,其中猪链球菌2型(SS2)为56.25%(9/16),SS7占6.25%(1/16),SS9占12.5%(2/16),其他血清型占25%(4/16)。 相似文献
16.
从送检的非法屠宰的猪肉中分离到1株链球菌,结合其培养特性、生化特性、血清定型、PCR鉴定、动物实验等对其进行了鉴定。用国际通用的链球菌乳胶分型诊断液检测,结果表明其不属于链球菌兰氏分群的A～G群。但它凝集猪链球菌2型标准阳性血清,三重PCR扩增及测序结果表明其为猪链球菌2型。分离菌具有猪链球菌2型的CPS、MRP、EPF、SLY、ORF2五种主要毒力因子;将分离株人工静脉注射新西兰兔4只,均在12～24h均死亡,腹腔注射8只BALB/c小鼠后,3周内死亡5只,3只未死亡。 相似文献
17.
《中国兽医学报》2017,(6):1092-1097
为了解广州周边地区健康猪群猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的携带情况,本研究于2014-2015年在广州周边地区共采集488份屠宰猪群扁桃体样品和健康猪群鼻拭子样品,SS分离鉴定发现有165份样品为SS 16S rRNA阳性,共分离到68株SS菌株,对所分离的菌株进行血清型分型和3个常用毒力标记基因mrp,epf,sly的检测分析。结果显示:所采集样品SS的阳性率为33.81%(165/488),其中哺乳仔猪的鼻拭子样品的携带率最高68%(34/50),母猪次之为49.15%(29/59);对分离的68株SS进行血清型定型,定型率为73.52%(50/68),主要分布于16型,2型(1/2型),29型等16个血清型中;毒力基因在本批菌株中分布较少。本研究为监控广州周边地区SS的流行情况提供了试验参考数据。 相似文献
18.
猪链球菌1、7、9型多重PCR诊断方法的建立及初步应用 总被引：3，自引：3，他引：0
为了建立猪链球菌（Streptococcus suis,SS）1、7、9型（SS1、SS7、SS9）的快速鉴别诊断和分型方法,本研究根据GenBank已登录的SS1型特异性的CPS1I基因、7型CPS7H基因、9型CPS9H基因设计引物,以标准SS1、SS7、SS9株基因组DNA为模板,建立了SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的多重PCR检测方法对11份猪链球菌的临床分离纯化菌株进行了的应用检测。结果表明,成功建立了SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100 CFU/mL,特异性和重复性好;利用多重PCR检测方法对11份猪链球菌临床分离纯化菌株检测结果表明,11份样品中有3份样品为SS9阳性、2份样品为SS7阳性、1份样品为SS1阳性。本研究为临床上SS1、SS7、SS9的快速鉴别诊断提供了一种新方法。 相似文献
19.
为了解广西部分地区(玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市)猪群中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)毒力基因的流行情况和毒力水平,试验采用PCR方法检测分离到的201株(经鉴定猪链球菌2&1/2型24株,猪链球菌7型2株,猪链球菌9型15株,一共41株)猪链球菌的毒力基因orf2、sly、ef和mrp,并通过斑马鱼模型筛选毒力较强的菌株,测定菌株的半数致死剂量(LD50)。结果表明：从广西部分地区分离的201株猪链球菌的4种毒力基因携带率从高到低依次为orf2(85.6%,172/201)>sly(55.2%,111/201)>ef(33.8%,68/201)>mrp(26.4%,53/201);6个市县主要流行的毒力基因不同,玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市分离的猪链球菌携带最多的毒力基因分别为orf2(100%)、orf2(89.2%)、orf2(91.5%)、ef(44.4%)、orf2(86.7%)、orf2(40.0%);经鉴定分型的41株猪链球菌中,有7株(17.1%,7/41)同时携... 相似文献
20.
猪链球菌2型江苏分离株溶血素基因检测及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
根据猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）溶血素基因（sly）设计和合成了一对可扩增其完整阅读框的引物，对HA9801等6株猪链球菌2型江苏分离株，1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株ATCC35246的核酸进行PCR扩增，结果显示HA9801等6株江苏分离株及德国株SS2呈阳性．ATCC35246呈阴性。HA9801株PCR产物纯化后测序．序列分析表明该DNA片段与猪链球菌2型1933株的sly基因同源性为99％。 相似文献