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《畜牧与兽医》2020,(8)
针对由于鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)不同毒株(针对TS-11、6/85、F株疫苗株和S6、R株野毒株)的特定序列,设计出特异性检测引物,对临床免疫MG疫苗株TS-11的鸡群以及父母代(A~H场)鸡群和祖代(I场)鸡群采集毛蛋气囊拭子,A场父母代种鸡群和I场祖代鸡群同时采集咽喉拭子进行MG的PCR鉴别诊断,对临床送检免疫6/85的客户鸡群(J场)采集病料,F株疫苗株进行MG的鉴别诊断,同时采集SPF鸡群咽喉拭子作为阴性对照群,验证该鉴别引物的特异性。结果显示:鉴别引物具有非常好的特异性,SPF鸡群MG的检测均为阴性,不存在假阳性的弊端;临床免疫MG疫苗株6/85的鸡群(J场)存在MG野毒株S6的感染,在免疫后1个月左右采集病料中仍能检出MG 6/85疫苗株。对免疫TS-11的父母代种鸡群(A~H场)和祖代种鸡群(I场)死亡的毛蛋气囊拭子,用PCR检测MG阳性率,结果显示:祖代鸡群(I场)后代死亡的毛蛋气囊评估结果为优,毛蛋气囊拭子MG的PCR鉴别引物检测均为阴性;而父母代鸡群后代死亡的毛蛋气囊从50周龄开始出现浑浊,MG的PCR鉴别引物可同时检出TS-11疫苗毒和野毒株,部分鸡群同时存在R株和S6株两种野毒感染;采集A场父母代种鸡群的咽喉拭子和后代啄壳死亡毛蛋气囊拭子,PCR检测结果显示种鸡群和后代可同时检出野毒株S6和疫苗株TS-11。这表明种鸡群MG的感染,可通过垂直传播感染其后代。本研究设计的MG鉴别引物,可将不同MG疫苗株(TS-11、F株、6/85)与野毒株(S6株、R株)区分,为临床MG的鉴别诊断和种鸡群的MG感染状态评估提供积极的指导意义。 相似文献
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为了解不同鸡群传染性贫血病病毒(CIAV)感染情况及禽用弱毒疫苗中CIAV的污染情况,利用常规PCR、nested-PCR、PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR等不同核酸检测方法对近两年企业送检的11批次525份临床病料以及13批次125份疫苗样品进行了检测。结果显示:Nested-PCR灵敏度最高,从送检的病料样品中检测出CIAV阳性率为11.2%(59/525),疫苗样品中检测出CIAV阳性率为4.8%(6/125),PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR与Nested-PCR检出率基本一致,但常规PCR检出率明显低于其他三种。 相似文献
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实时荧光定量PCR技术是一种通过检测荧光信号的变化进行核酸定量的技术.目前,该技术已经应用于病原微生物、基因表达、基因组变异和多态性检测等许多方面.它的出现极大地克服了原有PCR技术存在的不足如交叉污染等问题,具有实时监测、快速、灵敏、精确等特点.本文综述了目前几种荧光定量PCR技术的基本原理及其在畜牧兽医中的应用. 相似文献
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荧光定量PCR技术及其在动物传染病定量检测中的应用 总被引:11,自引:0,他引:11
荧光定量PCR是近年发展起来的一 种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核 酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR 技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量 PCR的核心。目前报道的荧光探针主要有 TaqMan、Amplisensor、分子信标、Lightcycler 以及在这4种探针基础上发展起来的其他荧 光探针。各种荧光探针在定量PCR中的作 用是识别和报告特定核酸。这些荧光探针与 相应的靶分子杂交时经历一个自发荧光形成 或消失的构象变化,只有与完全互补的靶核 酸杂交时才会出现这种变化,当靶核酸存在 碱基错配或缺失时,荧光探针就不会与之杂 交,也不会出现荧光的变化。在检测时根据 这种荧光变化来确定检测中特定核酸的存在 和量的多少。荧光探针用于定量PCR不但 提高了PCR的检测灵敏度,还能在同一封闭 管中对模板进行准确定量检测,特别适合特 定核酸扩增的实时监测。荧光定量PCR用 于动物传染病的诊断,不但能定量检测病原 体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵 敏、快速、省力的特点。 相似文献
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应用三重聚合酶链反应同时检测NDV、IBV、MG的研究 总被引:14,自引:1,他引:13
本文建立了一种同时检测NDV、IBV和MG三种病原体的三重PCR技术。根据NDV、IBV和MG的基因文库,设计了三对分别与测NDV、IBV和MG某段基因序互补的引物,用这三对引物对同一样品中的测NDV、IBV、MG核酸模进行多重PCR扩增。结果均同时得到了三条特异性大小与实验设计相符的310bp(NDV)、1720bp(IBV)和732bp(MG)多重PCR扩增带,而对其他6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,多重PCR技术能检出10pg的IBV、1pg的NDV RNA模板和1pg的MG DNA模板。 相似文献
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山东益生种畜禽公司于2016年从法国引进4 000套哈伯德白羽肉鸡曾祖代,鉴于国内鸡群的支原体感染率较高,为保障曾祖代鸡群的阴性状态,单独设计了严格的生物安全隔离与多项控制措施,并持续进行血清学和病原学跟踪监测评估。曾祖代种鸡群未免疫鸡毒支原体(MS)疫苗,监测MS血清抗体和种鸡咽喉拭子;因免疫过鸡滑液囊支原体(MG)弱毒和灭活疫苗,无法通过检测血清抗体和种鸡咽喉拭子来评估鸡群MG感染状态,而采用PCR方法检测后代雏鸡和孵化后啄壳死亡毛蛋的气囊拭子进行评估。从1~58周龄共采集血清19次,合计1 140份样品,结果显示MS抗体检测均为阴性。在4~58周龄期间,2个鸡舍共采集14次,合计840份咽喉棉拭子,PCR扩增MS病原均为阴性。为了评估MS和MG的垂直传播,采集和观察30~55周龄期间9批270只1日龄的后代雏鸡气囊,同时采集后代孵化后啄壳死亡的313个毛蛋的气囊,雏鸡和毛蛋均未发现气囊浑浊现象,MS和MG PCR检测也均为阴性。在整个约60周的生产期中鸡群一直保持MS和MG无感染状态。结果表明,在国内的环境条件下,只要采取严格的生物安全隔离预防措施,种鸡群可完全实现并维持MS和MG净化状态。 相似文献
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为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法,试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针;人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列,并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和MSvlhA,测序正确后作为标准质粒;优化反应条件建立了MG和MS的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法,对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果显示,该方法特异性良好,与其他常见鸡病原不发生交叉反应,检测MG-pvpA、MS-vlhA的灵敏度分别达到1.58×101拷贝/μL、1.21×101拷贝/μL,批内与批间的变异系数均小于2%,从36份临床样品中分别检出MG和MS阳性样品11份、8份,与商品荧光PCR试剂盒符合率达到100%。研究表明建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、敏感性高,可用于检测临床样品,快速准确地鉴别MG和MS,有利于鸡群中支原体的监测和净化。 相似文献
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研究根据基因库中鸡毒支原体(MG)S6毒株和F株的基因保守序列,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的二重荧光定量PCR检测方法,与其它禽类呼吸道病原体无交叉反应,对MG模板的灵敏度检测限为10拷贝/μL,对MG强弱毒模板以不同的浓度进行组合,仍可有效地检测到毒株,批内和批间重复变异系数小,特异性强、灵敏度高、稳定性好。研究建立的二重荧光定量PCR方法可用于MG强、弱毒株的鉴别检测,为该病的防控与净化提供良好工具。 相似文献
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实时荧光定量PCR技术是一种通过检测PCR荧光信号的变化进行核酸定量的技术。目前,该技术已经应用于病原微生物、基因表达、基因组变异和多态性检测等许多方面。本文综述了定量PCR技术的基本原理及其在动物营养中的应用。 相似文献
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新城疫是养禽生产中的常见病、多发病,对鸡群的影响比较大,传统上我们一般通过临床表现和剖检变化对其做出诊断,近年来随着科技的不断发展,实时荧光定量PCR技术也为大家所熟知和掌握,本文就一例采用实时荧光定量PCR技术诊断新城疫的过程进行介绍。 相似文献
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用MG进口灭活苗于14、42、125日龄三次接种MG阳性种鸡群,对种鸡群进行净化,使1日龄雏鸡MG分离率由亲代的20.6%下降到下代的3.8%。证明用MG灭活苗接种种鸡群进行净化MG是可行的措施。 相似文献
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